朱 銘 黃玉婷 鄒文蕙 趙吉星 李勇生

1.廣東省惠州市中心人民醫(yī)院胸心外科，廣東惠州 516000；2.廣東省惠州市中心人民醫(yī)院腫瘤放療科，廣東惠州 516000

胸腺瘤是前上縱隔原發(fā)性腫瘤之一，并非我國(guó)高發(fā)性腫瘤。WHO組織學(xué)類型A型AB型及B1型，通常被認(rèn)為是良性腫瘤或是低度惡性潛能性腫瘤，病程進(jìn)展緩慢[1]。即便如此，也不能忽略其具有進(jìn)展為惡心腫瘤的潛能。放射治療是一種通過損傷腫瘤細(xì)胞DNA，進(jìn)而使細(xì)胞周期停止、細(xì)胞老化凋亡的治療方式，同時(shí)胸腺瘤治療的重要方法之一，尤其是對(duì)于具備高危風(fēng)險(xiǎn)因素者[2-4]。臨床發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞較普通細(xì)胞有更強(qiáng)的耐受性，并且受損的腫瘤細(xì)胞DNA通常得到修復(fù)[5]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)耐受性的分子生物學(xué)機(jī)制被揭示，目前EGFR和IGF-1R所主導(dǎo)的抵抗性機(jī)制，以成為臨床研究腫瘤研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)[6-7]。為此，我院開展胸腔鏡切除術(shù)后組織EGFR和IGF-1R蛋白表達(dá)與胸腺瘤患者化療預(yù)后的關(guān)系分析研究，旨在探討胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R蛋白表達(dá)對(duì)患者化療預(yù)后的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年7月～2017年7月我院收治50例胸腺瘤患者作為研究對(duì)象。所有病例均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)為胸腺瘤。男20例，女30例；年齡32～65歲，平均（56.31±6.15）歲；腫瘤直徑2.60～6.20cm，平均（4.61±1.56）cm；臨床病理分期[8]：MasaokaⅠ期14例，Ⅱ期16例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例。WHO組織學(xué)類型：A型3例，AB型4例，B1型14例，B2型21例，B3型8例。合并單純紅細(xì)胞再生障礙性貧血11例、重癥肌無力8例、多發(fā)性肌炎4例、再生障礙性貧血3例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）術(shù)后病理證實(shí)為胸腺瘤。（2）具有完整的臨床病理資料和隨訪資料。（3）初治患者。（4）知情且簽署知情同意書。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）異位胸腺瘤。（2）其他惡性腫瘤病史。（3）妊娠期、哺乳期婦女。

1.3 方法

所有病例均先行胸腺瘤完整或部分切除術(shù)，單純胸腺瘤病例行標(biāo)準(zhǔn)的胸腺切除術(shù)，合并重癥肌無力病例行胸腺擴(kuò)大切除術(shù)，周圍組織粘連或腫瘤巨大病例行腫瘤完整切除。胸腔鏡切除術(shù)術(shù)畢，行組織取材，組織經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，4μm厚切片，應(yīng)用免疫組化EnVision兩步法檢測(cè)50例胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R的表達(dá)。EGFR標(biāo)記采用鼠抗人單克隆抗體EGFR（北京中杉金橋生物公司，工作液）；IGF1R標(biāo)記兔抗人多克隆抗體IGF1R（北京中杉金橋生物公司，濃縮液）。用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照。再行三維適形放射治療，直線加速器（西門子（中國(guó)）有限公司，PRIMUS H），照射野大小依術(shù)前CT或術(shù)中所描述的腫瘤范圍而定，照射方式以前后對(duì)穿照射及兩前斜野照射為主，6MV-X射線照射，常規(guī)放療劑量為40～60Gy，常規(guī)分割1.80～2.00Gy/次，5次/周。隨訪：患者出院后每6個(gè)月復(fù)診復(fù)查胸部CT，通過電話或門診隨訪等途徑收集患者生存及復(fù)發(fā)狀況。

1.4 結(jié)果判斷[9]

