陳琇萌，俞小敏*，肖潔

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東廣州510120）

尿毒清顆粒抑制大鼠腎臟間質(zhì)纖維化作用靶點(diǎn)研究

陳琇萌，俞小敏*，肖潔

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，廣東廣州510120）

目的研究尿毒清抑制大鼠腎臟間質(zhì)纖維化的作用。方法采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)制備腎間質(zhì)纖維化大鼠模型，將10周齡SPF級(jí)雄性大鼠60只，隨機(jī)分3組：假手術(shù)(Sham，n=20)、模型組(UUO，n=20)和尿毒清治療組（UNQ，n=20）；UNQ組于于術(shù)前1天給予尿毒清2 g/（kg·d）灌胃，假手術(shù)組及模型組每天灌胃等量生理鹽水，各組分別于術(shù)后第3、7、14天處死5只大鼠，取梗阻側(cè)腎臟進(jìn)行組織學(xué)檢查，對(duì)腎間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)、腎小管萎縮和腎間質(zhì)纖維化情況進(jìn)行半定量評(píng)分；采用免疫組化、ELISA和Western Blot分別分析腎組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、纖粘連蛋白(FN)表達(dá)。結(jié)果與Sham相比，UUO大鼠各時(shí)間點(diǎn)的病理?yè)p害進(jìn)行性加重，腎小管間質(zhì)中TGF-β1、FN表達(dá)均增高(P＜0.05)。與UUO相比，尿毒清治療后3 d，可觀察到大鼠的腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、腎小管萎縮及腎間質(zhì)纖維化(P＜0.05)明顯減輕,同時(shí)腎組織中TGF-β1表達(dá)減少(P＜0.05)；治療后7 d，上述治療作用持續(xù)存在,同時(shí)進(jìn)一步使UUO大鼠腎間質(zhì)的FN表達(dá)下降(P＜0.05)；治療14 d后,腎間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)情況評(píng)分（CIS）和慢性病變(包括腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化)評(píng)分（AFS）較UUO組分別下降22.2%和19.1%(P＜0.05)，TGF-β1、FN的表達(dá)則較UUO組分別減輕30.8%和30%(P＜0.05)。結(jié)論尿毒清的保護(hù)作用表現(xiàn)在腎損傷的開(kāi)始就通過(guò)減少TGF-β1表達(dá)從而使腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)受到抑制，同時(shí)還能減少病變腎組織細(xì)胞外基質(zhì)的積聚，從而減輕腎間質(zhì)纖維化。

尿毒清顆粒;腎臟間質(zhì)纖維化;TGF-β1;單側(cè)輸尿管梗阻模型

本文引用：陳琇萌，俞小敏，肖潔.尿毒清顆粒抑制大鼠腎臟間質(zhì)纖維化作用靶點(diǎn)研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（1）：33-37.

腎間質(zhì)纖維化是各種不同原因的慢性腎臟病進(jìn)展至終末期腎病的共同病理過(guò)程。腎功能的惡化，很大程度上取決于腎小管間質(zhì)纖維化的程度。單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型是以進(jìn)行性小管間質(zhì)纖維化為特征的實(shí)驗(yàn)性腎病模型，為目前常用的腎間質(zhì)纖維化模型[1]。目前研究認(rèn)為，腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)促使腎間質(zhì)纖維化，而EMT受多種細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和激素的調(diào)節(jié)，其中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）是最重要的促纖維化因子，主要通過(guò)誘導(dǎo)其下游因子表達(dá)，啟動(dòng)并調(diào)節(jié)EMT的全過(guò)程，使細(xì)胞外基質(zhì)顯著增多。纖連蛋白(FN)是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的一種重要成分。ECM合成增多、降解減少，進(jìn)而過(guò)度沉積導(dǎo)致了腎間質(zhì)的纖維化[2-3]。尿毒清膠囊主要成分是大黃、黃芪、丹參、苦參、白術(shù)、茯芩、白芍、制何首烏、丹參、車前草等，是經(jīng)過(guò)多年臨床驗(yàn)證對(duì)慢性腎功能衰竭患者具有良好療效的純中藥制劑。本研究通過(guò)建立UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化模型,動(dòng)態(tài)觀察腎臟間質(zhì)纖維化的病理改變過(guò)程及尿毒清對(duì)該過(guò)程的影響,探討尿毒清抗腎臟間質(zhì)纖維化的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

