滕 躍 蘇立強(qiáng) 秦世麗 王媛媛

(齊齊哈爾大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

獸藥［1］是用于預(yù)防、治療禽畜等動(dòng)物疾病，有目的地調(diào)節(jié)其生理機(jī)能的物質(zhì)。隨著動(dòng)物生長(zhǎng)過(guò)程中獸藥的廣泛使用，動(dòng)物性食品中獸藥原型及其代謝產(chǎn)物的殘留引起人們廣泛關(guān)注。高效液相色譜法、氣相色譜法、毛細(xì)管電泳法、色質(zhì)聯(lián)用法常用于動(dòng)物源性食品中獸藥殘留的檢測(cè)。但由于動(dòng)物源性食品基質(zhì)復(fù)雜，直接進(jìn)行檢測(cè)干擾較大，因此常選用適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)樣品進(jìn)行前處理。

本文對(duì)近幾年制備的常用獸藥類(四環(huán)素類、磺胺類、喹諾酮類、喹噁啉類等)分子印跡聚合物MIPs進(jìn)行了綜述，并對(duì)分子印跡聚合物在動(dòng)物源性食品中的應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。

1 分子印跡技術(shù)在獸藥分析中的應(yīng)用

近年來(lái)，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注食品安全問(wèn)題，獸藥的殘留與檢測(cè)成為監(jiān)管部門的重點(diǎn)工作，也成為研究人員的研究熱點(diǎn)。由于分子印跡技術(shù)的應(yīng)用廣泛性［2］，特異識(shí)別性，預(yù)定性，常被應(yīng)用于獸藥的前處理和檢測(cè)中。本文概述了幾種常用獸藥的分子印跡聚合物的研究進(jìn)展。

1.1 四環(huán)素類分子印跡聚合物

四環(huán)素類抗生素(TCs)為廣譜抗生素，主要作為飼料添加劑用于預(yù)防和治療疾病。在牛、豬、綿羊、山羊、家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的四環(huán)素類抗生素主要有土霉素(OTC)、金霉素(CTC)、四環(huán)素(TC)和強(qiáng)力霉素(DC)等［3］。我國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定了［4］四環(huán)素(母體及異構(gòu)體總量)在食用性動(dòng)物產(chǎn)品中最大殘留限量:肌肉中不超過(guò) 100 μg/kg，肝臟中不超過(guò) 300 μg/kg，腎臟中不超過(guò) 600 μg/kg，蛋中不超過(guò) 200 μg/kg，牛奶中不超過(guò) 100 μg/kg。

李倩［5］采用沉淀聚合法，以DC為模板分子，合成對(duì)TCs具有特異性識(shí)別的分子印跡聚合物。王雅群等人［6］，采用表面聚合法，合成了對(duì)TCs具有特異性吸附性能的Fe3O4@SiO2@MIP核殼型納米復(fù)合材料，經(jīng)磁分離固相萃取高效液相色譜(MSPEHPLC)技術(shù)，同時(shí)測(cè)定鵝胸肉、鵝腿肉、鴨胸肉、鴨腿肉、鯽魚肉以及牛奶樣品中三種四環(huán)素類抗生素的殘留。韓建坊［7］采用RAFTPP法，制備四環(huán)素分子印跡聚合物，將其作為色譜固定相，用液相色譜法對(duì)其識(shí)別能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并考察了不同流動(dòng)相對(duì)其保留行為的影響。歐紅香等人［8］，采用犧牲酵母模板法，以中空硅球作為基質(zhì)材料，TC為模板分子，N－異丙基丙烯酰胺為溫敏單體，合成了中空溫敏型 TC －MIPs。Niu等人［9］，以改性二氧化硅為載體，采用表面聚合法制備TC－MIPs。將其用作分子印跡固相萃取填料，應(yīng)用于牛奶中TC的分離富集。Tao Jing等人［10］，以CTC和DC為模板分子，采用沉淀聚合法制備四環(huán)素類分子印跡聚合物，將其作為固相萃取材料，對(duì)蜂蜜、牛奶、雞蛋和蝦仁中4種四環(huán)素類抗生素進(jìn)行富集。

