高海鷹，孟黎明，王海玲，關(guān)悅

(吉林省藥物研究院，長春 130061)

頂空進(jìn)樣氣相色譜法測(cè)定瑞替加濱中溶劑殘留*

高海鷹，孟黎明，王海玲，關(guān)悅

(吉林省藥物研究院，長春 130061)

建立瑞替加濱原料藥中甲醇、異丙醇、乙酸乙酯殘留溶劑的測(cè)定方法。以二甲基亞砜(DMSO)為溶劑，DB–WAX123–7032石英毛細(xì)管柱為色譜分離柱，F(xiàn)ID檢測(cè)器，程序升溫，氮?dú)鉃檩d氣。甲醇、異丙醇、乙酸乙酯能得到良好分離，甲醇在29.23～292.30 μg／mL范圍內(nèi)有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)為0.996，平均回收率為103.83%；異丙醇在49.96～499.60 μg／mL范圍內(nèi)有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)r=0.996，平均回收率為105.16%；乙酸乙酯在51.59～515.90 μg／mL范圍內(nèi)有良好的線性，線性相關(guān)系數(shù)為0.996，平均回收率為101.36%。甲醇、異丙醇、乙酸乙酯的檢出限分別為0.036，0.213，0.062 μg／mL，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.96%，4.52%，4.34%(n=6)。該方法靈敏度高，可用于瑞替加濱原料藥中有機(jī)溶劑的檢測(cè)。

頂空進(jìn)樣氣相色譜法；瑞替加濱；甲醇；異丙醇；乙酸乙酯

瑞替加濱(Retigabine)其化學(xué)名稱為N-[2-氨基–4-(4-氟芐氨基)苯基]氨基甲酸乙酯二鹽酸鹽，是一種合成的氨基吡啶類似物，具強(qiáng)效抗驚厥活性。瑞替加濱已經(jīng)由FDA批準(zhǔn)上市，療效確鑿，作用機(jī)制新穎，很有可能成為抗癲癇藥物中的重磅炸彈級(jí)品種［1–4］，原料藥在合成和精制過程中，使用了溶劑甲醇、異丙醇、乙酸乙酯，為控制藥品質(zhì)量，保證用藥安全，需要對(duì)使用的溶劑進(jìn)行殘留量控制。

近年來，頂空毛細(xì)管氣相色譜技術(shù)逐漸普及，成為藥品中殘留溶劑檢測(cè)的首選方法，而關(guān)于瑞替加濱原料藥中殘留溶劑的測(cè)定和控制文獻(xiàn)報(bào)道很少。參照《中國藥典》2015年版四部規(guī)定［5］，筆者采用頂空氣相色譜法同時(shí)檢測(cè)原料藥中甲醇、異丙醇、乙酸乙酯3種溶劑的殘留量［6–9］并進(jìn)行了方法學(xué)的驗(yàn)證。

由于異丙醇與乙酸乙酯的沸點(diǎn)非常接近，均在80℃左右，為了達(dá)到有效的分離，采用了程序升溫，在220℃時(shí)保持4 min，進(jìn)樣口溫度為200℃，保證溶媒二甲基亞砜全部被吹出，不會(huì)影響下一次進(jìn)樣的測(cè)定，避免了直接進(jìn)樣時(shí)原料藥樣品對(duì)檢測(cè)的干擾和對(duì)色譜柱的污染。所建方法專屬性好，準(zhǔn)確度和靈敏度高，可用于瑞替加濱原料藥中有機(jī)殘留溶劑的質(zhì)量控制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：7820A型，配有色譜工作站，美國Agilent公司；

頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置：7694E型，美國Agilent公司；

電子分析天平：MS405DU型，德國賽多利斯公司；

甲醇：分析純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司；

異丙醇、乙酸乙酯：分析純，北京化工廠；

二甲基亞砜(DMSO)：分析純，天津大茂化學(xué)試劑廠；

瑞替加濱原料藥樣品：吉林省藥物研究院。

1.2 儀器工作條件

色譜柱：DB–WAX 123–7032石英毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm， 0.25μm)；柱溫采用程序升溫：初始溫度為35℃(保持0 min)，以4℃／min升至60℃(保持0 min)，以40℃／min升至220℃(保持4 min)；進(jìn)樣口溫度：200℃；分流比為5∶1；檢測(cè)器溫度：250℃；載氣壓力：68.95 kPa(10 Psi)；頂空瓶平衡溫度：60℃；進(jìn)樣環(huán)溫度：80℃；管線溫度：120℃；平衡時(shí)間：30 min；進(jìn)樣體積：1 mL［10–13］；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

1.3 溶液制備

1.3.1 混合對(duì)照品溶液

分別精密稱取適量甲醇、異丙醇、乙酸乙酯，加入二甲基亞砜溶解并稀釋，配制成甲醇、異丙醇、乙酸乙酯的含量分別為2.923，4.996，5.159 mg／mL的混合對(duì)照品溶液。

1.3.2 供試品溶液

取適量瑞替加濱原料藥樣品，精密稱定，加入二甲基亞砜溶解并稀釋制得質(zhì)量濃度約為0.5 g／mL的供試品溶液，。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶劑的選擇

溶解性試驗(yàn)表明，瑞替加濱原料藥在二甲基亞砜中溶解良好，且二甲基亞砜作為溶劑不干擾待檢測(cè)殘留溶劑的測(cè)定，故選二甲基亞砜作為溶劑。

2.2 頂空條件的選擇

精密量取混合對(duì)照品溶液5 mL，置于20 mL頂空瓶中，密封，進(jìn)行試驗(yàn)?？疾祉斂掌胶鉁囟仍?0，55，60，65，70℃時(shí)3種溶劑色譜峰面積的變化情況。

結(jié)果表明，隨著加熱溫度的升高色譜峰高逐漸增大，當(dāng)?shù)竭_(dá)70℃時(shí)，色譜峰高有減小的趨勢(shì)，且峰形變差,拖尾較嚴(yán)重，綜合考慮選擇平衡溫度為60℃。在頂空平衡溫度60℃的條件下，選擇不同加熱平衡時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)，分別考察加熱平衡時(shí)間為20，25，30，35，40 min時(shí)3種溶劑色譜峰面積的變化情況。結(jié)果顯示：加熱平衡時(shí)間小于30 min時(shí)，隨著平衡時(shí)間的增加，色譜峰面積逐漸增加；加熱平衡時(shí)間為30 min時(shí)色譜峰面積趨于穩(wěn)定；加熱平衡時(shí)間大于30 min時(shí)色譜峰面積反而減小。因此選擇加熱平衡時(shí)間為30 min。

表1 不同平衡溫度時(shí)溶劑色譜峰面積

表2 不同平衡時(shí)間時(shí)溶劑的色譜峰面積

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖

由圖1可知，各溶劑峰均能分開，峰形良好，沒有雜質(zhì)干擾。甲醇、異丙醇、乙酸乙酯色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.97%，1.68%，2.24%(n=5)?！吨袊幍洹分袑?duì)系統(tǒng)適用性有明確要求，待測(cè)物的色譜峰理論塔板數(shù)一般不低于5 000，與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。實(shí)驗(yàn)中以混合對(duì)照品溶液為測(cè)試液，在優(yōu)化色譜條件下進(jìn)樣，甲醇、異丙醇、乙酸乙酯各組分的保留時(shí)間分別為1.415，1.544，1.936 min；分離度分別為2.98，6.55，1.80；理論塔板數(shù)分別為17 561，19 533，31 330。結(jié)果表明建立的分析方法能夠滿足藥典對(duì)系統(tǒng)適用性的要求。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程

