解長(zhǎng)佶　胡超　曹凱　張宇晴

【摘要】 目的：檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者血漿溶血磷脂酸（lysphosphaticlic acid，LPA）的水平，評(píng)價(jià)LPA在原發(fā)性肝癌診治中的臨床意義。方法：采用生物化學(xué)方法檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者43例，肝臟良性疾病患者10例及健康志愿者10名的血漿LPA水平，同時(shí)測(cè)定血清AFP的水平。結(jié)果：原發(fā)性肝癌患者血漿LPA水平（3.94±0.60）μmol/L明顯高于肝臟良性疾病患者（2.68±0.36）μmol/L和健康對(duì)照組（2.42±0.35）μmol/L（P<0.05），血漿LPA水平的升高與原發(fā)性肝癌浸潤(rùn)和門靜脈癌栓等相關(guān)。結(jié)論：血漿LPA檢測(cè)為原發(fā)性肝癌診斷和預(yù)后判斷增加了一項(xiàng)潛在的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性肝癌； 溶血磷脂酸； 甲胎蛋白； 診斷； 預(yù)后

Significance of Plasma Lysophosphatidic Acid Detection in patients with Primary Liver Cancer/XIE Chang-ji，HU Chao，CAO Kai，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（31）：013-016

【Abstract】 Objective：To observe the levels of plasma lysophosphatidic acid（LPA） in patients with primary liver cancer，and to evaluate its clinical potential of diagnosis.Method：Plasma LPA and serum AFP levels were measured in 43 patients with primary liver cancer，10 patients with benign primary liver cancer tumor，and 10 patients healthy donors.Result：Plasma LPA concentration in primary liver cancerpatients （3.94±0.60）μmol/L

was significantly higher than patients with benign lesions of（2.68±0.36）μmol/L and control group of（2.42±0.35）μmol/L （P<0.05）.Higher plasma LPA level showed a significant correlation with invasion and portal vein tumor thrombus （PVTT） of primary liver cancer.Conclusion：Plasma LPA level may be a potential indicator of the diagnosis and prognosis of primary liver cancer.

【Key words】 Primary liver cancer； Lysophosphatidic acid； AFP； Diagnosis； Prognosis

First-authors address：Jiangxi Turmor Hospital，Nanchang 330029，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.31.004

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC）是全球第5大常見惡性腫瘤，占惡性腫瘤致死原因的第2位，而其中83%的肝癌發(fā)生在發(fā)展中國家，僅中國每年的新發(fā)病例就將近占到世界的一半[1-2]。我國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析報(bào)道結(jié)果顯示：中國男性的肝癌發(fā)病率排在第5位，女性排在第6位，而肝癌死亡率男性排在第2位，女性排在第5位，原發(fā)性肝癌的治療取得了巨大進(jìn)步，但多數(shù)患者診斷肝癌時(shí)病情已為進(jìn)展期預(yù)后差[3-4]。溶血磷脂（lysophosphatidic acid，LPA）是一種對(duì)多種細(xì)胞具有不同生物學(xué)活性作用的磷脂介質(zhì)，在組織中廣泛存在，能夠調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲[5]。最近研究表明，LPA分泌量的增加，可能是常見惡性腫瘤細(xì)胞癌變過程中的步驟之一[6]，LPA通過上調(diào)卵巢癌組織中VGEF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，從而間接促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。LPA能促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）和腫瘤血管生成因子的分泌，而這和腫瘤的發(fā)展有關(guān)[8]。王德盛等[9]通過測(cè)定肝癌細(xì)胞株SMMC7721中Rho蛋白活性，認(rèn)為L(zhǎng)PA主要通過Rho信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的體外侵襲能力。Lou等[10]報(bào)道中LPA通過基質(zhì)蛋白-9（MMP-9），而不是通過MMP-2的高表達(dá)增加了肝癌細(xì)胞的侵襲能力，并通過使用LPA受體抑制劑Ki16452，能顯著降低因LPA誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞的侵襲力。本課題通過檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者血漿LPA水平，就其與臨床分期的相關(guān)性進(jìn)行了比較分析，評(píng)價(jià)檢測(cè)原發(fā)性肝癌患者血漿LPA的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年8月-2016年5月江西省腫瘤醫(yī)院診治的原發(fā)性肝癌患者43例，男35例，女8例；年齡39～67歲，中位年齡為51歲。全組患者病理類型均為肝細(xì)胞性肝癌，巴塞羅那臨床肝癌（Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC）分期標(biāo)準(zhǔn)分為BCLC 0期5例，BCLC A期11例，BCLC B期17例，BCLC C期10例。另選取肝臟血管瘤患者10例為肝臟血管瘤組和健康志愿者10例作為健康對(duì)照組。全部受驗(yàn)者均于清晨空腹采血取樣，實(shí)驗(yàn)對(duì)象排除既往有腦梗死、短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）及外周深靜脈血栓形成者。LPA檢測(cè)試劑盒購自北京泰福仕科技開發(fā)公司，腫瘤標(biāo)記物甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)試劑盒購自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司（Roche Diagnostics GmbH 公司）。endprint

