馬淑芬+徐云+茍小軍

摘要：目的建立HPLC法測(cè)定胃炎顆粒中橙皮苷的含量。方法采用C18柱（250 mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為：甲醇-0.1% 磷酸水溶液（30-70）；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)283nm。結(jié)果橙皮苷的線性范圍為0.4536～3.024μg，r=0.9998，平均回收率為99.27%，RSD=1.18%。結(jié)論此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：胃炎顆粒；HPLC；橙皮苷

中圖分類號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）12-0091-02

【Abstract】Objective：To establish a HPLC method for the determination of hesperidin in Gastritis Granules. Method：C18 chromatographic column（250mm×4.6mm 5μm）was used. The mobile phase was methano l-0.1% phosphoric acid（30-70），with 1.0 mL/min of flow rate，and 283 nm of detection wavelength. Results：The linear range of hesperidin was from 0.4536 to 3.024μg，r=0.9998. The average recovery rate was 99.27% and RSD was 1.18%. Conclusion：The method is simple and accurate and can be used as a quality control method for hesperidin.

【Key words】gastritis granules，HPLC，hesperidin

胃炎顆粒系臨床經(jīng)驗(yàn)方，由陳皮、黨參、紫蘇子、炒扁豆、枳殼等12味中藥組成的復(fù)方制劑，具有溫中散寒，和胃止嘔的作用，臨床上用于胃脘滿悶，泛吐酸水等慢性胃炎病癥。方中陳皮為主藥，具有理氣健脾、燥濕化痰的功效[1]，橙皮苷是陳皮的主要活性成分，橙皮苷能降低膽固醇，抑制試驗(yàn)性潰瘍，降低毛細(xì)血管通透性，能增強(qiáng)纖維蛋白的溶解，抗血栓形成，具有調(diào)節(jié)腸胃功能以及利膽作用[2]。因此，為有效控制胃炎顆粒質(zhì)量，確保該制劑的療效與安全，本試驗(yàn)中以方中主藥陳皮的有效成分橙皮苷作為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜（HPLC）法直接測(cè)定橙皮苷的含量，結(jié)果滿意，專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，現(xiàn)報(bào)到如下。

1儀器與試藥

Agilent高效液相色譜儀（四元泵，DAD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器），Agilent1200化學(xué)工作站；BP211D型電子分析天平（德國(guó)Sartoius）。橙皮苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110721-200211）；胃炎顆粒（系自制）；水為超純水，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2方法

2.1色譜條件色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-1%磷酸水（22-78）；流速：1.0 mL/min；柱溫：3 0℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；進(jìn)樣量10 μL。在此條件下，橙皮苷與其他色譜峰分離良好，理論板數(shù)以橙皮苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000。

2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取橙皮苷7.56 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（0.1512 mg/mL）[3]。

2.3供試品溶液制備取本品適量，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，加于具塞三角燒瓶中，精密加入25 mL甲醇，稱定重量，冷浸2 h，超聲處理30 min，取出，放至室溫，稱重，用甲醇補(bǔ)充減失的重量，0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[4]。

2.4陰性對(duì)照試驗(yàn)按處方取缺陳皮的陰性對(duì)照藥，按供試品溶液制備方法，制得陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣，依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照液在相同位置處無(wú)與橙皮苷相對(duì)應(yīng)的色譜峰，表明處方中其它藥材和輔料不干擾橙皮苷的測(cè)定。

2.5線性關(guān)系的考察分別精密吸取對(duì)照品溶液3，5，10，15，20 μL進(jìn)樣，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，苦杏仁苷的回歸方程為Y=895.6X+573，r=0.9998，表明進(jìn)樣量在0.4536～3.024 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定橙皮苷峰面積值，計(jì)算木橙皮苷RSD為0.67%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0，2，4，8，24 h測(cè)定橙皮苷峰面積，結(jié)果RSD為1.21%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取同一批次的樣品6份，按照供試品溶液制備方法得到供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定橙皮苷的含量，其RSD為1.56%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法測(cè)定，取已知含量的樣品（批號(hào)：141109）研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，精密加入橙皮苷對(duì)照品適量，制成各自的供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.10樣品測(cè)定取3批樣品，各取1 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，10μL進(jìn)樣。結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

陳皮藥材中橙皮苷的法定測(cè)定方法是用石油醚回流提取，然后再加甲醇回流提取，以甲醇-醋酸-水為流動(dòng)相[5]，為了盡可能避免溶劑峰對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，本試驗(yàn)中采用的流動(dòng)相是甲醇-1%磷酸水（22-78），曾比較多種流動(dòng)相，以甲醇-1%磷酸水（20-80）作為流動(dòng)相，可使橙皮苷峰達(dá)到較好分離，峰形也較好，理論板數(shù)高，故選其作為流動(dòng)相。對(duì)于測(cè)定波長(zhǎng)的選定，筆者通過(guò)用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，對(duì)照品和供試品的甲醇溶液均在283 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇283 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)[6]。試驗(yàn)中采用曾考察了甲醇回流提取30 min，甲醇回流提取40 min，甲醇回流提取1 h，甲醇冷浸 1 h，甲醇冷浸2 h，甲醇冷浸2.5 h，甲醇、50%甲醇、乙醇等提取溶劑，結(jié)果表明，冷浸2 h，甲醇提取效果與甲醇回流提取30 min，效果相當(dāng)，為了節(jié)省資源，簡(jiǎn)單方便，選擇甲醇冷浸2 h，同時(shí)對(duì)超聲提取時(shí)間做了比較，分別超聲處理 10，15，20，30，40 min，結(jié)果表明，隨超聲時(shí)間延長(zhǎng)，含量也相應(yīng)增加，但 30 min后含量不再增加，故選擇超聲提取 30 min。

參考文獻(xiàn)：

[1]曹銘希.陳皮中橙皮苷的提取及其藥理活性的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（12）：452-454.

[2]王春燕.淺談陳皮的藥理作用及臨床應(yīng)用[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2013，11（3）：120-121.

[3]陳少萍，童冰妮，鐘金妮.RP-HPLC測(cè)定和中理脾丸中橙皮苷含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2015，22（1）：80-82.

[4]宋嵐，鄺明，陳菊.香砂參術(shù)顆粒中橙皮苷的含量測(cè)定[J].藥物與人，2015，28（2）：28-29.

[5]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，177.

[6]譚麗荷.陳皮四物片中橙皮苷的含量測(cè)定[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2015，2（9）：88-90.

（收稿日期：2016-07-18）