孫艷香，陶軍，馮力，袁勇，黃炫生，張勵(lì)庭

冠心病研究

抗血管緊張素II 1型受體自身抗體與原發(fā)性高血壓患者合并急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的分析

孫艷香，陶軍，馮力，袁勇，黃炫生，張勵(lì)庭

目的：探討抗血管緊張素II 1型（AT1）受體自身抗體（AT1-AAs）與原發(fā)性高血壓患者合并急性冠狀動(dòng)脈綜合征（ACS）的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

急性冠狀動(dòng)脈綜合征; 高血壓; C反應(yīng)蛋白質(zhì)；自身抗體

(Chinese Circulation Journal, 2017,32:149.)

抗血管緊張素Ⅱ1型（AT1）受體自身抗體（AT1-AAs）具有擬血管緊張素Ⅱ （AngⅡ） 的效應(yīng)，參與血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)激酶的激活，并引起細(xì)胞增殖、血管重構(gòu)等一系列反應(yīng)[1，2]。近來，李大強(qiáng)等[3]表明AT1-AAs陽性組狹窄病變例數(shù)顯著高于陰性組，認(rèn)為AT1-AAs陽性是冠心病的危險(xiǎn)因素之一，從而提示AT1-AAs對冠心病有一定的預(yù)測價(jià)值。Perrone-Filardi等[4]研究則表明AT1受體和β受體阻斷劑合用可以改善高危險(xiǎn)性高血壓患者的血管內(nèi)膜功能。上述結(jié)果顯示AT1-AAs在高血壓以及冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。而急性冠狀動(dòng)脈綜合征（ACS）中，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定與斑塊內(nèi)炎癥因子的激活、所處血管管壁張力的變化以及環(huán)境因素等相關(guān)[5，6]。結(jié)合前述已有研究，我們分析在高血壓合并ACS患者中，該自身抗體是否通過其擬AngⅡ效應(yīng)如促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)而進(jìn)一步促進(jìn)ACS患者斑塊的不穩(wěn)定及ACS的發(fā)生發(fā)展？本試驗(yàn)提出并旨在闡明AT1-AAs與高血壓患者合并ACS的患病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。

1 資料與方法

研究對象選擇：2009-06至2009-12期間收住本院心內(nèi)科患者共83例，其中高血壓合并ACS （高血壓＋ACS組）28例、單純ACS（ACS組）29例、單純高血壓（高血壓組）26例；另選門診體檢中心健康者為正常對照組23例。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)美國心臟病協(xié)會(huì)（AHA）標(biāo)準(zhǔn)[7]定義為出現(xiàn)靜止性心絞痛、新發(fā)心絞痛或進(jìn)行加重的心絞痛，心電圖出現(xiàn)ST段壓低或T波倒置，心肌壞死標(biāo)志物如肌鈣蛋白T或I（TnT或TnI）或肌酸激酶同工酶（CK-MB）升高，ST段抬高則可能發(fā)展至Q波性心肌梗死。（2）高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)按2005年中國高血壓防治指南定義為: 靜坐休息5 min以上，重復(fù)測2次以上上臂血壓，收縮壓≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒張壓≥90 mmHg， 或在服降壓藥情況下血壓正常；（3）糖尿病的定義為糖尿病的癥狀加隨機(jī)血糖≥11.1 mmol/L，或空腹血糖≥7.0 mmol/ L，或口服葡萄糖耐量試驗(yàn)中2 h血糖≥11.1 mmol/L（至少測量2次以上） 。

資料采集：患者的一般資料包括性別、年齡、高血壓、糖尿病病史、吸煙史、血糖、血脂及血清超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）水平等。所有患者經(jīng)病史、體檢、超聲心動(dòng)圖及實(shí)驗(yàn)室檢查，排除各種心肌病、心臟瓣膜病及繼發(fā)性高血壓病和伴有嚴(yán)重威脅生命疾病的病例。