尿毒清顆粒(規(guī)格:5g)購(gòu)自內(nèi)蒙古康臣藥業(yè)（批號(hào)20130704）；10周齡SPF級(jí)雄性大鼠60只，200-250 g,廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證：SYXK（粵）2010-0104；兔抗大鼠TGF-β1、FN抗體購(gòu)自Santa Cruz公司（批號(hào)sc-62839）,GDPDH抗體購(gòu)自Biodesign公司,TGF-β1 ELISA試劑盒購(gòu)自深圳晶美公司。主要儀器有：病理圖像分析系統(tǒng)(Kodak公司)、電泳儀(Amersham公司)、酶標(biāo)儀(Bio-Rad公司)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與模型建立實(shí)驗(yàn)鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham，n=20）、模型（UUO，n=20）和模型+治療組（UNQ，n=20）。所有大鼠在SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室7 d適應(yīng)。10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）腹腔麻醉，仰臥腹部正中切口2.5～3.5 cm，鈍性分離暴露左側(cè)腎盂輸尿管連接部，在其下方1 cm處游離5 mm輸尿管，用4～0線沿上端結(jié)扎兩道，在兩結(jié)扎點(diǎn)之間剪

斷輸尿管,然后逐層縫合，制備UUO模型。假手術(shù)組僅游離左側(cè)輸尿管但不結(jié)扎。

1.2.2 數(shù)據(jù)收集尿毒清按55-65 kg成人量15 g/d，折算尿毒清為0.23～0.27 g/(kg·d)，大鼠為人體劑量的9～10倍給藥，配成1.0 g/mL藥液，分上午、下午兩次給藥。UNQ組于術(shù)前1天予尿毒清2 g/(kg·d)灌胃，Sham組及UUO組每天灌胃等量生理鹽水，各組分別于術(shù)后3、7、14 d下午處死5只大鼠。切除左腎，冷鹽水洗凈，留取腎門處橫斷面組織，用于免疫組化染色；剩余腎組織迅速置液氮保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 腎臟組織病理學(xué)檢查及評(píng)分腎組織予HE和Masson染色，隨機(jī)選取互不重疊10個(gè)視野400倍顯微鏡下觀察,按下列標(biāo)準(zhǔn)對(duì)腎臟病理改變進(jìn)行評(píng)分：腎間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分(cell infiltration score, CIS)：無(wú)間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)為0分、局灶細(xì)胞浸潤(rùn)1分、多灶細(xì)胞浸潤(rùn)2分、彌漫細(xì)胞浸潤(rùn)3分；包括腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化的慢性病變?cè)u(píng)分(atrophy and fibrosis score,AFS)：按病變面積占該視野的百分比計(jì)算，間質(zhì)纖維化:無(wú)計(jì)0分、小于25%計(jì)1分、25%～50%計(jì)2分、大于50%計(jì)3分；腎小管萎縮:無(wú)計(jì)0分、小于25%計(jì)1分、25%～50%計(jì)2分、大于50%計(jì)3分。腎小管間質(zhì)損傷程度由各評(píng)分均值表示。

1.3.2 免疫組織化學(xué)染色TGF-β1:石蠟切片大鼠腎組織3 μm厚脫蠟水化后，用0.3%過(guò)氧化氫-甲醇滅酶，微波修復(fù)，再用2%牛血清蛋白封閉20 min后加抗TGF-β1抗體(1∶200)4℃過(guò)夜；再加生物素標(biāo)記二抗(1∶200)37℃30 min、辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素(1∶200)37℃30 min，最后DAB顯色。陰性對(duì)照用PBS代替一抗。FN應(yīng)用胃蛋白酶修復(fù)后，其染色步驟與TGF-β1相似,使用的抗纖連蛋白抗體濃度為1∶50。

1.3.3 ELISA分析TGF-β1表達(dá)取出液氮中的腎組織放入RIPA緩沖液中，再冰上研磨直至組織完全溶解；在4℃中孵育60 min后在同一溫度下14 000×g離心30 min；取出上清液，組織勻漿中的蛋白質(zhì)濃度和TGF-β1濃度分別用勞馬斯亮藍(lán)法和ELISA法測(cè)定，校正用樣品中的總蛋白濃度，TGF-β1水平用ng/g蛋白表示。

1.3.4 WesternBlot分析FN表達(dá)方法參照參考文獻(xiàn)[4]，將上述腎組織勻漿煮沸變性后按200 mg蛋白/孔上樣，使用7.5%SDS-PAGE膠電泳后轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶封閉，加入抗纖連蛋白抗體和抗GAPDH抗體（1∶1 000）過(guò)夜,最后用辣根酶標(biāo)記二抗（1∶5 000）顯影，以GAPDH作為內(nèi)參照。分析纖連蛋白及GAPDH電泳條帶曝光強(qiáng)度使用圖像分析軟件，用對(duì)應(yīng)相對(duì)豐度的比值表示纖連蛋白表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 尿毒清對(duì)腎臟組織病理變化的影響