由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行結(jié)果判斷。EGFR蛋白定位于腫瘤性上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜，陽(yáng)性細(xì)胞呈黃色或棕褐色；IGF-1R蛋白定位于腫瘤性上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，陽(yáng)性細(xì)胞呈黃色或棕褐色。光學(xué)顯微鏡隨機(jī)觀察10個(gè)400倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，觀察染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。染色強(qiáng)度積分：基本無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)積分：陽(yáng)性細(xì)胞≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分。染色強(qiáng)度積分×陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)積分＞2分判定為陽(yáng)性，≤2判定為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用Kaplan-Meier繪制生存曲線，并采用log-rank檢驗(yàn)分析IGF-1R和EGFR是否陽(yáng)性對(duì)患者3年總生存率、3年無復(fù)發(fā)生存率的影響，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果

EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率為52.00%（26/50），IGF-1R的陽(yáng)性表達(dá)率為56.00%（28/50）。見表1。

表1 EGFR和IGF-1R表達(dá)的檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

2.2 IGF-1R和EGFR是否陽(yáng)性表達(dá)對(duì)患者3年總生存率的影響

EGFR陽(yáng)性表達(dá)病例的3年總生存率為69.23%（18/26），EGFR陰性表達(dá)病例的3年總生存率為95.83%（23/24），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=21.342，P＜ 0.05）；IGF-1R 陽(yáng)性表達(dá)病例的3年總生存率為67.85%（19/28），IGF-1R陰性表達(dá)病例的3年總生存率為100.00%（22/22），兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=24.411，P＜0.05）。見圖1。

2.3 IGF-1R和EGFR是否陽(yáng)性表達(dá)對(duì)患者3年無復(fù)發(fā)生存率的影響

圖1

EGFR陽(yáng)性表達(dá)病例的3年無復(fù)發(fā)生存率為53.84%（14/26），EGFR陰性表達(dá)病例的3年無復(fù)發(fā)生存率為91.66%（22/24），兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=28.593，P＜0.05）；IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)病例的3年總生存率為53.57%（15/28），IGF-1R陰性表達(dá)病例的3年無復(fù)發(fā)生存率為95.45%（21/22），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=47.218，P＜0.05）。見圖2。

圖2

3 討論

EGFR是I型酪氨酸蛋白激酶，具有配體誘導(dǎo)的活性，是ErbB受體家族的成員之一，基因定位于人染色體7p13-p12之上。IGF-1R是胰島素樣生長(zhǎng)因子家族的成員之一，一種糖蛋白跨膜受體。文獻(xiàn)報(bào)道胸腺瘤中EGFR和IGF-1R的陽(yáng)性表達(dá)率分別為50.80%、55.60%。本研究胸腺瘤組織中EGFR和IGF-1R的陽(yáng)性表達(dá)率分別為52.00%、56.00%，與文獻(xiàn)報(bào)道相仿[10]。

既往研究發(fā)現(xiàn)，EGFR和（或）IGF-1R過度表達(dá)均可干擾細(xì)胞核正常轉(zhuǎn)錄，引起一系列的生物學(xué)行為，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[11-13]。新近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，EGFR陽(yáng)性表達(dá)率隨著腫瘤Masaoka分期進(jìn)展而增高，說明EGFR蛋白表達(dá)與腫瘤Masaoka分期不完全吻合，MasaokaⅠ期病例可能是EGFR陽(yáng)性表達(dá)，MasaokaⅣ期也可能是EGFR陰性表達(dá)；在同一項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn)，IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤Masaoka分期也有類似的線性關(guān)系[10]。眾多研究指出胸腔鏡切除術(shù)后輔以放射治療并不能改善胸腺瘤患者的生存情況，但可其復(fù)發(fā)情況，研究者將胸腺瘤放射治療預(yù)后不良的原因歸結(jié)于臨床病理特征[14]。綜上，本研究有不同的歸因，認(rèn)為EGFR和IGF-1R所主導(dǎo)的抵抗性機(jī)制，在其中發(fā)揮了重要的作用。