研究方法：（1）多肽抗原的制備及AT1-AAs 的檢測：采用固相多肽合成法，用PSSM28 型多肽自動(dòng)合成儀（日本SHIMADZU 公司） ，合成具有抗原決定簇AT1受體胞外第二環(huán)肽肽段[2]，AT1 受體肽段氨基酸序列為: His-Trp-Ile-His-Arg-Asn-Val-Phe-Phe-Ile-Glu-Asn-Ile-Thr-Val-Cys-Ala-Phe-His-Tyr-Glu-Ser-Gln-Asn-Ser-Thr-Leu（AT1受 體165-191位氨基酸殘基） ，高壓液相色譜分析合成肽的純度> 95 %。酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測血清中AT1-AAs，受體抗原的包被濃度為100 mg/ml，血清稀釋液度為1∶40，辣根過氧化物酶標(biāo)抗體（海泰生物制藥公司） 稀釋濃度為1∶2000 ，抗體定性判斷以P/ N ≥2.1為陽性[ P/N=（標(biāo)本吸光度值-空白對照吸光度值） / （陰性對照吸光度值- 空白對照吸光度值） ]。（2）其它血生化指標(biāo)的檢測：包括空腹血糖、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、hs-CRP等。

2 結(jié)果

各組一般臨床資料比較（表1）：四組比較吸煙史、AT1-AA、hs-CRP、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）。

不同組間一般臨床資料兩兩比較（表1）：（1）AT1-AAs：高血壓+ACS組及高血壓組其血清AT1-AAs水平則顯著高于正常對照組，同時(shí)高血壓+ACS組也明顯高于高血壓組；（2）血清hs-CRP：正常對照組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組；（3）TC: 正常對照組及高血壓組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組；（4）LDL-C:正常對照組及高血壓組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組；（5）HDL-C: 正常對照組高于高血壓+ACS組及ACS組；（6）空腹血糖: 正常對照組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.05）。

表1 各組一般臨床資料比較（）

表1 各組一般臨床資料比較（）

注：ACS：急性冠狀動(dòng)脈綜合征；AT1-AA：抗血管緊張素ⅡI型受體自身抗體；hs-CRP：超敏C反應(yīng)蛋白；TC：膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯。*：光密度值。與正常對照組比較aP≤ 0.05;bP< 0.01;與高血壓組比較cP< 0.05

項(xiàng)目 正常對照組(n=23)高血壓+ACS組(n=28) ACS組(n=29)高血壓組(n=26) P值男性[例 (%)] 15 (65.22) 21 (75.00) 25 (86.21) 16 (62.50) 0.211年齡[歲] 48.22±9.18 62.36±10.73 58.09±10.42 61.13±11.96 0.082糖尿病[例 (%)] 1 (4.35) 5 (17.86) 4 (13.79) 3 (11.54) 0.156吸煙史[例 (%)] 5 (21.74) 20 (71.43)b 20 (68.97)b 7 (26.92) 0.000 AT1-AAs* 0.21±0.06 0.40±0.05bc 0.26±0.09 0.33±0.10a 0.001血清hs-CRP (mg/L) 1.18±1.08 4.89±1.93b 4.72±1.37a 3.03±1.76 0.018 TC (mmol/L) 4.60±0.68 5.57±0.98ac 5.61±1.01ac 4.87±1.04 0.035 LDL-C (mmol/L) 2.43±0.53 3.70±0.84ac 3.97±0.70ac 2.59±0.83 0.024 HDL-C (mmol/L) 1.59±0.33 1.21±0.30a 1.22±0.32a 1.49±0.28 0.046 TG (mmol/L) 1.22±0.48 1.88±1.52 1.52±1.18 1.52±0.57 0.249空腹血糖 (mmol/L) 5.13±0.96 7.05±2.83b 7.15±1.82b 5.98±1.16 0.002

多元線性回歸分析（表2）：AT1-AA與血清hs-CRP、血糖、血脂的多元線性回歸分析表明僅血清hs-CRP與AT1-AAs呈正相關(guān)（r=0.406， P<0.01）。

不同組間AT1-AA與血清hs-CRP的線性相關(guān)性分析（表3）：進(jìn)一步對各組間AT1-AAs水平與血清hs-CRP表達(dá)進(jìn)行分析，提示在高血壓＋ACS組、ACS組及高血壓組中，其AT1-AA水平與血清hs-CRP表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r分別為0. 589、0.503、0.273，P均<0.01）。