1.2 喹諾酮類分子印跡聚合物

喹諾酮類抗生素(Quinolones，QNs)是一類人畜通用的藥物。因其具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、與其他抗菌藥物無(wú)交叉耐藥性和毒副作用小等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于畜牧、水產(chǎn)等養(yǎng)殖業(yè)中用于疾病防治［11］。我國(guó)于2002年規(guī)定了環(huán)丙沙星(CIP)、單諾沙星(DANO)、恩諾沙星(ENFX)、沙拉沙星(SAR)、二氟沙星(DIF)、噁喹酸(OXO)和氟甲喹(FLU)7種QNs藥物在動(dòng)物肌肉組織中的最高殘留限量為10～500 μg/kg［12］。，我國(guó)農(nóng)業(yè)部于 2015年發(fā)布了第 2292號(hào)公告［13］:禁止在動(dòng)物飼養(yǎng)中使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種藥物。

楊艷菲等人［14］，建立了分子印跡固相萃?。咝б合嗌V－串聯(lián)質(zhì)譜法，同時(shí)測(cè)定了雞肉中九種氟喹諾酮類藥物殘留湯萬(wàn)進(jìn)等人［15］，以氧氟沙星(OFLX)為模板分子，甲基丙烯酸和2－乙烯基吡啶為復(fù)合功能單體，二甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯(lián)劑，合成了印跡聚合物。將該材料作為特異性吸附劑結(jié)合高效液相色譜，對(duì)牛奶中痕量氟喹諾酮類藥物進(jìn)行吸附和檢測(cè)，取得了理想的重現(xiàn)性(RSD≤5.0%)和加標(biāo)回收率(93.72%102.14%)。Sun 等人［16］，以O(shè)FLX為模板分子，甲基丙烯酸為功能單體，在甲醇水溶液中成功聚合了OFLX－MIPs。所得印跡物作為特殊的吸附劑用于固相萃取尿樣中的喹諾酮類藥物，顯示了很好的吸附效果。汪雪雁等人［17］，以ENFX為模板分子，α－甲基丙烯酸為功能單體，二甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯(lián)劑，制備了ENFX－MIPs。以該分子印跡聚合物為固相萃取材料，結(jié)合高效毛細(xì)管電泳，建立了分子印跡固相萃?。咝?xì)管電泳法，檢測(cè)了雞肉中ENFX的含量。毛艷麗等人［18］，以環(huán)丙沙星(CIP)為模板分子，乙烯基功能化的磁性伊利石為基質(zhì)材料，采用表面聚合物法，制備環(huán)丙沙星印跡材料。結(jié)合高效液相色譜分析技術(shù)，將所制備的MIPs應(yīng)用于環(huán)境樣品中CIP的分離富集。趙麗娟等人［19］，以γ－(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷(MPS)修飾的磁性二氧化硅(Fe3O4@SiO2)為載體，加替沙星(GTFX)為模板分子，采用表面印跡法制備磁性表面分子印跡聚合物，將此表面印跡材料用于牛奶中GTFX的分離富集，采用高效液相色譜法檢測(cè)，回收率大于91.5%。蘇立強(qiáng)課題組［20］，以GTFX為模板分子，采用溶膠－凝膠分子印跡技術(shù)，合成了GTFX－MIPs，以該印跡聚合物為固相萃取材料，結(jié)合超高效液相色譜法，對(duì)牛奶樣品中GTFX進(jìn)行富集與檢測(cè)，其回收率為79.87%，富集倍數(shù)為38，高于市售C18柱，具有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值;以馬波沙星為模板分子，采用溶膠－凝膠法制備了馬波沙星分子印跡聚合物，以印跡聚合物為固相萃取填料，結(jié)合超高效液相色譜法，應(yīng)用于雞蛋中馬波沙星的檢測(cè)，其回收率為 85.30%。2017年蘇立強(qiáng)課題組［21］，以工業(yè)廢料粉煤灰微球?yàn)榛|(zhì)，氧氟沙星(OFL)為模板分子，采用表面印跡法制備了聚合物。將其作為固相萃取填料對(duì)雞產(chǎn)品進(jìn)行分離富集，與C18柱相比，分離富集效果更好。