光鏡下（圖1-2），Sham組空泡變性在腎小管上皮細(xì)胞偶見(jiàn)，腎間質(zhì)有單核細(xì)胞灶狀浸潤(rùn)。UUO組在造模后第3天出現(xiàn)擴(kuò)張的腎小管及空泡變性的小管上皮細(xì)胞；腎間質(zhì)可見(jiàn)水腫及多個(gè)灶狀的細(xì)胞浸潤(rùn)和增生的梭形核細(xì)胞，腎間質(zhì)有輕微纖維化改變。第7天時(shí)擴(kuò)張的腎小管及空泡變性的小管上皮細(xì)胞更明顯，腎間質(zhì)出現(xiàn)水腫、細(xì)胞呈彌漫性增生并有局灶的纖維化。第14天腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)彌漫萎縮，腎間質(zhì)可見(jiàn)細(xì)胞浸潤(rùn)減輕而成纖維細(xì)胞明顯增生，腎間質(zhì)出現(xiàn)明顯的纖維化生；但腎小球均則未見(jiàn)明顯病變。與UUO組比較，尿毒清治療后腎組織形態(tài)學(xué)變化均明顯減輕但依然存在；UNQ組第3天CIS和AFS分別減少33.5%和41.9%(P＜0.05)；第7天時(shí)CIS和AFS分別下降26.2%和20.83%(P＜0.05)；在第14天時(shí)CIS和AFS分別下降22.2%和19.1%(P＜0.05)(表1-2)。

圖1 假手術(shù)組、模型組和尿毒清治療組7、14 d腎間質(zhì)纖維化改變(HE染色，×200)

圖2 假手術(shù)組、模型組和尿毒清治療組7、14 d腎間質(zhì)纖維化改變(Masson染色，×200)

2.2 尿毒清對(duì)腎組織TGF-β1表達(dá)的影響

如圖3示，Sham組可見(jiàn)TGF-β1偶見(jiàn)在腎小球微弱表達(dá)。UUO組在造模后第3天就可見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞擴(kuò)張，腎間質(zhì)有少量散在的細(xì)胞浸潤(rùn)和TGF-β1高的表達(dá)，第7天時(shí)腎小管表達(dá)TGF-β1的數(shù)量明顯增多，TGF-β1表達(dá)的強(qiáng)度也明顯增高；到第14天TGF-β1表達(dá)仍繼續(xù)增高。在UNQ組，第3、7、14天見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞擴(kuò)張，細(xì)胞內(nèi)散在表達(dá)TGF-β1且強(qiáng)度較低，腎間質(zhì)偶見(jiàn)單核細(xì)胞浸潤(rùn)。腎組織勻漿中的TGF-β1蛋白水平用ELISA方法測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表3），Sham組TGF-β1水平在各時(shí)間點(diǎn)比較一致。UUO組的TGF-β1在第3天開(kāi)始就和Sham組有差異，第7、14天表現(xiàn)為逐漸增高(P＜0.05)，在第3、7、14天分別是同期Sham組的1.81、2.35、2.62倍(P＜0.05)。UNQ組TGF-β1水平表現(xiàn)為持續(xù)增高趨勢(shì)，第14天時(shí)是Sham組的1.81倍(P＜0.05)，但與UUO組比較TGF-β1水平在各時(shí)間點(diǎn)都表現(xiàn)為降低，分別降低48.1%、33.6%和30.8% (P＜0.05)。

表1 各組大鼠腎間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分（±s，n=5）

表1 各組大鼠腎間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分（±s，n=5）

注:與Sham組比較△P＜0.01;與UUO組比較▲P＜0.05;與3 d組比較★P＜0.05;與7 d組比較#P＜0.05。

組別3 d7 d14 dFP Sham0.10±0.230.15±0.18★0.10±0.11★#23.5260.012 UUO1.86±0.42△2.01±0.44△★3.03±0.34△★#15.1270.00 UNQ1.24±0.28△▲1.48±0.32△▲★2.34±0.26△▲★#10.2070.017 F18.8925.922.62 P0.000.000.00

表2 各組大鼠腎間質(zhì)纖維化評(píng)分（±s，n=5）

表2 各組大鼠腎間質(zhì)纖維化評(píng)分（±s，n=5）

注:與Sham組比較△P＜0.01;與UUO組比較▲P＜0.05;與3 d組比較★P＜0.05;與7 d組比較#P＜0.05。

組別3 d7 d14 dFP Sham0.00±0.000.10±0.09★0.05±0.12★#34.210.015 UUO1.34±0.28△3.56±0.23△★4.73±0.15△★#50.840.00 UNQ0.78±0.16△▲2.81±0.18△▲★3.85±0.12△▲★#45.260.00 F21.3530.1235.49 P0.000.000.00

