王松巖,李春光,馬 爽,馬寅芙,李 兵,王 磊,張世英*

(1.吉林省人民醫(yī)院 腎內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春130021；2.長(zhǎng)春市中醫(yī)院)

*通訊作者

高通量血液透析患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的分析

王松巖1,李春光2,馬 爽1,馬寅芙1,李 兵1,王 磊1,張世英1*

(1.吉林省人民醫(yī)院 腎內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春130021；2.長(zhǎng)春市中醫(yī)院)

維持性血液透析患者各種感染及腫瘤的發(fā)病率較普通人群均明顯增高，感染和腫瘤的發(fā)生與機(jī)體的免疫功能低下有一定關(guān)系，而淋巴細(xì)胞與機(jī)體免疫功能相關(guān)。本研究旨在探討高通量血液透析患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的變化，并進(jìn)行分析，為臨床上改善患者的免疫功能，減少透析患者感染及腫瘤的發(fā)生提供一定的理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取吉林省人民醫(yī)院腎內(nèi)科于2015年1月-2016年9月間住院且臨床資料完整的患者共67例為研究對(duì)象。按腎功能指標(biāo)將研究對(duì)象分為3組，高通量血液透析組(透析齡大于3個(gè)月)、腎功能異常未透析組以及腎功能正常組?；仡櫺苑治鋈M患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的情況。其中高通量血液透析組患者共25例(男女比例8∶17)，年齡29-90歲(平均年齡69.680±14.820歲)。透析齡為4月-16年(平均透析齡為5.733±3.763年)。原發(fā)病為慢性腎小球腎炎者11例，糖尿病腎病者5例，高血壓良性腎小動(dòng)脈硬化者3例，慢性腎盂腎炎者1 例，藥物性腎損害4例，痛風(fēng)腎1例。腎衰竭未透析組患者共22例(男女比例9∶13)，年齡39-83歲(平均年齡67.182±12.861歲)。原發(fā)病為慢性腎小球腎炎者10例，糖尿病腎病者3例，高血壓良性腎小動(dòng)脈硬化者7例，慢性腎盂腎炎者1 例，藥物性腎損害1例。肌酐范圍210-1146 μmol/L，平均為487.068±254.036 μmol/L。腎功能正常組患者共20例(男女比例7:13)，年齡28-92歲(平均年齡59.9±15.573歲)。原發(fā)病為慢性腎小球腎炎者7例，糖尿病腎病者2例，高血壓良性腎小動(dòng)脈硬化者5例，腎病綜合征4 例，動(dòng)脈硬化2例。

高通量血液透析患者以動(dòng)靜脈內(nèi)瘺或長(zhǎng)期深靜脈導(dǎo)管為血管通路。高通量血液透析器采用德國(guó)Fresenius公司生產(chǎn)的High-Flux FX-80透析器，膜表面積為1.8 m2。采用標(biāo)準(zhǔn)碳酸氫鹽透析液，超純凈透析用水。Fresenius 4008 B透析機(jī)，透析液流量500 mL/min，血流量220-280 mL/min，透析溫度36.0-37.0℃，透析時(shí)間4小時(shí)/次，3次/周，以干體重為目標(biāo)設(shè)置超濾量。低分子肝素抗凝。規(guī)律血液透析基礎(chǔ)上給予常規(guī)藥物治療。所有入組患者入組時(shí)無(wú)感染、腫瘤及應(yīng)用免疫制劑。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

細(xì)胞表面標(biāo)志單克隆抗體CD3/CD4/CD8三標(biāo)(即CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PE-CY5)、CD3-FITC/CD19-PE、CD3-FITC/(CD16+56)-PE，溶血素Optilyse C等購(gòu)于Beckman Coulter公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

所有患者于入院當(dāng)日或次日空腹靜脈采血檢測(cè)血常規(guī)及淋巴細(xì)胞分型。其中血常規(guī)檢查應(yīng)用日本SYSMEX公司常規(guī)血細(xì)胞自動(dòng)分類計(jì)數(shù)儀；淋巴細(xì)胞分型檢測(cè)應(yīng)用美國(guó)Beckman Coulter公司生產(chǎn)的EPICS XL型流式細(xì)胞儀。將100 μl EDTA抗凝全血加20 μl抗體，室溫避光孵育15分鐘；加入500 μl溶血素，混勻，室溫避光孵育10分鐘；加入PBS 2 ml，混勻，1 500轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄上清液，加500 μl PBS上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

白細(xì)胞計(jì)數(shù)及淋巴細(xì)胞分型屬于計(jì)量資料，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，透析組、未透析組及腎功正常組三組之間比較采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞總數(shù)的變化(見(jiàn)表1) 三組患者白細(xì)胞總數(shù)均在正常范圍，三組比較無(wú)明顯差異。與腎功能正常組比較，未透析組下降，高通量血液透析組降至最低。高通量血液透析組患者淋巴細(xì)胞總數(shù)較腎功正常組明顯降低，P=0.003，差異顯著。高通量血液透析組患者淋巴細(xì)胞比率較腎功正常組明顯降低，P=0.033，差異顯著。