1.3 喹噁啉類分子印跡聚合物

喹噁啉類(Quinoxalines)是人工合成的具有喹噁啉－1，4－二氮氧結(jié)構(gòu)的動(dòng)物專用藥，其具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，廣譜抗菌和抗球蟲等作用，曾被廣泛應(yīng)用于禽畜、水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。喹噁啉類藥物進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后，會(huì)在動(dòng)物組織內(nèi)發(fā)生蓄積殘留，通過(guò)食用受污染的動(dòng)物機(jī)體或相關(guān)的動(dòng)物源性食品會(huì)轉(zhuǎn)入人類食物鏈［22～24］。我國(guó)農(nóng)業(yè)部［25］在2001年168號(hào)公告中明確規(guī)定禁止喹乙醇用于家禽和水產(chǎn)養(yǎng)殖中，僅用于35千克以下的豬促生長(zhǎng)。而卡巴氧在美國(guó)僅被允許作為治療藥物使用，我國(guó)農(nóng)業(yè)部因卡巴氧的安全性問(wèn)題會(huì)影響我國(guó)動(dòng)物性食品安全、公共衛(wèi)生以及動(dòng)物性食品出口，在2005年560號(hào)公告明確禁用［26］。

2011年，周建華課題組［27］，采用本體聚合的方法，合成喹乙醇的分子印跡聚合物，并將其作為固相萃取吸附劑，對(duì)肉制品中的喹乙醇分離和富集，采用高效液相色譜方法檢測(cè)喹乙醇。2012年，方國(guó)臻課題組［28］，用卡巴氧的標(biāo)示殘留物喹噁啉羧酸為模板分子，以N，N－二乙基氨基乙基丙烯酸酯為功能單體，乙二醇雙甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，于四氫呋喃溶劑中，釆用本體聚合法合成了分子印跡聚合物。2013年，喬旭光課題組［29］以喹乙醇為模板，采用本體聚合法和表面聚合法，制備喹乙醇印跡聚合物，與高效液相技術(shù)聯(lián)用檢測(cè)魚飼料中喹乙醇的含量。

1.4 磺胺類分子印跡聚合物

磺胺類藥物(Sulfonamides，SAs)是人工合成的具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類抗菌藥物的總稱。其具有抗菌譜廣、抗菌力強(qiáng)、吸收迅速完全和廉價(jià)易得等特點(diǎn)，廣泛用于預(yù)防和治療禽畜細(xì)菌性疾病［30］。我國(guó)農(nóng)業(yè)部規(guī)定［4］，磺胺類藥品在食用動(dòng)物的肌肉、脂肪、肝、腎、奶中均不得超過(guò)100 μg/kg。

秦世麗等人［31］，以磺胺甲基嘧啶和磺胺甲惡唑?yàn)閺?fù)合模板分子制備了對(duì)磺胺類抗生素(SAs)具有組選擇吸附性能的印跡聚合物。杜碧柏等人［32］，以磺胺嘧啶為模板，采用紫外光引發(fā)合成MIPs，以MIPs作為吸附劑制備固相萃取柱，建立了基于分子印跡聚合物為吸附劑的固相萃取技術(shù)結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)飼料中五種磺胺類藥物(SAs)的方法。祖廣權(quán)等人［33］，以磺胺二甲氧嗪為模板分子，三氟甲基丙烯酸為功能單體，采用沉淀聚合法制備了MIPs。以該印跡聚合物為固相萃取填料，結(jié)合超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)豬肉中磺胺二甲氧嗪。

1.5 β－內(nèi)酰胺類分子印跡聚合物

β－內(nèi)酰胺類抗生素是種類及應(yīng)用很廣的抗生素，包括青霉素及其衍生物、頭孢菌素、單酰胺環(huán)類、碳青霉烯類和青霉烯類酶抑制劑等。β－內(nèi)酰胺類抗生素本身的毒性一般都很低，但是它們與蛋白產(chǎn)生的復(fù)合物可以成為非常強(qiáng)烈的致敏源，引起的主要問(wèn)題是細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，促成具有耐藥基因的菌株［34～35］。

