劉恒濤

地黃飲子治療對(duì)腦缺血大鼠行為學(xué)評(píng)分的影響

劉恒濤

目的 觀察地黃飲子治療對(duì)腦缺血大鼠的行為學(xué)評(píng)分的影響。方法 選取清潔級(jí)大鼠80只，隨機(jī)分為地黃飲子組、尼莫地平組、缺血組、對(duì)照組，各20只。10%水合氯醛麻醉，暴露并鉗夾雙側(cè)頸總動(dòng)脈40 min，造模使大鼠急性腦缺血。地黃飲子組：造模后每日灌服地黃飲子湯36 g/kg。尼莫地平組：造模后每日灌服尼莫地平12.5 mg/kg，缺血組：造模后每日灌服生理鹽水1次。對(duì)照組：正常飲食。連續(xù)3周。分別在實(shí)驗(yàn)的第1周、第2周、第3周檢測(cè)Longa評(píng)分、Berderson評(píng)分和腦腦梗死面積。結(jié)果 對(duì)照組Longa評(píng)分、Berderson評(píng)分和梗死面積為0分。地黃飲子組Longa評(píng)分、Berderson評(píng)分和腦梗死面積均明顯低于缺血組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，尼莫地平組Longa評(píng)分、Berderson評(píng)分和梗死面積與缺血組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 地黃飲子能夠修復(fù)腦缺血再灌注損傷，抗氧化作用，減少細(xì)胞凋亡，修復(fù)神經(jīng)元，提高學(xué)習(xí)記憶功能。

腦缺血；地黃飲子；行為學(xué)；中風(fēng)

腦缺血在臨床上較為常見，若控制不好，發(fā)展為腦缺血性中風(fēng)常導(dǎo)致殘疾和死亡，直接影響病人的生活質(zhì)量。腦缺血時(shí)大腦神經(jīng)受到損傷，神經(jīng)生長(zhǎng)因子受到抑制，缺血區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞減少，神經(jīng)功能缺失[1-2]。“毒損腦絡(luò)”是中醫(yī)對(duì)中風(fēng)理論的新學(xué)說，認(rèn)為由于毒邪損傷了腦絡(luò)導(dǎo)致中風(fēng)發(fā)作，絡(luò)脈破損或拘攣瘀閉，由氣血滲灌失常導(dǎo)致[3]。中藥地黃飲子具有驅(qū)毒化瘀、滋腎陰、補(bǔ)腎陽的功效。近年來，缺血性腦血管病發(fā)病率極高，在腦血管病中約占80%[4]，地黃飲子在臨床上治療缺血性腦血管病、中風(fēng)及后遺癥、血管性癡呆等取得一定療效。本研究觀察地黃飲子對(duì)腦缺血大鼠行為學(xué)的影響，進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組 健康清潔級(jí)Wistar大鼠80只，雌雄不限，體重250 g～280 g，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-LN2013-0009。隨機(jī)分為地黃飲子組、尼莫地平組、缺血組、對(duì)照組，各20只。地黃飲子組：造模后每日灌服地黃飲子湯36 g/kg，連續(xù)3周。尼莫地平組：造模后每日灌服尼莫地平(天津中央藥業(yè)公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：20130067，規(guī)格：每片20 mg。用注射用水溶解)12.5 mg/kg，連續(xù)3周。缺血組：造模后每日灌服生理鹽水1次。對(duì)照組：正常飲食。連續(xù)治療3周。

1.2 造模方法 用10%水合氯醛麻醉大鼠，固定后頸部正中切開，分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈并用動(dòng)脈夾鉗夾40min，用溫鹽水紗布保護(hù)切口創(chuàng)面，松開動(dòng)脈夾40 min后，再次用動(dòng)脈夾鉗夾40 min，使大鼠處于急性腦缺血狀態(tài)，造模成功。

1.3 藥物 按照《黃帝素問宣明論方》記載的地黃飲子配制：熟地黃12 g，巴戟天15 g，白茯苓12 g，山茱萸15 g，石斛15 g，菖蒲12 g，炮附子15 g，麥門冬15 g，肉蓯蓉15 g，五味子10 g，官桂10 g，遠(yuǎn)志10 g。用12倍量和10倍量水煎煮2次，每次1 h，將兩次藥液混合，用旋轉(zhuǎn)儀蒸發(fā)濃縮，干燥密封備用。

1.4 行為學(xué)Longa評(píng)分評(píng)定 分別在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的第1周、第2周、第3周檢測(cè)，神經(jīng)行為學(xué)檢查分為5等級(jí)：①正常行為，無神經(jīng)功能缺損為0分；②大鼠左前爪不能完全伸展開，有輕度的神經(jīng)功能缺損為1分；③大鼠行走時(shí)，向一側(cè)轉(zhuǎn)圈，有中度的神經(jīng)功能缺損為2分；④大鼠行走時(shí)，向一側(cè)傾倒，有重度的神經(jīng)功能缺損為3分；⑤大鼠不能自主行走，或者意識(shí)喪失為4分。

