王東曉+孫杰

[摘要] 目的 探討培土生金法對(duì)肺脾兩虛型COPD大鼠肺功能影響。方法 于2016年6—7月，在甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心開展研究。采用每日被動(dòng)煙熏、氣管內(nèi)兩次注射脂多糖及灌服番瀉葉的方法，復(fù)制大鼠肺脾兩虛型COPD模型；實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為正常組、模型組及治療組，在第28天做大鼠肺功能測(cè)定，光鏡觀察大鼠肺組織病理變化。結(jié)果 與正常組比較，模型組MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s均明顯降低；MV、PEF（P<0.05），PIF（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比，治療組MV（118.17±6.64）mL、PIF（9.05±0.56）mL/s、PEF（9.88±0.82）mL/s均升高；PIF、PEF（P<0.05），MV（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組大鼠支氣管壁及周圍組織大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡壁變薄或斷裂，部分肺泡融合形成肺大皰；治療組大鼠肺組織損傷明顯減輕。結(jié)論 培土生金法可以緩解肺脾兩虛型COPD大鼠呼吸系統(tǒng)及全身癥狀，改善肺功能。

[關(guān)鍵詞] 培土生金；慢性阻塞性肺疾??；肺脾兩虛型；肺功能

[中圖分類號(hào)] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2016）11（a）-0040-03

[Abstract] Objective To investigate effect of the Method of reinforcing earth to strengthen metal on lung function in pulmonosplenic asthenia rats with COPD.Methods From June to July 2016， the research had been developed in Animal Experimental center. Pulmonosplenic asthenia rats models with COPD were established by forcing rats to smoke every day ，injecting LPS in the airway two times and feeding with decoction of Folium Sennae.Rats were randomized into the normal group， model group and treatment group. In the 28th day，the lung function was measured and the pathologic changes of lung tissue was examined by microscope.Results Compared with the normal group，MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s were significantly decreased in the model group，MV、PEF（P<0.05），PIF（P<0.01），the difference had significance of statistics.Compared with the model group，MV（118.17±6.64）mL、PIF（9.05±0.56）mL/s、PEF（9.88±0.82）mL/s were all increased in the treatment group，PIF、PEF（P<0.05），MV（P<0.01），the difference had significance of statistics.In the model group，plentiful inflammatory cells infiltration in the bronchial wall and surrounding tissue，alveolar walls became thin or rupture，some alveolar formed pulmonary bulla.The lung tissue damage In the treatment group decreased obviously.Conclusion The method of reinforcing earth to generate metal could relieve the respiratory system disease and general symptoms， improve lung function in pulmonosplenic asthenia rats with COPD.

[Key words] Reinforcing earth to generate metal；COPD；The Lung and Spleen Deficiency Syndrome；Lung function

慢性阻塞性肺疾?。–OPD）以不完全可逆的氣流受限為特征。氣流受限呈進(jìn)行性發(fā)展，伴有氣道和肺對(duì)有害顆?；驓怏w所致慢性炎癥反應(yīng)的增加[1]。中醫(yī)將其歸于“肺脹”范疇，認(rèn)為病變首先在肺，繼而影響到脾，中焦脾土的病變是COPD傳變或惡化的關(guān)鍵。脾虛則邪易侵，易生痰，肌肉削，進(jìn)而致疾病纏綿。實(shí)驗(yàn)于2016年6—7月，選取甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心清潔級(jí)Wistar大鼠30只作為研究對(duì)象。采用氣管內(nèi)滴注LPS，被動(dòng)吸煙及灌服番瀉葉法建立肺脾兩虛型COPD大鼠模型。選取參苓白術(shù)散干預(yù)治療，觀察其對(duì)模型大鼠肺功能和肺組織病理的影響，探討其可能的作用機(jī)制，以期為臨床培土生金法治療肺脾兩虛型COPD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 動(dòng)物

3月齡清潔級(jí)Wistar大鼠共30只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，隨機(jī)分為3組：即正常組，模型組，治療組，每組各10只。

