陳玉梅

摘 要：本實(shí)驗(yàn)以綠原酸為指標(biāo)對(duì)金銀花提取工藝進(jìn)行研究。測(cè)定方法為色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相以乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）（三乙胺調(diào)pH值至3.0）；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm；流速1.0mL·min-1。最佳提取工藝為加入8倍量50%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

關(guān)鍵詞：金銀花；提取；工藝

金銀花，又名忍冬，由于忍冬花初開(kāi)為白色，后轉(zhuǎn)為黃色，因此得名金銀花。金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開(kāi)的花。金銀花自古被譽(yù)為清熱解毒的良藥，用于各種熱性病，如身熱、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等癥?！吨貞c堂隨筆》記載：“清絡(luò)中風(fēng)火濕熱，解溫疫穢惡濁邪，息肝膽浮越風(fēng)陽(yáng)，治痙厥癲癇諸癥。”金銀花具有抗炎、抗菌、抗病毒、保肝、利膽、降血脂降糖、止血、抗氧化等多種藥理學(xué)活性[1-5]。金銀花可用于治療高脂血癥、百日咳、銀屑病、副鼻竇炎、小兒肺炎、風(fēng)濕性心臟病、鈞端螺旋體病等。綠原酸（Chlorogenic acid，以下簡(jiǎn)稱(chēng)CA），是由咖啡酸（Caffeic acid）與奎尼酸（Quinicacid，1-羥基六氫沒(méi)食子酸）生成的縮酚酸，是金銀花主要成分之一。綠原酸具有抗氧化、抑菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、保肝作用、抗內(nèi)毒素等作用。綠原酸抗氧化能力要強(qiáng)于咖啡酸、對(duì)羥苯酸、阿魏酸、丁香酸、丁基羥基茴香醚（BHA）和生育酚等。本實(shí)驗(yàn)以綠原酸為指標(biāo)對(duì)金銀花提取工藝進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

山東魯創(chuàng)LC-3000液相色譜儀（梯度）（山東魯創(chuàng)分析儀器有限公司）；PHS-550智能型臺(tái)式酸度計(jì)（杭州陸恒生物科技有限公司）；實(shí)驗(yàn)室用高純水制備器（北京科譽(yù)興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；DK-S24電熱恒溫水浴鍋（上海五相儀器儀表有限公司）；FA1204CFAC型全自動(dòng)內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；UV1600紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（西安華辰樂(lè)天實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司）。綠原酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（南京大唐化工有限公司）；甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）；乙醇（濟(jì)南圣豐工貿(mào)有限公司）；磷酸（南京大唐化工有限公司）；三乙胺（北京亞太龍興化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素考察

2.2.1 提取次數(shù)

取原藥材，除去雜質(zhì)，篩去灰屑，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取四次，第一次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮；第二次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取兩次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮；第三次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取三次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。第四次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)提取四次，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中綠原酸含量并計(jì)算綠原酸收率。

2.1.2 加醇倍數(shù)

取原藥材，除去雜質(zhì)，篩去灰屑，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取四次，第一次加14倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第二次加12倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第四次加8倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，分別過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中綠原酸含量并計(jì)算綠原酸收率。

2.1.3 提取時(shí)間

取原藥材，除去雜質(zhì)，篩去灰屑，至于圓底燒瓶?jī)?nèi)，分別提取三次，第一次加10倍50%乙醇，超聲提取25分鐘，連續(xù)四次，第二次加10倍50%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍50%乙醇，超聲提取45分鐘，連續(xù)四次，分別過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測(cè)定濃縮膏中綠原酸含量并計(jì)算綠原酸收率。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時(shí)間對(duì)綠原酸收率影響較大。選擇提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時(shí)間作為考察因素，采用正交試驗(yàn)法對(duì)影響提取效率的其它工藝條件進(jìn)行優(yōu)選。采用3個(gè)考察水平，用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平表見(jiàn)表1。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相以乙腈-0.4%磷酸溶液（13：87）（三乙胺調(diào)pH值至3.0）；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取提取膏適量，精密量取，置50mL量瓶中，加50%乙醇適量，超聲處理十分鐘，放置至室溫，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

3.3 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品5mg，置250mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

將濃度為5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml，25μg/ml，30μg/ml，35μg/ml的對(duì)照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。試驗(yàn)表明，綠原酸銨對(duì)照品在5～35μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

3.5 回收率試驗(yàn)

取已知含量的同一批供試品各6份，分別精密添加一定量的綠原酸對(duì)照品，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。平均回收率為97.6%，RSD為0.73%。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

選擇提取次數(shù)、加醇倍數(shù)和提取時(shí)間作為考察因素，采用正交試驗(yàn)法進(jìn)行試驗(yàn)，得到最佳提取工藝為加入8倍量50%乙醇，超聲提取35分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高；測(cè)定方法法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于金銀花膏中綠原酸的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1]宮璀璀，鄭乃剛，吳景蘭，賴(lài)澤仁，何培霞.金銀花對(duì)大鼠體內(nèi)和體外RBL細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用及其機(jī)制[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009（06）.

[2]楊春佳，蘇德望，王躍生，張昆，馬淑霞，李麗秋，崔剛.金銀花對(duì)梗阻性黃疸大鼠菌群失調(diào)及內(nèi)毒素血癥的調(diào)整作用[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志， 2012（08）.

[3]石遠(yuǎn)蘋(píng).連翹和金錢(qián)草與金銀花提取物或浸膏對(duì)幾種常見(jiàn)耐藥菌的體外作用研究[J].臨床合理用藥雜志，2012（15）.

[4]宮璀璀，鄭玉霞，鄭乃剛，曹陽(yáng)，孟明利，吳景蘭.金銀花在體內(nèi)抗氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志，2006（05）.

[5]樊宏偉，肖大偉，余黎，朱荃.金銀花及其有機(jī)酸類(lèi)化合物的體外抗血小板聚集作用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006（02）.