章一鳴+何永宏+邱有尚+周志斌+丁榆+韓有魁

（1.湖州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藝術(shù)與設(shè)計(jì)學(xué)院，浙江湖州 313000；2.云南省保山市隆陽(yáng)區(qū)果樹蔬菜技術(shù)推廣站，678000；3.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南昆明 650201）

摘 要 通過實(shí)驗(yàn)，對(duì)甜柿黑腐病病原菌進(jìn)行生物學(xué)特性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示：不同培養(yǎng)基配方、溫度、酸堿度、碳源、氮源和光照對(duì)菌絲的生長(zhǎng)有一定影響，菌絲生長(zhǎng)的最適宜培養(yǎng)基是柿樹砧木根煎汁根培養(yǎng)基，最適溫度是30℃，最適光照為24h全日光照，最適pH是4，最適碳源為葡萄糖，最適氮源為硝酸鈉。

關(guān)鍵詞 甜柿黑腐病；生物學(xué)特性；柿擬盤多毛孢菌

中圖分類號(hào)：S436.67 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.24.030

柿子樹是柿科、柿屬落葉大喬木，品種很多，生長(zhǎng)在溫帶與熱帶[1]。在我國(guó)已有3000多年的栽培歷史了，主要分布在陜西、河南、山東和河北，占全世界的50%以上[2]。柿子樹不僅產(chǎn)果，果實(shí)鮮美，而且作為綠化景觀樹種，其作用甚大[3]。2013年，在云南省保山地區(qū)發(fā)現(xiàn)了甜柿根腐病，關(guān)于病原菌（pathogenic bacterium）生物學(xué)特性和培養(yǎng)性狀的研究報(bào)道較少；為此，2013年下半年，開展了甜柿根腐病的相關(guān)實(shí)驗(yàn)與分析，總結(jié)了不同環(huán)境因素下病原菌的生長(zhǎng)狀況，為深入研究甜柿根腐病的發(fā)病機(jī)理提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2013年4月，在保山市柿樹種植園區(qū)采集病害樹木標(biāo)本，2014-2015年，通過常規(guī)真菌分離法，通過柯赫氏法則進(jìn)行驗(yàn)證確定病原菌后，進(jìn)行了菌株的純培養(yǎng)，并保存了下來。

1.2 生物學(xué)特性測(cè)定的實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響

取PDA菌株菌絲，將其置于PDA培養(yǎng)基中央，在25℃恒溫箱中培養(yǎng)7 d，菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿后，用打孔器在距離培養(yǎng)皿中心相同的位置的圓周上取菌塊，菌塊的直徑為5mm，將菌塊分別接入馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基、查氏培養(yǎng)基、水瓊脂培養(yǎng)基、燕麥片培養(yǎng)基、玉米粉培養(yǎng)基、柿樹砧木根煎汁培養(yǎng)基，在26℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；5d后用十字交叉法對(duì)病原菌菌落直徑進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)3次，共計(jì)21皿，記錄數(shù)據(jù)。

1.2.2 溫度對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響

取PDA菌株菌絲，將其置于PDA培養(yǎng)基中央，在25℃恒溫箱中培養(yǎng)7 d，菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿后，用打孔器在距離培養(yǎng)皿中心相同的位置的圓周上取菌塊，菌塊的直徑為5mm，并將其置于溫度為5、10、15、20、25、30、35℃七個(gè)不同培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；5d用十字交叉法對(duì)病原菌菌落直徑進(jìn)行測(cè)定，記錄數(shù)據(jù)，每個(gè)溫度梯度重復(fù)3次，共計(jì)21皿。

1.2.3 pH對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響

用HCL和NaOH溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH濃度（HCL和NAOH的濃度均為0.1mol/L），從而配制成不同pH的PDA平板。將直徑5mm的菌餅分別接種于pH3-11的PDA平板上，置于26℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6d后，用十字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑，記錄數(shù)據(jù)。每個(gè)pH梯度重復(fù)3次，共計(jì)27皿。

1.2.4 光照對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響

將直徑5mm的菌餅接于PDA平板，設(shè)定4種光照條件：16∶8（白天∶夜晚）自然光照、12∶12（白天∶夜晚）光暗更替、全黑暗、全光照，置于26℃下培養(yǎng)；5d后用十字交叉法對(duì)病原菌菌落直徑進(jìn)行測(cè)定，記錄數(shù)據(jù)。每個(gè)光照梯度重復(fù)3次，共計(jì)12皿。