熊南茜等人［36］，以α－甲基丙烯酸(MAA)為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，青霉素V鉀為模板分子，制備了分子印跡聚合物并對(duì)其性能進(jìn)行研究。王萍等人［37］，以青霉素中間體6－氨基青霉烷酸為虛擬模板分子，甲酸作為致孔劑，甲基丙烯酸為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，合成MIPs。使用該MIPs裝填的固相萃取柱對(duì)牛乳樣品進(jìn)行預(yù)處理，并采用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)。汪雪雁等人［38］，以7－氨基頭孢烷酸為模板分子，4－乙烯基吡啶為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，制備了7－氨基頭孢烷酸分子印跡聚合物。以該分子印跡聚合物為固相萃取材料，以高效毛細(xì)管電泳為檢測(cè)手段，進(jìn)行頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢哌酮、頭孢唑啉等四種頭孢類藥物的色譜分析。

2 結(jié)論與展望

綜上所述，由于獸藥殘留嚴(yán)重危害人類健康，制備獸藥類分子印跡聚合物對(duì)其進(jìn)行有效的分離和富集成為研究熱點(diǎn)。但在過(guò)去的研究中，研究人員多采用單一模板制備分子印跡聚合物，這大大限制了分子印跡聚合物在多種藥物殘留中的應(yīng)用。因此，制備對(duì)一類獸藥具有良好選擇性的分子印跡聚合物，將成為今后的研究熱點(diǎn)。除此之外，對(duì)分子印跡聚合物的制備機(jī)理還有待更加深入的研究，為分子印跡聚合物的制備奠定理論基礎(chǔ)。

［1］吳永寧，邵兵，沈建忠.獸藥殘留檢測(cè)與監(jiān)控技術(shù)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2007:3～5.

［2］韋壽蓮，劉玲，黎京華 等.雙分子印跡聚合物微球選擇固相萃取環(huán)境和食品樣品中壬基酚和雙酚A［J］.分析化學(xué).2015，43(01):105～109.

［3］張?jiān)?，張峰，周?等.食品中四環(huán)素類藥物殘留檢測(cè)前處理及分析方法研究進(jìn)展［J］.藥物分析雜志.2016，36(4):565～570.

［4］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)［Z］.2002－12－24.

［5］李倩.四環(huán)素類分子印跡聚合物的合成及其識(shí)別性能的研究［D］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2010.

［6］王雅群，潘道東.磁性分子印跡固相萃取食品中的四環(huán)素類抗生素殘留［J］.食品工業(yè)科技，2015，18:53～58.

［7］韓建坊.RAFT沉淀聚合法制備四環(huán)素分子印跡微球與表征［D］.西安電子科技大學(xué)，2011

［8］歐紅香，陳群匯，朱曉莉，等.中空硅球表面分子印跡溫敏聚合物吸附溶液中的四環(huán)素［J］.環(huán)境化學(xué).2016，35(5):901～909.

［9］Yuling Niu，Cong’an Liu，Jin Yang.，et al.Preparation of Tetracycline Surface Molecularly Imprinted Material for the Selective Recognition of Tetracycline in Milk［J］.Food A-nal.Methods，2016，9:2 342 ～2 351

［10］T.Jing ，X.D.Gao ，P.Wang.，et al.Determination of trace tetracycline antibiotics in foodstuffs by liquid chromatography–tandem mass spectrometry coupled with selective molecular－ imprinted solid phase extraction［J］.Anal Bioanal Chem .2009，393:2 009 ～2 018.

［11］趙思俊，李存，江海洋 等.高效液相色譜檢測(cè)動(dòng)物肌肉組織中7種喹諾酮類藥物的殘留［J］.分析化學(xué)，2007，35(06):786 ～790.

［12］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部令第22號(hào)［Z］.2010－01－21.

［13］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第2292號(hào)［Z］.2015－09－01.

［14］楊艷菲，曹旭敏，李雪蓮等.分子印跡固相萃?。咝б合嗌V－串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中9種氟喹諾酮藥物殘留［J］.色譜，2016，36(11):1 063 ～1 069.

［15］湯萬(wàn)進(jìn)，趙彤，周春紅等.復(fù)合功能單體法合成氧氟沙星分子印跡材料［J］.蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，50(1):136～144.

［16］Sun Hanwen，Qiao Fengxia.Recognition mechanism of water compatible molecularly imprinted solid－phase extraction and determination of nine quinolones in urine by high performance liquid chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2008，1212:1 ～9.

