李艷曉，高穎，王火，陳虹

（1.天津中醫(yī)藥大學，天津 300110；2.中國人民武裝警察部隊后勤學院 生藥與藥劑教研室，天津 300309）

基礎研究·論著

蓮子心提取物對博來霉素致小鼠肺纖維化的干預作用研究*

李艷曉1，高穎2，王火2，陳虹2

（1.天津中醫(yī)藥大學，天津 300110；2.中國人民武裝警察部隊后勤學院 生藥與藥劑教研室，天津 300309）

D O I：10.3969/j.i s s n.1005-8982.2017.03.001

目的比較蓮子心提取物（LE）水洗脫（LEW W）和醇洗脫（LEAW）對博來霉素誘導小鼠肺纖維化（PF）的作用。方法經氣管一次性滴注博來霉素復制PF小鼠模型，給予2種LE灌胃21 d后，解剖肺臟，蘇木精-伊紅染色法觀察小鼠肺組織炎癥程度并進行炎癥評分，M as s on染色觀察PF程度，計算肺系數(shù)，檢測血清還原型谷胱甘肽（G SH）、一氧化氮N O，逆轉錄聚合酶鏈反應檢測轉化生長因子β1（TG F-β1）、α平滑肌肌動蛋白（α-SM A）、膠原蛋白Ⅰ、膠原蛋白Ⅲm R N A表達水平，酶聯(lián)免疫吸附法檢測肺組織勻漿TG F-β1、α-SM A及羥脯氨酸（H Y P）的蛋白表達水平。結果與模型組比較，LEW W 和LEAW組G SH在血清中含量均升高，N O含量降低；肺組織勻漿中TG F-β1、α-SM A、H Y P含量降低（P＜0.05）。結論LE對博來霉素所致PF小鼠有一定防治作用，其機制可能與LE抗氧化、抑制膠原蛋白形成及下調TG F-β1有關。

蓮心提取物；肺纖維化；膠原纖維；轉化生長因子β1

肺纖維化（pul m onary f i brosi s，PF）是一種以彌漫性肺泡炎和成纖維細胞病理性增生所致細胞外基質沉積為特征的慢性進行性肺疾病，是多種肺疾病發(fā)展到晚期常見的病理過程[1]。本病致病因素復雜，病理機制不明確。目前學術界認為氧化-抗氧化機制失衡是纖維化主要發(fā)病機制之一，轉化生長因子β1（t ransf orm i ng growt h f act or，TGF-β1）及其下游α平滑肌肌動蛋白（al pha-sm oot h m uscl e act i n，α-SM A）也在PF發(fā)病中起重要作用。

蓮子心為常用中草藥之一，為睡蓮科植物蓮種子中的青嫩胚芽,味苦、性寒。在其水提物與醇提物中主要有效成分為蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿及蓮心堿高氯酸鹽等[2]。據報道，異蓮心堿對半乳糖致小鼠肺纖維化的氧化損傷有一定保護作用[3]，但對蓮子心提取物水洗脫（l ot us ext ractwashed wi t h wat er，LEW W）、蓮子心提取物醇洗脫（l ot us ext ract al cohol wash，LEAW）的抗纖維化作用還未有文獻報道。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 72只健康昆明雄性小鼠，無特定病原體級，體重18～20 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號：SCXK（京）2013-0001。實驗動物在潔凈級動物房適應性喂養(yǎng)1周，飼料由中國醫(yī)科學院動物研究所提供，飲用水為自來水，實驗期間小鼠自由飲水和進食。

1.1.2 藥品及試劑 蓮心提取物（l ot us ext ract，LE）（中國人民武裝警察部隊后勤學院植物化學實驗室提供）,注射用鹽酸博萊霉素（浙江海正藥業(yè)股份有限公司，H 20055883）,蘇木精-伊紅染色（hem at oxyl i n-eosi n，H E）、M asson染色、一氧化氮合酶及還原性谷胱甘肽試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，Tri zol Reagent由美國Invet rogen公司生產,逆轉錄試劑盒購自北京天根技術有限公司,聚合酶鏈反應（pol ym erase chai n react i on，PCR）引物由北京奧科鼎盛生物科技有限公司合成，TGF-β1、α-SM A、羥脯氨酸（hydroxyprol i ne aci d，H YP）試劑盒均購自北京方程生物科技有限公司。