精密量取混合對(duì)照品溶液0.5，1，2，3，4，5 mL置于5個(gè)50 mL容量瓶中，加入二甲基亞砜至標(biāo)線，搖勻，得系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。分別量取5 mL，置于20 mL頂空瓶中，密封，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定。以待測(cè)組分的質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。甲醇、異丙醇、乙酸乙酯的線性方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍見表3。由表3可知，3種溶劑線性方程的相關(guān)系數(shù)均為0.996，符合檢測(cè)質(zhì)量控制要求。采用外標(biāo)曲線法可實(shí)現(xiàn)藥物中溶劑殘留量的準(zhǔn)確定量。

表3 工作曲線方程、線性范圍

2.5 檢出限

取混合對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，然后按樣品分析方法平行測(cè)定6次，按照國際理論和化學(xué)聯(lián)合會(huì)(IUPAC)的規(guī)定，以S／N＝3計(jì)算方法的檢出限。經(jīng)計(jì)算得甲醇、異丙醇、乙酸乙酯的檢出限分別為0.036，0.213，0.062 μg／mL。所建方法靈敏度高，滿足《中國藥典》2015年版四部規(guī)定的安全檢測(cè)要求。

2.6 精密度試驗(yàn)

移取混合對(duì)照品溶液6份，分別進(jìn)行測(cè)定，記錄各組分的峰面積，計(jì)算甲醇、異丙醇、乙酸乙酯色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表4。

崔：這倒真是有些超乎我的想象了，對(duì)于很多作品，我能想象“音樂意識(shí)解決技術(shù)難點(diǎn)”的可能性，但是對(duì)于勃拉姆斯的《帕格尼尼主題變奏曲》是怎么做到的？這幾乎是頂尖難度的鋼琴作品。

表4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表4可知，甲醇、異丙醇、乙酸乙酯色譜峰面積測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為4.96%，4.52%，4.34%，均小于藥物質(zhì)量控制方法的規(guī)定[RSD不大于5.0%(n=6)]，可見所建方法的精密度良好，滿足原料藥溶劑殘留的質(zhì)量控制要求。

2.7 回收試驗(yàn)

2.7.1 甲醇回收率

精密稱取瑞替加濱原料樣品各0.5 g置于頂空進(jìn)樣瓶中。移取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL，用二甲基亞砜稀釋至10 mL。精密量取稀釋液5 mL分別置頂空進(jìn)樣瓶中，密封，使樣品溶解，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表5。

2.7.2 異丙醇和乙酸乙酯回收率

精密稱取瑞替加濱原料樣品各0.5 g置頂空進(jìn)樣瓶中，精密量取濃度為2.571 5 mg／mL和2.657 5 mg／mL的異丙醇和乙酸乙酯的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液5 mL，分別置于頂空進(jìn)樣瓶中，密封，使其溶解，按實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定，計(jì)算異丙醇和乙酸乙酯的回收率，結(jié)果見表5。

表5 回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甲醇的平均回收率為103.83%，RSD為1.96%；異丙醇平均回收率為105.16%，RSD為2.40%；乙酸乙酯平均回收率為101.36%，RSD為1.85%?？蓾M足準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)平均回收率在90%～110%，RSD小于5.0%的規(guī)定，表明本方法準(zhǔn)確度良好。

2.8 樣品測(cè)定

分別精密稱取3批樣品(批號(hào)為140924、140927、150107)各0.5 g，置頂空瓶中，加人二甲基亞砜溶解，搖勻，頂空進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表6。

表6 原料藥殘留溶劑的測(cè)定結(jié)果 %

由表6可知，3批樣品中甲醇?xì)埩袅糠謩e為0.019%，0.042%，0.035%，異丙醇和乙酸乙酯均未檢出。根據(jù)《中國藥典》2015年版四部規(guī)定，甲醇屬于第二類溶劑，限度為0.3%，異丙醇、乙酸乙酯屬于第三類溶劑，限度為0.5%?？梢姳粰z的三批樣品中甲醇的含量均小于限度，異丙醇和乙酸乙酯未檢出，檢測(cè)結(jié)果符合要求。