1.2 方法 （1）血漿溶血磷脂酸（LPA）的測(cè)定：受檢者均于術(shù)前清晨空腹抽取外周血3 mL，血樣離心后0.5 h內(nèi)用LPA配套試劑測(cè)定血漿中的LPA，具體操作步驟和陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按說明書的要求執(zhí)行。LPA檢測(cè)試劑盒1號(hào)抗凝劑置于抗凝管中，8000 r離心10 min，吸取上清1 mL，抽提磷脂成分，過濾濃縮分離，最后加入顯色劑于90 ℃水浴

5 min，取出后置室溫35 min，采用東芝TBA120FR全自動(dòng)生化分析儀計(jì)算LPA的值。LPA值≥3.2 μmol/L設(shè)為陽性，<3.2 μmol/L設(shè)為陰性。（2）甲胎蛋白測(cè)定：術(shù)前清晨空腹抽取外周血2.0 mL，甲胎蛋白檢測(cè)采用羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫儀檢測(cè)血清AFP水平，AFP正常參考值為<7 ng/mL。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前各組血漿LPA及AFP水平的比較 （1）各組血漿LPA水平的比較中，肝臟血管瘤組2例LPA值升高，健康對(duì)照組未見LPA升高。原發(fā)性肝癌組血漿LPA水平（3.94±0.60）μmol/L明顯高于肝臟血管瘤（2.68±0.36）μmol/L及健康對(duì)照組（2.42±0.35）μmol/L，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），肝臟血管瘤組與健康對(duì)照組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（2）各組AFP水平的比較中，原發(fā)性肝癌組為（15330.03±11233.98）ng/mL高于肝臟血管瘤組及健康對(duì)照組（P<0.05），肝臟良性腫瘤組（4.87±1.79）ng/mL與健康對(duì)照組（3.56±1.67）ng/mL相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（3）原發(fā)性肝癌不同分期的LPA水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2例BCLC 0期

LPA水平<3.2 μmol/L，BCLC A期與B期LPA水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），BCLC C期LPA水平高于BCLC A及B期（P<0.05）。（4）AFP在原發(fā)性肝癌不同分期組中的比較，BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），BCLC A、B及C期比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 原發(fā)性肝癌組不同分期術(shù)后1個(gè)月血漿LPA及AFP水平的比較 BCLC A及B期術(shù)后1個(gè)月LPA水平降至正常水平，而BCLC C期患者LPA水平未見下降。原發(fā)性肝癌組不同分期術(shù)后1個(gè)月血漿AFP水平BCLC 0、A、B及C期術(shù)后1個(gè)月AFP水平均可見下降，以BCLC 0期下降最為明顯。見表2。