1.1.3 實驗儀器 TS100型倒置顯微鏡及其配套圖像采集系統(tǒng)（日本Ni kon公司），Advent urer萬分之一電子天平和TDL-5M低溫離心機（上海盧湘儀器廠），5417R高速低溫離心機和移液器（德國Eppendorf公司），UV-260型紫外可見分光光度計（日本Shi m adzu公司），BCD-77KD3常溫冰箱（廣東TCL公司），置入-80℃冰箱低溫保存（安徽美菱冰箱），SW-CJ-2FD型無菌操作臺（蘇州儀器凈化廠），PTC-200型PCR（美國M J Research公司），電泳槽（北京六一儀器廠）。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型復制、分組及給藥 將72只小鼠隨機分為正常組、模型組、維生素C組、地塞米松組、LEW W組和LEAW組，每組12只。除正常組外，其他5組小鼠均經氣管滴注博萊霉素（2 m g/kg），正常組注入等量生理鹽水。模型復制后第2天，LEW W組和LEAW組分別灌服LEW W、LEAW[100 m g/（kg·d）]，維生素C組經腹腔注射維生素C 100 m g/（kg·d），正常組和模型組給予等體積生理鹽水，1次/d，共給藥21 d，地塞米松組經腹腔注射地塞米松2 m g/（kg·d），1次/d，共給藥3 d。

1.2.2 實驗動物的處理和標本收集 小鼠在造模21 d稱重后眼球摘除取血并脫頸處死，分離肺組織，稱肺重。血液離心后取血清置于-20℃冰箱冷凍保存，1周內用于檢測一氧化氮NO、谷胱甘肽（Gl ut at hi one，GSH）等氧化指標。左肺用10%福爾馬林固定，24 h后進行。石蠟包埋并組織切片行H E染色及M asson染色，右肺分置凍存管，迅速置入液氮罐后轉入-80℃冰箱保存以用于TGF-β1、H YP等濃度測定和PCR測定。

1.2.3 檢測方法 肺系數(shù)=肺重（g）/體重（g）× 100%。血清中NO、GSH含量嚴格按照試劑盒說明書操作。酶聯(lián)免疫吸法檢測各組血清中超氧化物歧化酶（superoxi de di sm ut ase，SOD）、丙二醛、肺組織勻漿中H YP、TGF-β1濃度，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.4 組織病理學觀察 參照SZAPIEL等[4]的方法評價肺泡炎及肺纖維化程度，H E染色評定肺泡炎分級：評0分，無肺泡炎；評1分，輕度肺泡炎，評2分，中度肺泡炎，評3分，重度肺泡炎。M asson染色評定肺纖維化分級：評1分，無纖維化；評2分，輕度纖維化，肺泡的結構發(fā)生紊亂；評3分，中度纖維化，病變范圍約占全肺的20%～50%；評4分，重度纖維化，病變范圍＞50%。

1.2.5 蓮子心提取物對小鼠相關基因的表達 Tri zol法提取總m RNA，逆轉錄為cDNA后行PCR反應。凝膠自動成像系統(tǒng)觀察電泳結果，Quant i t y One軟件分析目的片段與內參的光密度值，將兩者比值作為目的基因的相對表達量，每個樣本重復3次。目的基因引物序列、片段長度及退火溫度見表1。

表1 逆轉錄PCR的引物序列、產物大小及退火溫度

1.3 統(tǒng)計學方法

數(shù)據分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組比較用單因素方差分析，組間多重比較用LSD-t法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

正常組：小鼠身體健壯，活潑好動，皮毛光滑，進食量多，體重增加明顯，唇及爪色澤淡紅。模型組：模型復制后，小鼠很快出現(xiàn)精神不振，皮毛干枯無光澤，少動，進食少，體重減輕，唇及爪輕度紫紺，約1周后食欲與體重有改善。維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組：精神狀態(tài)、進食、活動、體重均較模型組較好，唇及爪輕度紫紺未見明顯。

2.2 LE對博來霉素致小鼠肺纖維化的影響

2.2.1 病理改變 除正常組外，其余各組小鼠肺組織結構完整性均受到不同程度破壞，肺泡壁加厚，出現(xiàn)不同程度充血及炎癥細胞浸潤，且尤以模型組小鼠上述指標改變最為顯著（見圖1）。與正常組比較，模型組M asson染色見肺泡間隔明顯增寬，膠原纖維增多，肺泡結構改變，成纖維細胞大量聚集，大量膠原纖維成束狀或者片狀沉積，肺泡壁變厚，肺泡結構紊亂。維生素C組、地塞米松組與LEW W、LEAW組表現(xiàn)出基本一致的變化規(guī)律，但肺泡炎和纖維化的程度減輕（見圖2）。