圖3 假手術(shù)組（A）、模型組（B）和尿毒清治療組（C）14 d時(shí)TGF-β1表達(dá)(免疫組化×200)

表3 尿毒清對(duì)腎組織中TGF-β1表達(dá)的影響(±s,ng/g)

表3 尿毒清對(duì)腎組織中TGF-β1表達(dá)的影響(±s,ng/g)

注:與Sham組比較△P＜0.01;與UUO組比較▲P＜0.05;與7 d組比較★P＜0.05。

組別3 d7 d14 dFP Sham96.6±40.3588.52±50.3392.51±20.52 UUO174.82±50.15△208.02±59.25△242.38±62.45△★28.850.00 UNQ90.73±25.65▲138.12±35.89▲167.72±31.72▲★33.210.017 F29.55125.34217.231 P0.0000.0000.000

2.3 尿毒清對(duì)腎組織FN表達(dá)的影響

對(duì)FN的觀察發(fā)現(xiàn)(圖4):Sham組腎間質(zhì)FN的表達(dá)為偶發(fā)、散在,腎小球和腎小管基底膜則表達(dá)輕微。UUO組FN主要表達(dá)在腎間質(zhì)發(fā)生纖維化病變的區(qū)域，表達(dá)隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng)；FN在UNQ組與UUO組表達(dá)的部位相似，但前者的表達(dá)量顯著減少。腎臟組織勻漿用Westernblot檢測(cè)FN表達(dá)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)（圖5），Sham組未能檢測(cè)到FN表達(dá)；UUO和UNQ兩組在第3、7、14天檢測(cè)到FN的表達(dá)均比Sham組的高，其中與UUO組比較，UNQ組在第7、14天FN的表達(dá)明顯下降,分別為下降了45%和30%(P＜0.05)。

圖4 假手術(shù)組(A)、模型組(B)和尿毒清治療組(C)14 d時(shí)FN表達(dá)(免疫組化×200)

圖5 Westernblot分析FN在各組大鼠的表達(dá)電泳圖（上）及柱形圖（下）

3 討論

尿毒清顆粒含大黃、黃芪，研究發(fā)現(xiàn)大黃、黃芪有拮抗大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用[5]。臨床觀察表明尿毒清顆粒有保護(hù)腎功能的作用。為探討尿毒清在發(fā)病時(shí)究竟何時(shí)發(fā)揮保護(hù)作用以及其可能的主要作用點(diǎn),我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)中選用UUO大鼠模型進(jìn)行了相關(guān)研究。UUO模型被認(rèn)為是理想的腎間質(zhì)纖維化模型。尿路梗阻導(dǎo)致輸尿管內(nèi)壓升高，腎臟有效血流明顯減少，腎素-血管緊張素系統(tǒng)和腎間質(zhì)內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的活化，致使白細(xì)胞、單核細(xì)胞在腎組織里浸潤(rùn)，并釋放出能夠破壞腎系膜細(xì)胞、小管上皮細(xì)胞、間質(zhì)成纖維細(xì)胞及結(jié)構(gòu)的各種酶和因子，從而導(dǎo)致腎臟間質(zhì)出現(xiàn)纖維化[6-7]。另外，激活的單核巨噬細(xì)胞與同樣激活的腎小管上皮細(xì)胞相互影響,導(dǎo)致腎組織TGF-β等激活[8]，與之相關(guān)的多種因子分泌升高，腎臟間質(zhì)出現(xiàn)大量的炎癥細(xì)胞，使得ECM的合成增加，腎臟間質(zhì)纖維化發(fā)生；腎臟病理檢查為小球大致正常而小管細(xì)胞表現(xiàn)為萎縮、間質(zhì)表現(xiàn)為纖維化生[6-7,9]。在本研究中，動(dòng)態(tài)觀察了UUO組造模后第3、7、14天的腎臟病理改變，發(fā)現(xiàn)造模后腎小管間質(zhì)的受損呈進(jìn)行性加重，到第14天顯著地表現(xiàn)為腎小管細(xì)胞萎縮、腎間質(zhì)纖維化生。上述一系列的改變跟文獻(xiàn)報(bào)告的UUO模型病變特點(diǎn)一致。經(jīng)尿毒清治療后，鏡下檢查可見(jiàn)，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞明顯減少，同時(shí)腎小管細(xì)胞萎縮和間質(zhì)纖維化生程度也顯著減輕。本研究提示尿毒清的腎臟保護(hù)作用，在腎臟纖維化病變的發(fā)生過(guò)程中持續(xù)存在，且在該變化之前就已開(kāi)始減輕腎組織的炎癥反應(yīng)。TGF-β1是由浸潤(rùn)到腎臟局部的單核巨噬細(xì)胞以及腎臟活化的固有細(xì)胞分泌，是致使ECM合成的細(xì)胞因子，在致病因素作用下會(huì)過(guò)度表達(dá)，從而使腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。研究證實(shí)，TGF-β1除了可以激活間質(zhì)成纖維細(xì)胞外，還通過(guò)Smad蛋白家族傳遞信號(hào)，從而增加ECM如FN的合成[10]。有文獻(xiàn)報(bào)道，UUO制模10 h，就可以在梗阻側(cè)的腎臟檢測(cè)到TGF-β1mRNA開(kāi)始增加,隨后TGF-β1mRNA仍一直升高[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，與UUO組比較，UNQ組造模后第3天就可見(jiàn)腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)減少, TGF-β1表達(dá)因受到抑制而減少，在第7天及第14天該作用持續(xù)存在；從第7天開(kāi)始FN表達(dá)顯著下降，到第14天該表現(xiàn)仍持續(xù)存在，提示在梗阻性腎病的發(fā)展過(guò)程中尿毒清可能通過(guò)抑制EMT合成，或者下調(diào)TGF-β1表達(dá)從而減輕腎間質(zhì)纖維化。