1.2.5 碳源對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響

PDA培養(yǎng)基中葡萄糖是作為碳源的主要成分，本實(shí)驗(yàn)將葡萄糖替換成蔗糖、麥芽糖、α-乳糖、可溶性淀粉、甘露醇，從而制成碳源不同，但是其他條件相同的不同培養(yǎng)基，并將5mm菌餅置于這些培養(yǎng)基中央，在26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。5d后測(cè)量菌落的平均直徑值，記錄數(shù)據(jù)。每個(gè)碳源重復(fù)3次，共計(jì)18皿。

1.2.6 氮源對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響

查氏培養(yǎng)基中硝酸鈉是作為氮源的主要成分，本實(shí)驗(yàn)將硝酸鈉替換成蛋白胨、尿素、甘氨酸、硫酸銨、氯化銨、硝酸鉀，從而制成氮源不同，但是其他條件相同的不同培養(yǎng)基，并將5mm菌餅置于這些培養(yǎng)基中央，在26℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5d后測(cè)量菌落的平均直徑值，記錄數(shù)據(jù)，以比較不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響，每個(gè)氮源重復(fù)3次，共計(jì)21皿。

2 結(jié)果與分析

2.1 培養(yǎng)基對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)、菌絲顏色及形態(tài)的影響

病原菌菌絲在7種不同成分的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)情況差異較大，在柿樹砧木根煎汁培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最快，菌落平均直徑達(dá)到5.96cm；在PDA培養(yǎng)基生長(zhǎng)次之，菌落直徑為5.06cm，但是在水瓊脂培養(yǎng)基中生長(zhǎng)是最緩慢的，菌落直徑3.85cm。

2.2 碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

菌絲生長(zhǎng)的適宜碳源為葡萄糖，以葡萄糖為碳源時(shí)，菌落平均直徑最大，為5.07cm；菌絲在以甘露醇和可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)緩慢，分別為3.00cm和3.41cm。菌絲在以α-乳糖、麥芽糖、蔗糖為碳源的培養(yǎng)基中的平均直徑分別為4.23、3.81、4.36、3.69cm。

2.3 氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

菌絲生長(zhǎng)的適宜氮源為硝酸鉀和硫酸銨，其中以硝酸鈉為氮源時(shí)，數(shù)據(jù)顯示其菌落平均直徑最大，為3.97cm，表明病原菌生長(zhǎng)最適氮源為硝酸鈉；菌絲在以蛋白胨、氯化銨為氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最為緩慢，分別為1.80cm和1.91cm。菌絲在以甘氨酸、硫酸銨、尿素、硝酸鉀為氮源的培養(yǎng)基中的平均直徑分別為3.20、3.66、3.15、3.60cm。

2.4 溫度對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

菌絲生長(zhǎng)的適宜溫度區(qū)間為25～30℃。其中菌絲在30℃下生長(zhǎng)時(shí)，菌落平均直徑最大，為6.41cm；菌絲在5℃時(shí)，無法生長(zhǎng)；在10℃和35℃生長(zhǎng)非常緩慢。

2.5 pH對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

病原菌菌絲在所調(diào)制的各種pH濃度培養(yǎng)環(huán)境下均能生長(zhǎng)，但是菌絲生長(zhǎng)的適宜pH區(qū)間為3～5，菌絲在pH為4的培養(yǎng)基下長(zhǎng)勢(shì)最好，可以表明病原菌較偏愛酸性條件。

2.6 光照對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的影響

菌絲在不同光照條件下都能生長(zhǎng)菌落顏色及形態(tài)基本無差異，最適光照為24 h全光照，菌落平均值達(dá)到6.21cm。

3 結(jié)論與討論

研究結(jié)果表明，營(yíng)養(yǎng)條件、環(huán)境溫度，土壤酸堿度等條件對(duì)柿擬盤多毛孢菌的菌絲生長(zhǎng)具有影響。菌絲在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最好；相比其他pH而言，病原菌在pH為4的環(huán)境條件下生長(zhǎng)最好；數(shù)據(jù)也表明最適合病原菌生長(zhǎng)的溫度條件為30℃；本實(shí)驗(yàn)中，菌絲在24 h全光照的條件下生長(zhǎng)最適宜。

鑒于以往對(duì)于此病害的研究報(bào)道很少，本文通過對(duì)柿擬盤多毛孢菌生物學(xué)特性的研究，明確病菌的生長(zhǎng)環(huán)境條件，為病害的深入研究提供一手?jǐn)?shù)據(jù)，為病害的防治提供相關(guān)借鑒，為其他科屬植物的根腐病防治提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1]賀士元.北京植物志（下冊(cè)）[M].上海：上海出版社，1988.

[2]中國(guó)科學(xué)院西北植物研究所.秦嶺植物志（第一卷第4冊(cè)）[M].北京：科學(xué)出版社，1983.

[3]余忠保，吳洪思.庭院綠化樹種柿子樹的特征特性及栽培技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011（14）：218.

（責(zé)任編輯：趙中正）