2.2.2 肺泡炎癥、纖維化等級評分 與正常組比較，模型組小鼠肺組織炎癥及纖維化程度均增高，各組小鼠肺泡炎癥程度評分及纖維化程度評分比較，經單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學意義（F=107.113和 87.230，P=0.013和0.025）。維生素C組、地塞米松組與模型組肺泡炎癥程度及纖維化程度比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=7.126和3.523，P=0.000）。維生素C組、地塞米松組、LEW W組和LEAW組與模型組肺泡炎癥程度比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.762、3.561、3.142和3.827，P=0.000）。LEW W組與維生素C組和LEAW組肺泡炎癥程度比較，經LSD-t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（t=0.031和0.061，P=0.057和0.112）。LEW W組與地塞米松組肺泡炎癥程度比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=0.412，P=0.031）；維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組與模型組纖維化程度比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.768、6.235、4.162和3.251，P=0.000）。LEW W組與維生素C組纖維化程度比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=5.142，P=0.022），LEW W組與地塞米松組、LEAW組纖維化程度比較，經LSD-t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（t=0.361和0.823，P=0.712和0.634）。上述結果表明，模型組肺泡炎癥程度及纖維化程度均高于維生素C組、地塞米松組、LEAW組及LEW W組，其中LEAW組與LEW W組抗炎和抗纖維化比較，差異無統(tǒng)計學意義，但優(yōu)于維生素C組。見表2。

2.3 LE對肺纖維化小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)的影響

與正常組比較，模型組小鼠體重減輕，肺濕重和肺系數(shù)增大，經單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學意義。正常組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)與模型組比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=6.126、8.231和3.242，P=0.000）。LEAW組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義（t= 3.728、7.912和 14.232，P=0.012、0.032和 0.041）。LEW W組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)與模型組比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=1.612、2.078和4.292，P=0.014、0.033和0.021）。維生素C組、地塞米松組與LEAW組肺系數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.913和7.123；P=0.012和0.031）。LEW W組與LEAW組小鼠肺濕重、肺系數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=1.231和2.812，P=0.013和0.314）。LEW W組與LEAW組小鼠體重比較，經LSD-t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（t=3.121，P=0.512）。上述結果表明，LEAW、LEW W可使小鼠體重增長，降低肺濕重和肺系數(shù)，且效果與地塞米松相當，但兩者對體重的改變差異無統(tǒng)計學意義。見表3。

圖1 各組小鼠肺組織病理改變 （H E×200）

圖2 各組小鼠肺組織病理改變 （M asson×200）

2.4 LE對博來霉素致肺纖維化小鼠血清GSH、NO的影響

各組小鼠血清中GSH、NO含量比較，經單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學意義。維生素C組、地塞米松組與模型組GSH、NO含量比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=6.182和12.124，P=0.000）；維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組與模型組GSH比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.912、3.626、3.935和3.867，P=0.000）；LEW W組與維生素C組、地塞米松組及LEAW組GSH比較，差異有統(tǒng)計學意義（t= 5.231、6.243和3.563，P=0.021、0.032和0.041）。維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組與模型組NO含量比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.192、5.122和4.143，P=0.031、0.021和0.022）；LEW W組與維生素C組、地塞米松組NO含量比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=9.322和4.243，P=0.210和0.042）；LEW W組與LEAW組NO含量比較，差異無統(tǒng)計學意義（t= 2.535，P=0.712）。上述結果表明，模型組GSH含量低于維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組，但其NO含量高于維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組。LEW W組和LEAW組對抑制GSH含量降低的效果弱于維生素C組、地塞米松組。見表4。

表2 各組小鼠炎癥及纖維化程度評分 （n=7，分，±s）

表2 各組小鼠炎癥及纖維化程度評分 （n=7，分，±s）

組別 纖維化程度評分正常組 0.45±0.05 1.62±0.07模型組 2.47±0.18 3.24±0.35維生素C組 1.72±0.21 2.71±0.22地塞米松組 1.30±0.17 2.36±0.14 LEW W組 1.55±0.16 2.47±0.21 LEAW組 1.32±0.08 2.55±0.19 F值 107.113 87.230 P值 0.013 0.025肺泡炎癥評分

表3 各組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)比較 （n=7±s）

表3 各組小鼠體重、肺濕重及肺系數(shù)比較 （n=7±s）

組別肺系數(shù)正常組 100 28.58±1.36 0.1989±0.012 0.5339±0.0376模型組 100 21.12±0.92 0.2514±0.019 0.8165±0.0565維生素C組 100 24.25±0.77 0.2158±0.017 0.7135±0.0469地塞米松組 2 25.45±1.26 0.2280±0.022 0.6434±0.0826 LEW W組 100 24.65±1.21 0.2182±0.015 0.6683±0.0188 LEAW組 100 25.13±0.88 0.2193±0.020 0.6631±0.1682 F值 15.162 10.318 54.126 P值 0.025 0.039 0.027劑量/（m g/kg）體重/ g肺濕重/ g