表2 抗血管緊張素ⅡI型受體自身抗體與血清超敏C反應(yīng)蛋白、血糖、血脂的多元線性回歸分析

表3 不同組間抗血管緊張素ⅡI型受體自身抗體與血清超敏C反應(yīng)蛋白的線性相關(guān)性分析

3 討論

AT1-AAs在原發(fā)性高血壓患者血清中檢出率明顯高于正常血壓者，且該自身抗體具有明顯的激動(dòng)樣生物學(xué)效應(yīng)，如促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)信號分子和原癌基因的表達(dá)致細(xì)胞增殖、致胞內(nèi)鈣增加及血管壁的重構(gòu)、炎癥因子表達(dá)等[1，2，8-12]。另外，長時(shí)間AT1-AAs免疫大鼠后可觀察到其致主動(dòng)脈內(nèi)膜功能失調(diào)，血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌內(nèi)皮素（ET）-1及細(xì)胞間黏附分子（ICAM）-1水平顯著增高[13]。關(guān)于該自身抗體其產(chǎn)生機(jī)制，最近有研究表明妊娠高血壓患者AT1-AAs的產(chǎn)生可能與胎盤灌注不足、缺血缺氧所致血管內(nèi)皮功能受損、局部炎癥有關(guān)，且產(chǎn)生的AT1-AAs激活A(yù)T1受體而介導(dǎo)妊娠高血壓的發(fā)生發(fā)展，該研究還表明AT1-AAs水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[14]。同時(shí)既往資料顯示，高血壓病程及家族史與AT1-AAs陽性率呈明顯正相關(guān)[15]，提示長時(shí)間血壓升高可能導(dǎo)致血管內(nèi)膜受損，自身抗原暴露，導(dǎo)致自身T細(xì)胞免疫功能的失調(diào)導(dǎo)致抑制性T細(xì)胞減少而自身反應(yīng)性T細(xì)胞激活等最終至自身抗體產(chǎn)生[16]。本研究結(jié)果也表明，高血壓組及高血壓+ACS組AT1-AAs水平明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； ACS組其AT1-AAs表達(dá)也高于正常對照組，但差異未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，本研究結(jié)果表明AT1-AAs與單純ACS的發(fā)生可能無明顯相關(guān)性，同時(shí)也不排除收集樣本少所致統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著；但在合并高血壓情況下，AT1-AAs與ACS發(fā)病呈明顯正相關(guān)，考慮可能與長期血壓升高所致的血管內(nèi)膜受損基礎(chǔ)上，同時(shí)伴有AT1-AAs明顯升高的狀態(tài)下，該自身抗體促進(jìn)受損血管內(nèi)膜炎癥因子釋放、局部血小板聚集及血管收縮等，從而局部斑塊形成、破裂而致ACS。結(jié)果表明AT1-AAs可能是高血壓患者ACS發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

研究表明，多種炎癥因子及免疫機(jī)制參與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化及其斑塊形成[6，17，18]， 胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子（NF）-κB及活化蛋白-1（AP-1）核轉(zhuǎn)錄因子活化并介導(dǎo)促炎因子腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等分泌，IL-6繼而通過炎癥因子的級聯(lián)放大效應(yīng)促進(jìn)多種炎癥因子，其中包括C反應(yīng)蛋白（CRP）水平的顯著增加。同時(shí)已有資料顯示CRP是冠心病及ACS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[19，20]。而既往研究也闡明AT1-AAs通過活化細(xì)胞內(nèi)NF-κB及AP-1兩個(gè)重要的核轉(zhuǎn)錄因子而介導(dǎo)血管炎癥反應(yīng)[4]。因此，本研究進(jìn)一步闡明了AT1-AAs與高血壓合并ACS患者血清hs-CRP之間的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果表明，高水平的AT1-AAs與血清hs-CRP表達(dá)呈明顯正相關(guān)，在正常血壓人群中兩者無明顯關(guān)聯(lián)性。而AT1-AAs是否也通過該信號通路即活化細(xì)胞內(nèi)NF-κB及AP-1，繼而介導(dǎo)IL-6分泌，最終促進(jìn)肝臟合成和分泌CRP，而致CRP升高則有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