1.2 受試藥物

番瀉葉浸液：番瀉葉浸泡12 h，絞汁過濾，裝入燒杯，濃縮至含生藥1 g/mL，4 ℃冰箱保存；參苓白術(shù)散：由人參、白術(shù)、茯苓、甘草、山藥、蓮子、白扁豆、薏苡仁、砂仁、桔梗等藥物組成，實(shí)驗(yàn)選用免煎劑。均購(gòu)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院門診中藥房。

1.3 主要試劑及儀器

脂多糖（批號(hào) L-2880）；蘭州牌香煙（焦油量14 mg 煙氣煙堿量1.1 mg，煙氣一氧化碳量 14 mg）；生物信號(hào)采集系統(tǒng)。

2 方法

2.1 造模方法

采用宋一平等[2]研究方法加以改良建立大鼠COPD模型。第1、14天，經(jīng)口氣管滴注LPS：大鼠麻醉后，頭部自由垂落于鼠板邊緣，四肢寬松固定于鼠板。暴露口腔，以卵圓鉗向前外側(cè)牽拉舌頭。將喉鏡插入大鼠口中壓緊舌根防止后墜，同時(shí)向上提拉下頜，燈光下可見大鼠喉部有一透亮區(qū)，于吸氣相將氣管插管插入氣道。同時(shí)將氣管套管拔出，將1 mL針管內(nèi)先抽入相應(yīng)量溶于生理鹽水的LPS（1 mg/mL），于大鼠吸氣瞬間迅速推注LPS（大鼠用量0.1 mg）。再向氣管內(nèi)迅速推注0.5～1 mL氣體1～2次以使LPS充分分布于肺組織內(nèi)。拔出針管，輕拍大鼠胸背部，并輕抖動(dòng)，使藥物均勻分布于肺內(nèi)。 第 2～28天（滴注LPS當(dāng)天不煙熏，正常組呼吸空氣），每日上午將大鼠放于染毒箱內(nèi)，持續(xù)煙熏30 min后，置于鼠籠常規(guī)飼養(yǎng)。自造模第7天起在熏煙前30 min給予濃度1 g/mL冰冷番瀉葉浸液，按1 mL/100 g體重的劑量，連續(xù)灌胃至28 d造模結(jié)束。

2.2 給藥方法

實(shí)驗(yàn)藥物用量均按體表面積比率（D2=D1×0.018×5）配制藥液，臨床等效劑量為實(shí)驗(yàn)中劑量。注 D2：大鼠（200 g）的臨床等效劑量，D1：成人（70 kg）日用量。模型復(fù)制成功后進(jìn)行藥物干預(yù)，按1 mL/100 g體重的劑量灌胃：治療組給予參苓白術(shù)散灌胃治療，正常組給予等容量生理鹽水灌胃。每日下午 1 次 ，連續(xù)灌胃干預(yù)至28 d。

2.3 實(shí)驗(yàn)觀察與指標(biāo)檢查

2.3.1 肺功能測(cè)定 用10%水合氯醛（國(guó)藥準(zhǔn)字H37022673）（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，待其完全麻醉，將大鼠固定于手術(shù)臺(tái)上，大鼠喉鏡經(jīng)口氣管插管方法，插入Y型氣管插管并固定，將插管一端連接生物信號(hào)采集系統(tǒng)傳感器，自動(dòng)描記呼吸曲線，測(cè)定大鼠每分鐘通氣量（MV）、呼氣峰流量（PEF）及吸氣峰流量（PIF）等指標(biāo)。

2.3.2 標(biāo)本采集與處理 肺功能測(cè)定完畢，取血后處死大鼠，開胸分離肺臟，取左肺上葉，肉眼觀察后，用生理鹽水拭去肺表面血漬置于4%多聚甲醛溶液中外固定。酒精梯度脫水，浸蠟，包埋，切片，HE染色，于光鏡下觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料符合正態(tài)性分布，采用（x±s）表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 肺功能檢測(cè)結(jié)果

與正常對(duì)照組比較，模型組MV、PEF、PIF均降低（P<0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比較，治療組流量指標(biāo)PIF、PEF、MV均升高（P<0.05），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