3 討論

原發(fā)性肝癌以肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma HCC，以下簡(jiǎn)稱肝癌）為主，占95%以上。肝癌細(xì)胞易侵犯門靜脈系統(tǒng)，形成門靜脈癌栓（portal vein tumor thrombus，PVTT）。文獻(xiàn)[11]報(bào)道門靜脈癌栓的發(fā)生率為44.0%～62.2%，對(duì)于合并門靜脈癌栓的肝癌患者，病情發(fā)展迅速，自然中位生存期平均為2.7～4.0個(gè)月。合并PVTT是臨床確定的肝癌預(yù)后不良因素，PVTT發(fā)生的部位及范圍對(duì)患者預(yù)后有明顯影響，早期微血管侵犯和中晚期門靜脈癌栓形成是影響肝細(xì)胞癌術(shù)后預(yù)后不佳的最重要因素[12]。PVTT依據(jù)侵犯范圍大體分為4型：Ⅰ型，癌栓侵犯肝葉或肝段的門靜脈分支，其中Ⅰ0型代表微血管癌栓；Ⅱ型，癌栓侵犯至門靜脈左支或右支；Ⅲ型，癌栓侵犯至門靜脈主干；Ⅳ型，癌栓侵犯至腸系膜上靜脈或以上[13]。對(duì)于合并門靜脈癌栓的患者，巴塞羅那臨床肝癌分期（Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC）劃歸為BCLC C期，推薦索拉非尼作為這部分患者的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。但是在我國運(yùn)用外科手術(shù)、肝動(dòng)脈栓塞化療、放療以及聯(lián)合多種治療手段的綜合治療也取得一定的治療效果[14-17]。門靜脈癌栓形成是一個(gè)多因素及多環(huán)節(jié)的過程，除了與門靜脈血流動(dòng)力學(xué)因素、門靜脈本身的解剖特點(diǎn)及功能有關(guān)，肝癌組織呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)極易侵犯血管壁較薄的門靜脈壁，形成門靜脈癌栓，另外腫瘤組織擠壓導(dǎo)致小葉中央靜脈閉塞，流經(jīng)腫瘤組織的血流逆流至門靜脈癌細(xì)胞進(jìn)入門靜脈系統(tǒng)并附壁生長(zhǎng)形成癌栓，并且還與多種細(xì)胞因子及分子生物學(xué)機(jī)理有關(guān)。門靜脈癌栓的診斷依據(jù)除了術(shù)中發(fā)現(xiàn)、術(shù)后病理，臨床主要還是依靠影像學(xué)檢查彩超、螺旋CT及磁共振成像（MRI）[18-22]。目前在檢測(cè)肝細(xì)胞癌合并門靜脈癌栓中尚無敏感性和特異性均令人滿意的腫瘤標(biāo)志物，劉洋等[23]通過回顧性肝癌合并門脈癌栓的患者發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合AFP和CA125水平的檢測(cè)對(duì)臨床實(shí)踐中判斷是否合并門靜脈癌栓有一定的指導(dǎo)意義。陳祖華等[24]通過分析肝細(xì)胞肝癌伴門靜脈癌栓與AFP-L3%相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)AFP-L3%陽性HCC患者易侵犯門靜脈形成PVTT，并且AFP-L3%越高PVTT累及范圍越廣。在我國30%～40%的肝細(xì)胞癌患者中始終為陰性，并且AFP升高滯后腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移灶的形成，從外周血液中尋找生物標(biāo)記物提示門靜脈癌栓的形成發(fā)生對(duì)于臨床有著重大意義。

筆者發(fā)現(xiàn)對(duì)肝癌不同分期血漿AFP值水平變化中，術(shù)前BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，術(shù)后1個(gè)月復(fù)查AFP BCLC 0、A、B及C期都有明顯下降，隨著肝臟腫瘤負(fù)荷的下降，AFP呈現(xiàn)出相應(yīng)的正相關(guān)。而LPA值進(jìn)行對(duì)比中發(fā)現(xiàn)，術(shù)前BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），BCLC A及B期兩者比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。BCLC C期的患者LPA水平高于BCLC A、B期，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。并通過術(shù)后1個(gè)月復(fù)查L(zhǎng)PA水平，LPA在BCLC A、B期患者中呈現(xiàn)下降，而在BCLC C期中雖然肝臟腫瘤切除聯(lián)合門靜脈切除或者門靜脈切開取栓，腫瘤負(fù)荷下降，LPA水平手術(shù)前后未見明顯下降，這就提示LPA在門靜脈癌栓的形成中可能起到標(biāo)記物的作用。由于腫瘤患者普遍存在血液高凝狀態(tài)，易形成血栓，而血小板活化后釋放大量的LPA，LPA通過與血小板的LPA-GPCR結(jié)合進(jìn)一步促進(jìn)血小板的激活，改變血小板的形態(tài)，從而表現(xiàn)強(qiáng)大的級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)[25]。LPA可能通過調(diào)節(jié)活化血小板導(dǎo)致門靜脈內(nèi)高凝狀態(tài)，同時(shí)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞、血小板及纖維蛋白相互作用，形成門靜脈癌栓。endprint

本研究由于樣本例數(shù)偏少，并且僅做近期隨訪，無完整生存資料，導(dǎo)致結(jié)論有一定的局限性。下一步將擴(kuò)大樣本例數(shù)及進(jìn)一步的分層，并與新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行比較分析。臨床上合并PVTT常決定治療方案的選擇，通過腫瘤標(biāo)記物的檢查，早期診斷PVTT對(duì)于臨床具有重要的臨床意義。同時(shí)深入基礎(chǔ)研究，進(jìn)一步闡明PVTT發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)理，為PVTT的治療提供更多的靶點(diǎn)。肝癌患者LPA的血漿濃度與門靜脈癌栓形成有一定的正相關(guān)性，可作為反映門靜脈癌栓形成的標(biāo)記物，對(duì)于肝癌臨床分期及治療能提供指導(dǎo)意義。

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（收稿日期：2016-07-22） （本文編輯：周亞杰）endprint