1.5 Berderson評(píng)分評(píng)定 分別在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的第1周、第2周、第3周檢測(cè)。方法：提尾懸空時(shí)姿勢(shì)反應(yīng)測(cè)試，將大鼠提尾懸空1 m，觀察它的前肢變化，正常大鼠四肢向四周伸展抓向地面，整個(gè)檢查需要3 min～5 min完成。①正常(0分)：雙前肢不完全伸展，沒有神經(jīng)功能缺損；②中度(1分)：一側(cè)肢體長(zhǎng)時(shí)間彎曲，如屈腕、肘部屈曲、肘部伸直時(shí)腕部屈曲、肩內(nèi)收；③重度(2分)：將大鼠放在墊子上，抓住它尾巴向不同方向拖拽滑動(dòng)，大鼠癱瘓側(cè)抵抗力嚴(yán)重下降，不伴有自主轉(zhuǎn)圈。④3分：同重度2分的行為，伴有自主轉(zhuǎn)圈動(dòng)作。

1.6 腦梗死面積測(cè)量 實(shí)驗(yàn)3周后，斷頭取腦，鹽水沖洗大腦并吸干，將大腦冠狀切片，加入1%2.3.5-三苯基四氮唑的磷酸緩沖液中，避光30 min，間隔6 min轉(zhuǎn)動(dòng)1次，把腦片放在電鏡圖像分析系統(tǒng)中，計(jì)算腦梗死面積，計(jì)算公式：腦梗死面積=(白色的梗死面積/片子的總面積)×100%。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，多組間用單因素方差分析比較，組間兩兩比較用q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠Longa評(píng)分比較 對(duì)照組Longa評(píng)分為0分。在第1周、第2周、第3周，地黃飲子組Longa評(píng)分明顯低于缺血組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，尼莫地平組Longa評(píng)分與缺血組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

分

2.2 各組大鼠Berderson評(píng)分比較 對(duì)照組Berderson評(píng)分為0分。在第1周、第2周、第3周，地黃飲子組Berderson評(píng)分明顯低于缺血組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，尼莫地平組Berderson評(píng)分與缺血組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

分

2.3 各組大鼠腦梗死面積比較 對(duì)照組腦梗死面積為0。地黃飲子組腦梗死面積明顯低于缺血組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，尼莫地平組腦梗死面積與缺血組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表3。

表3 各組大鼠腦梗死面積比較 %

3 討 論

正常狀態(tài)下，保持氧化與抗氧化間的平衡，使機(jī)體免受損傷，若平衡被打破，機(jī)體損傷疾病發(fā)生。本研究通過夾閉大鼠的頸總動(dòng)脈，使大鼠腦處于急性缺血缺氧狀態(tài)，通過不同的治療方法，觀察大鼠的行為學(xué)Longa評(píng)分和Berderson評(píng)分，測(cè)量腦梗死面積，結(jié)果顯示：地黃飲子治療效果明顯優(yōu)于尼莫地平，行為L(zhǎng)onga評(píng)分、Berderson評(píng)分和腦梗死面積明顯低于缺血組。有研究證實(shí)：地黃飲子能明顯降低腦細(xì)胞的過氧化反應(yīng)，提高神經(jīng)細(xì)胞神經(jīng)元超氧化物歧化酶(SOD)活性和含量，提高機(jī)體清除過多的氧自由基能力，減少過氧化造成的損傷，維持細(xì)胞正常功能，因此地黃飲子治療腦缺血損傷的主要保護(hù)機(jī)制是增加SOD活性，降低氧自由基含量[5-6]。有研究發(fā)現(xiàn)：地黃飲子可以顯著提高腦組織中氧化應(yīng)激的能力和學(xué)習(xí)記憶的功能，通過不同劑量的地黃飲子臨床研究顯示，高劑量的地黃飲子明顯提高大鼠腦內(nèi)抗氧化酶的活性，減少細(xì)胞凋亡和氧化損傷，延緩大腦老化，保護(hù)腦細(xì)胞的功能[7-8]。

有研究發(fā)現(xiàn)[9-10]：地黃飲子在治療腦梗死時(shí)，可以明顯減輕腦水腫，減輕腦缺血損傷造成的神經(jīng)功能缺失癥狀，同時(shí)改善大鼠腦缺血后再灌注造成的損傷。李文英等[11-12]研究證實(shí)地黃飲子能夠使SDF1蛋白表達(dá)增高，SDF1/CXCR4信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)，加快海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、遷移，并在缺血區(qū)進(jìn)一步分化為神經(jīng)元，彌補(bǔ)神經(jīng)元缺失造成的損傷。

用地黃飲子治療腦缺血、阿爾茨海默病、老年病等已經(jīng)取得明顯的治療效果，實(shí)驗(yàn)研究也證實(shí)了地黃飲子能夠修復(fù)腦缺血再灌注時(shí)的損傷，具有抗氧化，減少氧自由基含量，減少細(xì)胞凋亡，提高學(xué)習(xí)記憶能力，修復(fù)神經(jīng)元功能缺失等作用。為臨床上治療老年病提供了更有力的理論依據(jù)。

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(本文編輯郭懷印)

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引用信息：劉恒濤.地黃飲子治療對(duì)腦缺血大鼠行為學(xué)評(píng)分的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(2)：168-170.

R743 R2555.2

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.02.012

1672-1349(2017)02-0168-03

2016-06-12)