本研究結(jié)果提示，EGFR陽(yáng)性表達(dá)病例的3年總生存率顯著低于EGFR陰性表達(dá)病例（P＜0.05）；IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)病例的3年總生存率顯著低于EGFR陰性表達(dá)病例（P＜0.05）；EGFR陽(yáng)性表達(dá)病例的3年無復(fù)發(fā)生存率顯著低于EGFR陰性表達(dá)病例（P＜0.05）；IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)病例的3年無復(fù)發(fā)生存率顯著低于EGFR陰性表達(dá)病例（P＜0.05）。說明，EGFR和IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)對(duì)胸腺瘤患者化療預(yù)后產(chǎn)生不利影響，存在EGFR和IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)的胸腺瘤患者往往預(yù)后不佳。我們認(rèn)為這種結(jié)局的形成是因?yàn)镋GFR和IGF-1R均可激活PI3K/AKT通路修復(fù)放射治療等造成的DNA損傷，故對(duì)放射治療產(chǎn)生抵抗性。同時(shí)，EGFR和IGF-1R并不止存在單一的線性關(guān)系，兩者信號(hào)通路之間一并存在cross-talk現(xiàn)象或是協(xié)同作用。Liang等[15]研究者有過類似報(bào)道，其在研究中指出腫瘤細(xì)胞中的EGFR蛋白表達(dá)水平與放射治療的預(yù)后密切相關(guān)，EGFR蛋白表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞對(duì)放射的敏感性呈負(fù)相關(guān)，EGFR蛋白表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞對(duì)放射的抵抗性呈正相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，胸腺瘤組織中存在EGFR和IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)的患者往往預(yù)后不佳。抑制腫瘤細(xì)胞DNA的修復(fù)，或可增加放射治療的療效，新一階段可考慮深化研究EGFR和IGF-1R抑制劑對(duì)胸腺瘤EGFR和IGF-1R陽(yáng)性表達(dá)病例化療預(yù)后的影響。

[1] 朱惠民，張旭，陳根強(qiáng)，等.胸腺瘤WHO組織學(xué)分型與胸腺瘤診治的關(guān)系[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2009，7（12）：1304-1306.

[2] 賈佳，李月敏.術(shù)后放療在胸腺瘤中的作用及研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2016，32（15）：2573-2575.

[3] 賈佳，朱慧軍，王冰，等. 侵襲性胸腺瘤術(shù)后三維適形放療預(yù)后分析[J].中華腫瘤防治雜志，2016，23（13）：888-892.

[4] 劉宇，田野，張幸平，等.B3型胸腺瘤術(shù)后放射治療的臨床價(jià)值探討 [J].中國(guó)腫瘤臨床，2016，43（6）：240-244.

[5] 王芹，劉曉秋，劉強(qiáng)，等.DNA雙鏈斷裂修復(fù)途徑中重要的修復(fù)蛋白[J].國(guó)際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志，2013，37（1）：34-37.

[6] Vazquezmartin A，Cufí S，Oliverasferraros C，et al.IGF-1R/epithelial-to-mesenchymal transition （EMT） crosstalk suppresses the erlotinib-sensitizing effect of EGFR exon 19 deletion mutations[J].Scientific Reports，2013，3（9）：2560.

[7] 邵明海，陳仕林，盧洪勝，等.胸腺瘤WHO組織學(xué)分型、Masaoka臨床分期和預(yù)后的關(guān)系[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2007，21（2）：128-130.

[8] Schanzer JM，Wartha K，Croasdale R，et al.A novel glycoengineered bispecific antibody format for targeted inhibition of epidermal growth factor receptor （EGFR）and insulin-like growth factor receptor type I （IGF-1R）demonstrating unique molecular properties.[J].Journal of Biological Chemistry，2014，289（27）：18693.

[9] 李文姍， 余琦， 李寧 . 胸腺瘤中 EGFR 和 IGF-1R 的表達(dá)及其意義[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志， 2016， 32（3）：297-300.

[10] 夏秋媛，印洪林.胸腺上皮性腫瘤的分子病理研究進(jìn)展 [J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2013，26（3）：314-318.

[11] 王進(jìn)，曾祥，胡偉民，等 .IGF-1R、EGFR、VEGF、HER2在胃癌組織中的表達(dá)及與其預(yù)后的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志，2012，27（5）：468-471.

[12] 李文姍，梁玉梅，余琦，等.C-KIT、EGFR及IGF-1R在胸腺瘤及其他腫瘤中的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2016， 24（7）：1154-1157.

[13] 馬瑩，宋印利，包穎 .EGFR、HER-2、VEGF 及 IGF-1R在胃癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)相關(guān)性分析 [J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，48（3）：191-194.

[14] 吳開良，蔣國(guó)梁，茅靜芳，等.259例胸腺瘤術(shù)后放療長(zhǎng)期生存結(jié)果及預(yù)后因素分析[J].中華放射腫瘤學(xué)雜志， 2005，14（6）：467-470.

[15] Liang K，Ang KK，Milas L，et al.The epidermal growth factor receptor mediates radioresistance.[J].International Journal of Radiation Oncology Biology Physics，2003，57（1）：246-254.