表4 各組小鼠血清中GSH、NO濃度比較（n=7，μm ol/L±s）

表4 各組小鼠血清中GSH、NO濃度比較（n=7，μm ol/L±s）

組別NO正常組 33.56±7.74 2.71±0.72模型組 28.99±4.81 8.36±0.25維生素C組 39.95±8.02 6.03±0.68地塞米松組 44.06±10.64 4.22±0.33 LEW W組 43.15±11.18 4.07±0.51 LEAW組 34.47±6.96 3.16±0.27 F值 132.104 42.172 P值 0.041 0.016GSH

2.5 LE對肺纖維化小鼠TGF-β1、α-SMA、CollengenⅠ及CollengenⅢmRNA表達的影響

各組小鼠 TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ及Col l engenⅢ m RNA表達，經單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學意義。與對照組比較，模型組TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ及Col l engenⅢm RNA表達量比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=3.028、3.927、8.927和5.928，P=0.000），模型組升高；與模型組比較，維生素C組、地塞米松組、LEW W組及LEAW組可下調TGF-β1、α-SM A及Col l engenⅢ m RNA表達量，LEAW可同時下調Col l engenⅠm RNA的表達水平；LEAW 組與 LEW W 組 TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ m RNA水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（t= 3.291、4.928和 7.283，P=0.023、0.029和 0.041），LEAW組下調TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠm RNA表達的能力優(yōu)于LEW W組。見表5和圖3。

表5 各組小鼠肺組織TGF-β1、CollengenⅠ及CollengenⅢ mRNA表達水平比較 （n=7±s）

表5 各組小鼠肺組織TGF-β1、CollengenⅠ及CollengenⅢ mRNA表達水平比較 （n=7±s）

組別Col l engenⅢm RNA正常組 0.74±0.06 0.58±0.03 0.60±0.012 1.01±0.09模型組 1.15±0.12 1.24±0.11 1.29±0.11 1.12±0.15維生素C組 0.77±0.07 0.86±0.06 1.23±0.17 1.19±0.14地塞米松組 1.20±0.16 0.82±0.09 0.71±0.1 1.03±0.08 LEW W組 0.79±0.11 1.05±0.12 1.38±0.15 0.78±0.07 LEAW組 0.64±0.08 0.77±0.58 0.76±0.02 0.79±0.16 F值 23.142 45.834 76.164 42.186 P值 0.019 0.036 0.012 0.002TGF-β1m RNAα-SM A m RNACol l engenⅠm RNA

圖3 各組小鼠肺組織TGF-β1、α-SMA、CollengenⅠ及CollengenⅢ mRNA表達情況

2.6 LE對博來霉素致肺纖維化小鼠肺組織中TGF-β1、α-SMA及HYP含量的影響

各組小鼠肺組織中TGF-β1、α-SM A及H YP含量表達，經單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學意義。與模型組比較，對照組中TGF-β1、α-SM A及H YP含量比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t= 6.203，9.382和3.827，P=0.000），對照組含量升高；與模型組相比，給藥組小鼠肺組織中TGF-β1、α-SM A及H YP含量均有不同程度的降低，LEAW組與維生素C組、地塞米松組及LEAW組TGF-β1和H YP含量比較，經LSD-t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=7.292和3.927，P=0.012和=0.024），LEAW組最低。見表6。

表6 各組小鼠肺組織 TGF-β1、α-SMA及HYP濃度比較 （n=7±s）

表6 各組小鼠肺組織 TGF-β1、α-SMA及HYP濃度比較 （n=7±s）

組別H YP/（μg/L）正常組 16.11±2.14 12.91±0.24 6.46±0.71模型組 98.76±13.78 28.24±0.42 16.45±2.41維生素C組 67.92±9.24 17.44±0.13 13.62±1.14地塞米松組 45.43±5.10 16.58±0.23 13.57±1.52 LEW W組 48.72±4.82 17.12±0.21 12.84±1.23 LEAW組 36.00±4.38 16.76±0.24 12.13±1.41 F值 75.142 56.823 46.712 P值 0.004 0.014 0.007TGF-β1/（ng/L）α-SMA/（ng/L）