3 結(jié)論

采用頂空進(jìn)樣氣相色譜法測(cè)定瑞替加濱中溶劑殘留，經(jīng)過方法學(xué)考察，方法專屬性強(qiáng)，有較高的靈敏度。該方法精密度、準(zhǔn)確度較高，可滿足藥物質(zhì)量控制的要求，能對(duì)瑞替加濱原料藥中殘留溶劑進(jìn)行有效監(jiān)控。

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美國化學(xué)會(huì)C & EN評(píng)選出2016年頂級(jí)科研成果

1 過程化學(xué)：冰箱大小的藥物生產(chǎn)機(jī)器

麻省理工學(xué)院(MIT)的Timothy F.Jamison，Klavs F.Jensen，Allan S.Myerson和同事設(shè)計(jì)了一個(gè)冰箱大小的連續(xù)流系統(tǒng)設(shè)備，作為“迷你工廠”以最終制劑的形式來生產(chǎn)臨床上直接可用的藥物。該系統(tǒng)將藥物生產(chǎn)體系上游的化學(xué)反應(yīng)器單元與下游的沉淀、過濾、重結(jié)晶和制劑等單元組合在一起，還具有用于質(zhì)量控制和過程評(píng)估的化學(xué)分析和計(jì)算模塊。目前，該系統(tǒng)已經(jīng)可以生產(chǎn)苯海拉明、鹽酸利多卡因、地西泮、鹽酸氟西汀的口服和外用液體制劑。下一步，MIT的科學(xué)家們希望將系統(tǒng)體積再縮小40%，增加合成更復(fù)雜藥品的能力，并且將這種專利技術(shù)商業(yè)化。

2 高分子：首個(gè)“吃”PET塑料的細(xì)菌

聚對(duì)苯二甲酸乙酯(PET)是最常見的塑料之一，和其他塑料一樣，在給人類生活帶來很大便利的同時(shí)，也會(huì)給環(huán)境帶來很大的壓力。PET在美國已經(jīng)是回收最多的塑料，但是仍有超過一半的PET塑料最終只能進(jìn)入垃圾填滿場(chǎng)，而這種聚合物中的酯鍵很強(qiáng)，很難自然降解。

日本京都工藝?yán)w維大學(xué)的小田康平(Kohei Oda)和慶應(yīng)義塾大學(xué)的宮本賢治(Kenji Miyamoto)等人今年報(bào)道了一種利用細(xì)菌來幫助降解PET的新方法，這是迄今發(fā)現(xiàn)的第一種可以“吃掉”PET塑料的細(xì)菌，它將PET作為其主要的碳源和能量來源。他們的研究小組篩選了來自一個(gè)塑料回收廠的樣本，包括沉積物、土壤、廢水和活性污泥，經(jīng)過微生物篩選發(fā)現(xiàn)一種細(xì)菌能夠在PET薄膜上成長。這種首個(gè)被發(fā)現(xiàn)能“吃掉”PET的細(xì)菌被命名為Ideonella sakaiensis。

3 材料學(xué)：液態(tài)金屬的新應(yīng)用

鎵及其一些合金是一種液態(tài)金屬，當(dāng)暴露于空氣中時(shí)，會(huì)自發(fā)形成薄的氧化物外皮，從而穩(wěn)定液滴形態(tài)以及研究人員創(chuàng)造的其它任意圖案。如果這種材料被擠壓，氧化物外皮破裂，金屬會(huì)恢復(fù)流動(dòng)，直到重新生成氧化物外皮。

北卡羅來納州立大學(xué)(NCSU)Michael D Dickey領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)利用鎵(Ga)基合金的這種特性，制造了最小可到10 μm的聚合物包覆的eGaIn線，eGaIn是鎵和銦的共晶混合物，熔點(diǎn)15.5℃，在室溫下是液體。與普通的電線不同，由eGaIn制成的線可以很容易地被拉伸、彎曲和成形，同時(shí)還能保持導(dǎo)電性。

