張磊，張彥平，張雯，王金華，黃倫，徐陽

(西安交通大學第二附屬醫(yī)院檢驗科，西安 710004)

·產(chǎn)品應用研究·

CellaVision DM96血細胞數(shù)字圖像分析儀計數(shù)網(wǎng)織紅細胞的性能評價

張磊，張彥平，張雯，王金華，黃倫，徐陽

(西安交通大學第二附屬醫(yī)院檢驗科，西安 710004)

目的 評價CellaVision DM96血細胞數(shù)字圖像分析儀(簡稱“DM96”)計數(shù)網(wǎng)織紅細胞的性能。方法 隨機選取116例EDTA-K2抗凝全血標本，用DM96、手工法、Sysmex XE-2100(簡稱“XE-2100”)和Beckman Coulter LH750(簡稱“LH750”)計數(shù)網(wǎng)織紅細胞并比較。結果 用DM96紅細胞分析模塊計數(shù)網(wǎng)織紅細胞，與XE2100、LH750、手工法差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 用DM96紅細胞分析模塊計數(shù)網(wǎng)織紅細胞性能良好。

網(wǎng)織紅細胞；Cella Vision DM96；紅細胞分析模塊

基于人工神經(jīng)網(wǎng)絡(artificial neural network)智能技術的CellaVision DM96血細胞數(shù)字圖像分析儀(以下簡稱“DM96”)運用影像法分析外周血細胞，針對白細胞(WBC)檢測表現(xiàn)良好。DM96對中性粒細胞(Ne)、淋巴細胞(Ly)、單核細胞(Mo)、嗜酸性粒細胞(Eo)、嗜堿性粒細胞(Ba)和原始細胞(Blast)識別能力較高，但對早幼粒細胞、中幼粒細胞、晚幼粒細胞的鑒別缺乏準確性[1-2]。在紅細胞識別方面，DM96基礎版本可鑒別部分異常RBC形態(tài)，升級版本紅細胞分析模塊依據(jù)RBC大小、著色程度、形狀、內(nèi)含物及均一度等可識別更多的異常RBC形態(tài)，且給出定量結果[3]。與人工檢測費時相比，該功能準確高效的性能已在各種異常RBC形態(tài)檢測中得到驗證[4]。本研究利用DM96升級版本紅細胞分析模塊自動識別RBC內(nèi)含物的原理定量檢測網(wǎng)織紅細胞，并與手工法、Sysmex XE-2100(以下簡稱“XE-2100”)和Beckman Coulter LH750(以下簡稱“LH750”)計數(shù)網(wǎng)織紅細胞比較。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集西安交通大學第二附屬醫(yī)院2016年1至4月門診和住院患者EDTA-K2抗凝全血標本共116例，室溫(18～22 ℃)放置，2 h內(nèi)完成檢測。

1.2 儀器與試劑 XE-2100全自動血液分析儀、SP-1000i自動推片染色儀及其原裝配套試劑(日本Sysmex公司)；LH750全自動血液分析儀及其原裝配套試劑(美國Beckman Coulter公司)；DM96 自動化血細胞數(shù)字圖像分析儀(瑞典Cellavision AB 公司)；煌焦油藍染液、瑞氏染液(珠海BASO公司)；微量移液器等。

1.3 實驗方法 儀器法：用XE-2100和LH750嚴格按血液分析儀的操作規(guī)程檢測116例標本。手工法：用微量移液器吸取EDTA-K2抗凝全血標本100 μL于反應杯中，與煌焦油藍按1∶1混勻染色，室溫下放置30 min。將反應杯中標本混勻放入SP-1000i自動推片染色機中，選擇手動模式中微量模式制作血涂片，用瑞氏染液復染(染色過程：甲醇固定2 min，瑞氏染液染色1 min，加緩沖液2 min，沖洗1 min，干燥1 min)。由兩位中級職稱以上的從事血液形態(tài)學檢驗的技師在顯微鏡下計數(shù)1 000個RBC中網(wǎng)織紅細胞的比例，取平均值為手工法網(wǎng)織紅細胞結果。

DM96自動計數(shù)法：將制作好的涂片放入DM96讀片盒中，按標準操作規(guī)程將讀片盒放入DM96中掃描、定位及細胞分類計數(shù)。DM96紅細胞形態(tài)分析模塊可預判RBC內(nèi)含物(inclusions)的形態(tài)分類結果，即：Howell-Jolly(豪焦小體)、Pappenheirner(帕彭漢姆小體)、basophilic stippling(嗜堿性點彩紅細胞)、paracites(瘧原蟲)。將這4種預判形態(tài)RBC個數(shù)與總數(shù)N(number of RBCs used for pre-characterization)比值作為預判網(wǎng)織紅細胞結果。點擊RBC形態(tài)分析(individual cells)界面人工復檢含有煌焦油藍著色的RBC，將判定沒有著色的RBC補充計數(shù)，歸類校準為最終DM96的網(wǎng)織紅細胞。