3.2 大鼠肺組織形態(tài)學(xué)改變

正常組呼吸道及肺泡結(jié)構(gòu)正常，支氣管纖毛排列整齊，支氣管腔及肺泡腔未見炎癥。模型組大鼠肺組織支氣管壁及周圍組織有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張充血，氣管粘膜上皮部分脫落，管壁增生，肺泡壁變薄或斷裂，部分融合成肺大皰，符合COPD的病理改變[3]，提示造模成功。治療組大鼠肺組織損傷明顯減輕。

4 討論

實(shí)驗(yàn)采用持續(xù)熏煙，兩次氣管滴注LPS配合灌服番瀉葉的方法制作大鼠肺脾兩虛COPD模型。肺功能可動(dòng)態(tài)反映COPD通氣功能，較好地評(píng)價(jià)氣流受限的程度。有研究顯示，培哚普利通過下調(diào)C0PD大鼠血清和肺組織勻漿中IL-8、TNF-a含量，改善肺功能。與模型組比，PEF（25.77±3.45）mL/s升高，（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[4]。氨茶堿和辛伐他汀通過減輕氣道炎癥和氣道黏液高分泌作用來達(dá)到防治慢阻肺的目的[5]。與模型組比，氨茶堿組PEF（21.66±1.86）L/min，辛伐他汀組PEF（24.85±0.90）L/min均升高；（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

該實(shí)驗(yàn)，與正常組比，模型組MV（98.99±0.74）mL、PIF（8.11±0.21）mL/s、PEF（8.55±0.32）mL/s均明顯降低；MV、PEF（P<0.05），PIF（P<0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，反映呼吸能力下降，氣道通暢性欠佳，提示大鼠模型成功。與模型組比，治療組MV（118.17±6.64）mL/s、PIF（9.05±0.56）mL/s、PEF（9.88±0.82）mL/s均升高；PIF、PEF（P<0.05），MV（P<0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明參苓白術(shù)散能改善模型組大鼠氣流受限狀態(tài)。病理顯示，治療組大鼠肺組織損傷明顯減輕。培土生金法改善營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和免疫功能，緩解呼吸肌疲勞，有效阻止慢阻其病理改變的發(fā)展，延緩肺功能的進(jìn)行性下降；相比于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究多通過減輕局部肺組織炎癥，改善肺功能，有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

COPD穩(wěn)定期營(yíng)養(yǎng)不良表現(xiàn)為胸悶、消瘦、腹瀉、動(dòng)則氣短加重等癥狀，中醫(yī)辨證屬肺脾兩虛證，選用參苓白術(shù)散治療COPD，契合病機(jī)。參苓白術(shù)散出自宋代官方頒布的《太平惠民和劑局方》，全方有補(bǔ)肺氣，健脾氣，培土生金，兼以滲濕濁，行氣滯之功，被后世奉為“培土生金”法（即補(bǔ)脾益肺法）代表方。徐升等[6]研究表明黃芪建中湯組 FEV0.3/FVC、PEF、FEV0.3明顯升高（P<0.05），提出了培土生金法明顯改善COPD大鼠肺功能、延緩COPD的進(jìn)程。許堅(jiān)等[7]通過前期臨床研究初步證實(shí)，培土生金法能提高慢阻肺患者免疫功能，減少急性發(fā)作次數(shù)，延緩疾病進(jìn)展，降低病情程度，提高生存質(zhì)量。王小祥等[8]研究表明參苓白術(shù)散加減很好改善慢阻肺穩(wěn)定期肺脾兩虛型中醫(yī)證候。該研究采用培土生金法治療肺脾兩虛型COPD，有其臨床及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，療效確切。

綜上所述，參苓白術(shù)散雖不能防止大鼠COPD的形成，但通過健脾益肺，提高機(jī)體抵免疫力，減少感染機(jī)會(huì)；減少痰液分泌，通暢氣道；增進(jìn)食欲，改善營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)；緩解呼吸肌疲勞，延緩肺功能下降。將培土生金法貫穿臨床診治全程，發(fā)揮中醫(yī)辨證論治特色，將為研發(fā)治療肺脾兩虛型COPD的有效中醫(yī)復(fù)方提供理論依據(jù)。

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（收稿日期：2016-08-05）