3 討論

PF是一種進行性、不可逆的慢性肺間質纖維化疾病，且5年存活率低[5]。PF疾病早期可出現(xiàn)氧化應激，引發(fā)炎癥反應。正常機體抗氧化系統(tǒng)中主要包括酶類抗氧化系統(tǒng)如SOD、髓過氧化物酶、GSH等和費酶類抗氧化系統(tǒng)如維生素C、E等[6]。GSH是一種低分子自由基清除劑，可防止血紅蛋白及其他輔因子受氧化損傷。在復雜的纖維化病理過程中NO不僅可與氧自由基產生氧化物，而且可作為細胞信號分子介導肺泡巨噬細胞及肺泡上皮細胞等細胞的增殖或凋亡來參與肺間質纖維化的形成。蓮子心作為一種傳統(tǒng)中藥材，具有很明顯的抗炎、抗氧化等多種藥學活性。在本實驗中給予LE干預性治療后，與模型組相比其氧化生成產物GSH升高，NO含量降低，表明LE具有對博來霉素誘導肺纖維化抗氧化應激的作用。肺纖維化后期主要表現(xiàn)為肺間質增寬、細胞外基質沉積及膠原纖維（Col l engenⅠ及Col l engenⅢ）大量生成[7]，形成廣泛纖維化。H YP作為膠原纖維蛋白中主要的組成成分，可準確地間接反映膠原纖維蛋白的含量[8]。近年來有研究證實，TGF-β1為關鍵的致肺纖維化的細胞因子，可以促進肺成纖維細胞向肌成纖維細胞分化，上調其下游的α-SM A表達[9]，并促進細胞外基質的生成與沉積，進一步促進肺纖維化的發(fā)展[10]。細胞外基質主要由成纖維細胞病灶轉型的肌成纖維細胞組成，其主要表達產物為α-SM A[11]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，LE可降低對博來霉素致小鼠肺纖維化模型肺組織TGF-β1、α-SM A、Col l engenⅠ及Col l engenⅢ m RNA表達；酶聯(lián)免疫吸附法檢測顯示，LE給藥組H YP表達降低。另外從M asson染色的病理切片中見其可有效抑制膠原纖維形成，降低肺纖維化程度。實驗證明，LE能抗博來霉素之小鼠肺纖維化，且LEAW組效果明顯優(yōu)于維生素C組。

綜上所述，蓮心提取物可通過抗氧化、抑制膠原纖維形成及下調TGF-β1，進而抑制成纖維細胞的活化、增殖，下調α-SM A的表達，減少細胞外基質的大量沉積，發(fā)揮其抗纖維化作用。

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（童穎丹 編輯）

Intervention ofPlumula Nelumbinisextracts on Bleomycininduced pulmonary fibrosis of mice*

Yan-xiao Li1,Ying Gao2,Huo Wang2,Hong Chen2
(1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300110,China;2.Department of Pharmacy,Logistics College of Chinese People's Armed Police Force, Tianjin 300309,China)

ObjectiveTo investigate the effect ofPlumula Nelumbinisextracts eluted with water(LEWW) or alcohol (LEAW)on Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice.MethodsThe mouse model of pulmonary fibrosis was prepared by disposable intratracheal instillation of Bleomycin.The two kinds ofPlumula Nelumbinisextracts were administrated orally for 21 days.After that,the lung tissues were obtained for HE staining and Masson staining;and inflammation score and the degree of pulmonary fibrosis,lung coefficient calculation,serum glutathione(GSH)and nitric oxide(NO)were evaluated.RT-PCR was used for detection of transforming growth factor-β1(TGF-β1),smooth muscle actin (α-SMA),collagen-Ⅰ,collagen-Ⅲ mRNA expression levels.TGF-β1,α-SMA and hydroxyproline (HYP)protein expression levels in the lung tissues were measured using ELISA.ResultsCompared with the model group,the serum content of GSH increased,NO decreased;meanwhile the content of TGF-β1,α-SMA and HYP in the lung homogenate was lowered in the LEWW and LEAW groups (P＜0.05).ConclusionsPlumula Nelumbinisextracts have anti-fibrotic effect to Bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice.The mechanism may be related to the anti-oxidant activity of Plumula Nelumbinisextracts,inhibition of collagen formation and down-regulation of TGF-β1.

Plumula Nelumbinisextract;pulmonary fibrosis;collagen fiber;transforming growth factor-β1

1005-8982（2017）03-0001-06

R 285.5

A

2016-05-11

國家自然科學基金（No：81503233）；武警后勤學院院級課題（No：W H J201510）

高穎，E-m ai l：gyi ng77@163.com；Tel：15922098199