［17］汪雪雁，檀華蓉，祁克宗等.分子印跡固相萃?。咝?xì)管電泳法檢測(cè)雞肉中的恩諾沙星殘留［J］.色譜，2010，28(11):1 107 ～1 110.

［18］毛艷麗，牛云峰，吳俊峰 等.磁性伊利石表面分子印跡材料的制備及其對(duì)環(huán)丙沙星識(shí)別特性研究［J］.分析化學(xué)，.2016，44(6):915 ～922

［19］趙麗娟，祁玉霞，魏纏玲 等.加替沙星磁性表面分子印跡材料的制備及其識(shí)別特性的研究［J］.分析化學(xué)，2016，44(10):1 562 ～1 567.

［20］杜麗麗.溶膠－凝膠法制備氟喹諾酮類藥物分子印跡聚合物及其應(yīng)用［D］.齊齊哈爾大學(xué)，2015.

［21］蘇立強(qiáng)，李晶，劉靜禹 等.粉煤灰基氧氟沙星分子印跡聚合物的制備及其固相萃取應(yīng)用研究［J］.化學(xué)通報(bào)，2017，80(03):293 ～297.

［22］王旭，程古月，周秋格等.獸用喹噁啉類毒理學(xué)研究進(jìn)展［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào) .2016，36(06):1 071～1 080.

［23］徐英江，任傳博，田秀慧 等.超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定水產(chǎn)品中的卡巴氧、喹烯酮、乙酰甲喹及其代謝物［J］.2011，30(10):1 133 ～1 137.

［24］范立鵬，段振娟，方國(guó)臻 等 .動(dòng)物源性食品中喹噁啉類藥物殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展［J］.中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2012，12(09):171 ～178.

［25］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第168號(hào)［Z］.2001－09－04.

［26］中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第580號(hào)［Z］.2005－10－28.

［27］魏玉偉.基于分子印跡的喹乙醇痕量殘留的提取及檢測(cè)方法研究［D］.山東師范大學(xué)，2011.

［28］易江華.喹噁啉－2－羧酸分子印跡聚合物制備及應(yīng)用［D］.天津科技大學(xué)，2012.

［29］趙冬艷.親水性分子印跡聚合物的制備及其在喹乙醇檢測(cè)中的應(yīng)用［D］.山東農(nóng)業(yè)大學(xué).2013.

［30］張娟，食源性動(dòng)物飼料中磺胺藥物殘留的檢測(cè)及其研究［J］.飼料工業(yè)，2017，38(02):82 ～85.

［31］秦世麗，蘇立強(qiáng)，王鵬.磺胺類復(fù)合模板分子印跡聚合物的制備及其應(yīng)用［J］.分析試驗(yàn)室.2016，35(05):590～595.

［32］杜碧柏，許楊，黃運(yùn)紅 等.分子印跡固相萃?。咝б合嗌V法測(cè)定飼料中磺胺類藥物［J］.2012，40(12):1 562～1 567.

［33］祖廣權(quán)，趙琪，譚＇策 等.分子印跡固相萃?。咝б合嗌V串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中磺胺二甲氧嗪［J］.分析實(shí)驗(yàn)室，2016，36(3):292 ～296.

［34］葉能勝，谷學(xué)新，張琦.固相萃取－高效液相色譜法檢測(cè)牛奶和豬肉中5種β－內(nèi)酰胺類抗生素［J］.分析實(shí)驗(yàn)室，2010，29(06):73 ～77.

［35］邢浩春，陳建中，葛水蓮等.動(dòng)物源性食品中β－內(nèi)酰胺類抗生素前處理及檢測(cè)方法研究進(jìn)展［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2016，42(03):268 ～274.

［36］熊南茜，何華，肖得力 等.青霉素V鉀分子印跡聚合物的制備及性能研究［J］.化學(xué)研究與應(yīng)用［J］.化學(xué)研究與應(yīng)用，2014，26(6):791 ～796.

［37］王萍，司雄元，檀華蓉 等.6－氨基青霉素烷酸分子印跡固相萃取柱在牛乳青霉素藥物檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2016.42(4):183 ～188.

［38］汪雪雁，祁克宗，陳玎玎 等.雞肉中頭孢類抗生素的MISPE－HPCE檢測(cè)［J］.江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，28(1):193～197.