表1 三組患者白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)情況

注： 與腎功正常組比較*P<0.01，#P<0.05。

2.2 三組患者淋巴細(xì)胞分型表達(dá)的變化(見(jiàn)表2) (1)與腎功正常組患者比較，CD3+淋巴細(xì)胞所占比率在腎衰未透析組水平升高，P<0.05，差異顯著；高通量血液透析組較未透析組有所下降，但與腎功正常組患者比較差異不顯著。(2)與腎功正常組患者比較，高通量血液透析組及未透析組患者CD3+CD8+淋巴細(xì)胞所占比率有所升高，但差異不顯著。(3)高通量血液透析組及未透析組患者CD3+CD4+淋巴細(xì)胞所占比率與腎功正常組患者比較無(wú)明顯差異。(4)隨著腎功能進(jìn)展，NK細(xì)胞所占比率呈降低趨勢(shì)。與腎功能正常組患者比較，腎衰未透析組患者NK細(xì)胞所占比率明顯降低，差異顯著；高通量血液透析組患者NK細(xì)胞所占比率較腎衰未透析組水平明顯升高，P=0.03，差異顯著，基本達(dá)到腎功正常組水平。(5)隨著腎功能進(jìn)展，B淋巴細(xì)胞所占比率呈降低趨勢(shì)，與腎功能正常組患者比較，未透析組患者B淋巴細(xì)胞所占比率明顯降低，高通量血液透析組亦明顯降低。三組之間兩兩比較P=0，差異顯著。

表2 三組患者淋巴細(xì)胞分型表達(dá)情況

注：與腎功正常組比較,*P<0.01，#P<0.05。

3 討論

研究表明尿毒癥毒素及干預(yù)性治療可使尿毒癥及血液透析患者出現(xiàn)免疫功能異常[1,2]。本研究將高通量血液透析患者與腎功能正常患者及腎功能異常但未行透析的患者進(jìn)行比較，來(lái)探討高通量血液透析對(duì)患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及分型表達(dá)的影響。

既往研究表明血液透析患者與健康對(duì)照組相比淋巴細(xì)胞減少[3,4]。我們的研究也得出了一致的結(jié)果：三組患者盡管白細(xì)胞總數(shù)均在正常范圍，但是隨著腎功能進(jìn)展，淋巴細(xì)胞總數(shù)呈下降趨勢(shì)，高通量血液透析患者淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比率均較腎功能正常組患者明顯下降，差異顯著。而關(guān)于CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率在慢性腎臟病患者與健康對(duì)照組的比較，目前不同的研究結(jié)果結(jié)論尚不完全相同[3,5,6]。本研究結(jié)果表明隨著腎功能進(jìn)展，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率呈升高趨勢(shì)，CD3+淋巴細(xì)胞所占比率在腎衰未透析組水平較腎功正常組明顯升高，差異顯著；高通量血液透析后，CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+所占比率較未透析組有所下降，但仍高于腎功能正常組，差異不顯著。CD4+/CD8+三組間差異不顯著。

既往文獻(xiàn)報(bào)道血液透析患者B淋巴細(xì)胞數(shù)低于正常對(duì)照組[7,8]。在本研究中，三組患者B淋巴細(xì)胞所占比率隨著腎功能的進(jìn)展呈降低趨勢(shì)，與腎功能正常組患者比較，腎衰未透析組患者明顯降低，高通量血液透析組患者降至最低，三組之間兩兩比較差異顯著。項(xiàng)方方等曾研究B細(xì)胞數(shù)和有效腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)的關(guān)系，并證實(shí)二者呈獨(dú)立正相關(guān)[5]，本研究進(jìn)一步證明了這種相關(guān)性。也有體外研究表明尿毒癥(包括透析與未透析)患者B淋巴細(xì)胞減少可能部分歸因于與Bcl-2基因表達(dá)下降相關(guān)的細(xì)胞凋亡[8]。

自然殺傷(NK)細(xì)胞為機(jī)體提供了針對(duì)感染和腫瘤的第一線免疫防御。NK細(xì)胞不僅具有殺傷功能，在某些病理?xiàng)l件下還可以分泌細(xì)胞因子參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)。本研究NK細(xì)胞分析結(jié)果表明：與腎功正常組患者比較，腎衰未透析組患者NK細(xì)胞所占比率明顯降低，差異顯著；高通量血液透析組患者明顯升高，基本達(dá)到腎功正常組水平。未透析組患者NK細(xì)胞計(jì)數(shù)降低可能與腎臟的清除能力降低相關(guān)[9]；而血液透析患者盡管NK細(xì)胞計(jì)數(shù)與腎功正常組比較沒(méi)有差異，但血液透析患者的慢性炎癥狀態(tài)可使NK細(xì)胞zeta鏈下調(diào)，導(dǎo)致NK細(xì)胞活性降低[10],這或許是血液透析患者容易發(fā)生感染、腫瘤等的一個(gè)原因，而長(zhǎng)期透析可以改善NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性[9]。

綜上，本研究結(jié)果表明，高通量血液透析患者存在淋巴細(xì)胞總數(shù)及分型表達(dá)異常，包括淋巴細(xì)胞總數(shù)下降及B淋巴細(xì)胞所占比率下降等，而NK細(xì)胞所占比率盡管與腎功正常組無(wú)明顯差異，但可能存在活性降低。這些因素可能是導(dǎo)致高通量血液透析患者免疫功能低下，易于發(fā)生感染、腫瘤等疾病的一個(gè)原因。因此，在臨床上可以采取相應(yīng)的干預(yù)措施來(lái)調(diào)節(jié)血液透析患者的淋巴細(xì)胞功能，增強(qiáng)免疫力，改善預(yù)后。

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1007-4287(2017)03-0519-03

2016-12-22)