1.4 統(tǒng)計學分析 用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行。多組比較用方差分析，用Pearson相關分析相關性；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

DM96、XE-2100、LH750和手工法網(wǎng)織紅細胞計數(shù)結果(%)分別為1.98±0.29、2.01±0.21、1.89±0.19、1.85±0.74，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。DM96與XE2100、LH750、手工法計數(shù)網(wǎng)織紅細胞結果的相關系數(shù)分別為0.854、0.584、0.816(P均<0.05)。

3 討論

近年來全自動流式細胞核酸染色法血液分化儀已廣泛應用于臨床。XE-2100網(wǎng)織紅細胞流式細胞核酸染色法，通過檢測前向散射光和側(cè)向熒光信息，獲得網(wǎng)織紅細胞的數(shù)量和成熟參數(shù)；LH750全自動血液分析儀采用VCS技術原理檢測網(wǎng)織紅細胞；網(wǎng)織紅細胞成熟參數(shù)各廠家的參考值不同，推測由于染色試劑與檢測原理不同對網(wǎng)織紅細胞靈敏度不同[5]。

儀器法檢測網(wǎng)織紅細胞具有一定的局限。Brown等[6]發(fā)現(xiàn)，Howell-Jolly小體、瘧原蟲、大血小板、紅細胞聚集、冷凝集素或藥物均直接干擾儀器法網(wǎng)織紅細胞參數(shù)的檢測；在網(wǎng)織紅細胞比例增高(約 20.0%)時，流式細胞儀法檢測結果與鏡檢法相差甚遠；鏡檢法直接觀察細胞形態(tài)可排除此類干擾和偏差，故儀器計數(shù)網(wǎng)織紅細胞仍需推片復檢。

傳統(tǒng)手工顯微鏡法計數(shù)網(wǎng)織紅細胞影響因素較多。本研究采用SP-1000i全自動推片染色儀可排除因手工推片而造成的血涂片薄厚不均、細胞分布不均勻、染色時間長等因素?；徒褂退{染色外周血涂片，在DM96上自動化識別網(wǎng)織紅細胞可排除人為影響因素。

Mahe等[7]用CellaVision DM96紅細胞形態(tài)分析模塊計數(shù)網(wǎng)織紅細胞，與流式細胞核酸染色法的檢測結果無差異；本研究結果與其報道一致。目前國內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)CellaVision DM96對網(wǎng)織紅細胞計數(shù)做過相關報告，亦未有網(wǎng)織紅細胞復染DM96閱片的相關報告。本研究用SP-1000i自動推片染色儀和網(wǎng)織紅細胞復染進行半自動化的血涂片制作，用CellaVision DM96自動化紅細胞形態(tài)分析模塊計數(shù)網(wǎng)織紅細胞，其圖片可永久性保存并具備良好的溯源性。另外，DM96紅細胞分析模塊所檢測分析的紅細胞數(shù)量>2 000，與人工抽樣檢測相比更具準確性。

[1]Lee LH, Mansoor A, Wood B,etal. Performance of CellaVision DM96 in leukocyte classification[J]. J Path Informatics, 2013, 4:14.

[2]Egelé A, Stouten K, Van der Heul-Nieuwenhuijsen L,etal. Classification of several morphological red blood cell abnormalities by DM96 digital imaging[J]. Int J Lab Hematol, 2016, 38(5):e98-e101.

[3]Criel M, Godefroid M, Deckers B,etal. Evaluation of the Red Blood Cell Advanced Software Application on the CellaVision DM96[J]. International Int J Lab Hematol, 2016, 38(4):366-374.

[4]BreReton M, Mccafferty R, Marsden K,etal. Recommendation for standardization of haematology reporting units used in the extended blood count[J]. Int J Lab Hematol, 2016, 38(5):472-482.

[5]時永輝, 王鋒, 洪駿,等. LH750與XE2100血液分析儀檢測未成熟網(wǎng)織紅細胞指數(shù)的比較[J]. 臨床檢驗雜志, 2012, 30(6):424-425.

[6]Brown M, Wittwer C. Flow cytometry: principles and clinical applications in hematology[J]. Clin Chem, 2000, 46(8 Pt 2):1221-1219.

[7]Mahe ER, Higa D, Naugler C,etal. Accuracy of the CellaVision DM96 platform for Reticulocyte counting[J]. J Path Informatics, 2014, 5(1):17.

(本文編輯：王海燕)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.02.21

張磊,1983年生，男，主管技師，碩士，主要從事臨床檢驗工作，E-mail:616867536@qq.com。

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2016-11-24)