綜上所述，在UUO模型中，尿毒清在病變開(kāi)始就通過(guò)減輕炎癥反應(yīng)和減少TGF-β1分泌而使轉(zhuǎn)分化的腎臟細(xì)胞減少，最后腎間質(zhì)纖維化減輕，從而發(fā)揮其腎臟保護(hù)作用，該作用的高峰時(shí)間是在造模后7天。這些結(jié)果提示，今后研究尿毒清的腎臟保護(hù)作用機(jī)制可能應(yīng)把重點(diǎn)放在發(fā)病的早期。

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（本文編輯 楊瑛）

Study on the Target of Niaoduqing Granule Inhibiting Renal Interstitial Fibrosis in Rats

CHEN Xiumeng,YU Xiaomin*,XIAO Jie
(Division of Nephrology,the First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College,Guangzhou,Guangdong 510120,China)

ObjectiveTo investigate the effect of Niaoduqing granule on renal interstitial fibrosis in rats.MethodsThe renal interstitial fibrosis rat models were built by unilateral ureteral obstruction(UUO).Ten weeks old male rats(n=60)were randomly divided into sham-operated group(Sham,n=20)，model group(UUO,n=20)and UUO treated with Niaoduqing group (UNQ,n=20).The rats in UNQ were treated with 2 g/kg·d Niaoduqing by gastric gavage on one day before the operation.The Sham and UUO groups were given a gavage of same volume normal saline every day.Five rats in each group were sacrificed on 3,7 and 14 days after surgery.The renal tubular interstitial fibrosis lesion and the expression of TGF-β1 and FN were detected by pathdogical examine and immunohistochemistry and ELISA and Western Blot.ResultsCompared with the Sham group,the number of infiltrated inflammatory cells in renal interstitial and the score of renal interstitial fibrosis was aggravated,TGF-β1 and FN expression were gradually increased in UUO group(P＜0.05).Compared with the UUO group, the number of infiltrated inflammatory cells in renal interstitial and the score of renal interstitial fibrosis was fewer(P＜0.05) and the expression of TGF-β1 was dexreased(P＜0.05).After 7 days of treatment,the expreesion of FN in renal interstitium of UUO rats was decreased(P＜0.05).After 14 days of treatment,the scores of cell infiltration and chronic lesions in renal interstitium had a decline of 22.2%and 19.1%than UUO group(P＜0.05),while the expression of TGF-β1 and FN was decreased 30.8%and 30%than UUO group(P＜0.05).ConclusionNiaoduqing prevent renal disease progression in early stage by downregulating the expression of TGF-β1 and FN,and inhibit infiltration of inflammatory cell，transdifferentiation of renal tubule cell，extraeellular matrix accumulation and interstitial fibrosis.

Niaoduqing granule;renal interstitial fibrosis;TGF-β1;unilateral ureteral obstruction

R285.5;R692

A

2016-06-09

廣東省中醫(yī)藥局資助項(xiàng)目(20131272)。

陳琇萌，女，副主任醫(yī)師，研究方向：慢性腎臟病診治。

*俞小敏，女，主任醫(yī)師，E-mail:yxm.s@126.com。