4 C–H鍵活化：亞甲基活化的新高度

美國斯克里普斯研究所(The Scripps Research Institute，TSRI)余金權(quán)(Jin-Quan Yu)教授和加州大學(xué)洛杉磯分校(UCLA)K.N.Houk教授等化學(xué)家今年實(shí)現(xiàn)了一個(gè)長久以來都未曾實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)：選擇性活化有機(jī)化合物中最常見的基團(tuán)之一——亞甲基(CH2)中特定的碳?xì)滏I并將其轉(zhuǎn)化為手性中心。化學(xué)家們通過使用乙?；Ｗo(hù)的胺乙基喹啉配體，實(shí)現(xiàn)了單一亞甲基碳中心上前手性碳?xì)滏I的不對(duì)稱鈀插入，他們還把這些鈀復(fù)合物用于脂肪族酰胺的β-位碳?xì)滏I不對(duì)稱官能團(tuán)化，使用雙齒配體來加速碳?xì)滏I的活化對(duì)于避免底物誘導(dǎo)的環(huán)鈀化背景反應(yīng)是至關(guān)重要的，從而可以保證高的對(duì)映選擇性。

5 診斷學(xué)：今年流行可穿戴傳感器

智能手環(huán)、智能手表以及有些手機(jī)App可以讓人們記錄他們的心率、血壓以及跑了多遠(yuǎn)，一些研究人員希望更進(jìn)一步，開發(fā)能夠分析人的汗水或環(huán)境中化學(xué)物質(zhì)的設(shè)備，以監(jiān)測(cè)健康狀態(tài)、鍛煉效果甚至化學(xué)品暴露風(fēng)險(xiǎn)。

6 藥物發(fā)現(xiàn)：加強(qiáng)抗生素的“軍火庫”

傳染性病菌和人類之間的戰(zhàn)斗持續(xù)了成千上萬年，而今年人類有可能稍稍占據(jù)優(yōu)勢(shì)，這是因?yàn)橛袃山M科學(xué)家（哈佛大學(xué)Andrew G Myers研究小組、德國蒂賓根大學(xué)微生物學(xué)家Andreas Peschel和Bernhard Krismer領(lǐng)導(dǎo)的團(tuán)隊(duì)）設(shè)法升級(jí)了我們的抗菌“軍火庫”——一組制造了新的大環(huán)內(nèi)酯類化合物，另一組則是在我們的鼻子里尋找新抗生素。

除此之外還有生物催化：酶法構(gòu)建C–Si鍵；催化：?jiǎn)卧哟呋瘎?；結(jié)構(gòu)生物學(xué)：三個(gè)生物大分子的結(jié)構(gòu)。

（中國分析計(jì)量網(wǎng)）

Determination of Residual Solvents in Retigabine by Headspace Capillary Gas Chromatography

Gao haiying， Meng Liming， Wang Hailing， Guan Yue
(Jilin Institute of Pharmaceutical Research， Changchun 130061, China)

A method for determining methanol, isopropanol and ethyl acetate in retigabine material by headspace gas chromatography was established.The solvent media was dimethyl sulfoxide(DMSO), the seperation was carried on DB–WAX123–7032 capillary column with the FID detector at temperature programming, the carrier gas was nitrogen.The result showed that the three solvents were completely separated.The standard curve of methanol was linear in the range of 29.23–292.30μg／mL，r=0.996，the average recovery was 103.83%. The standard curve of isopropanol was linear in the range of 49.96–499.60 μg／mL，r=0.996，the average recovery was 105.16%. The standard curve of ethyl acetate was linear in the range of 51.59–515.90 μg／mL，r=0.996，the average recovery was 101.36%. The detector limit of methanol, isopropanol and ethyl acetate were 0.036，0.213 and 0.062 μg／mL, and the relative standard deviations of detection results were 4.96%，4.52% ,4.34%(n=6), repectively. The method is sensitive and it can be used for the detection of three residual solvents in retigabine.

headspace gas chromatography; retigabine; methanol; isopropanol; ethyl acetate

O657.3

：A

：1008–6145(2017)01–0012–04

10.3969／j.issn.1008–6145.2017.01.003

*吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20130206017SF)

聯(lián)系人：高海鷹；E-mail: ghy1998@126.com

2016–10–23