因此，本研究闡明了AT1-AAs與高血壓合并ACS患者的發(fā)生呈明顯正相關(guān)，即該自身抗體是高血壓患者ACS發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一，且AT1-AAs水平與炎癥因子血清hs-CRP表達(dá)也明顯正性關(guān)聯(lián)。本文的不足在于樣本量較少，但結(jié)果已表明各組存在明顯差異。所以，通過聯(lián)合AT1-AAs和血清hs-CRP的檢測可對臨床上高血壓合并ACS患者斑塊穩(wěn)定性的預(yù)測及疾病的發(fā)展起到一定的指導(dǎo)作用。

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Correlation Study Between Angiotensin II Type1 Receptor Autoantibodies and the Onset Risk in Patients With Essential Hypertension Combining Acute Coronary Syndrome

SUN Yan-xiang, TAO Jun, FENG Li, YUAN Yong, HUANG Xuan-sheng, ZHANG Li-ting.
Department of Cardiology, Zhongshan City People’s Hospital, Zhongshan (528400), Guangdong, China

SUN Yan-xiang, Email: syx1298509@163.com

Objective: To study the correlation between angiotensin II type1 receptor autoantibodies (AT1-AAs) and the onset risk in patients with essential hypertension (EH) combiningacute coronary syndrome (ACS).Methods: Our research included in 4 groups: EH+ACS group, n=28, ACS group, n=29, EH group, n=26 and Control group, n=23 normal subjects. Serum levels of AT1-AAs were examined by ELISA; high sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), blood levels of lipids and glucose were also measured and compared among different groups. The correlations between AT1-AAs and blood lipids, glucose, hs-CRP were studied by multiple linear regression analysis.Results: Compared with Control group, ACS group had similar level of AT1-AAs (0.26±0.09) vs (0.21±0.06), P=0.105; while EH+ACS group and HE group had increased AT1-AAs level as (0.40±0.005) and (0.33±0.10), P=0.001 and P=0.02 respectively; AT1-AAs level was higher in EH+ACS group than HE group, P=0.044. In addition, serum AT1-AAs level was positively related to hs-CRP in EH+ACS group, ACS group and EH group (r=0.589, r=0.503 and r=0.273, all P<0.01).Conclusion: Serum AT1-AAs level was positively related to the onset risk in patients with EH combining ACS; AT1-AAs was also related to hs-CRP at certain degree.

Acute coronary syndrome; Hypertension; C-reactive protein; Autoantibody

2016-02-26）

（編輯：梅平）

中國博士后科學(xué)基金(20100470982)；廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)基金(B2010342)

528400 廣東省，中山市人民醫(yī)院 心血管內(nèi)科（孫艷香、馮力、袁勇、黃炫生、張勵(lì)庭）；中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院高血壓血管病科（陶軍）

孫艷香 副主任醫(yī)師 博士 主要從事心血管免疫相關(guān)研究 Email: syx1298509@163.com 通訊作者：孫艷香

R541.4

A

1000-3614（2017）02-0149-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2017.02.009

方法：收集高血壓合并ACS患者（高血壓+ACS組）28例、單純ACS患者（ACS組）29例、單純高血壓患者（高血壓組）26例及正常對照組23例，采用酶聯(lián)免疫吸附法對標(biāo)本血清進(jìn)行抗AT1受體抗體檢測，分析并比較各組間AT1-AAs及血清超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、血脂、血糖等水平，進(jìn)一步通過多元線性回歸分析各組間AT1-AAs與血脂、血糖及炎癥因子血清hs-CRP表達(dá)的相關(guān)性。

結(jié)果：ACS組患者血清AT1-AAs水平較正常對照組升高（分別為0.26±0.09，0.21±0.06，P=0.105），但差異未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而高血壓+ACS組(0.40±0.05)及高血壓組(0.33±0.10)其血清AT1-AAs水平則顯著高于正常對照組（ P=0.01和0.02）同時(shí)高血壓+ACS組也明顯高于高血壓組（P=0.044）。另外，在除正常對照組外高血壓＋ACS組、ACS組及高血壓組中AT1-AAs水平與血清hs-CRP的表達(dá)呈正相關(guān)（r分別為0. 589、0.503、0.273，P均<0.01）。

結(jié)論：AT1-AAs與高血壓合并ACS患者的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，尤其與炎癥因子血清hs-CRP水平呈一定相關(guān)性。