吳章榮 陳德榮 盧玉文 秦延春 丘獻(xiàn)娟 韋錦福

（玉林市微生物研究所，廣西玉林53700）

大容山位于廣西東南部，是桂東南最高峰，屬熱帶季風(fēng)氣候，山高林密，原始森林面積廣闊，具有豐富的野生食用菌資源。研究從大容山采集到香菇（圖1）并進(jìn)行分離馴化試驗(yàn)，希望獲得適合當(dāng)?shù)卦耘嗟膬?yōu)良香菇新品種。試驗(yàn)分別從菌蓋處菌柄與菌蓋處取組織培養(yǎng)塊進(jìn)行分離培養(yǎng)，對(duì)比分離的效果；分別運(yùn)用5 種不同培養(yǎng)基配方，7 種不同的pH，以及不同溫度范圍進(jìn)行培養(yǎng)試驗(yàn)?，F(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下。

圖1 大容山野生香菇

1 材料和方法

1.1 供試材料從大容山上采得的新鮮野生香菇子實(shí)體。經(jīng)過分離純化后獲得菌株。

1.2 不同部位子實(shí)體分離試驗(yàn)選擇生長(zhǎng)健壯、朵形正常、無病蟲、菌膜未破的野生香菇子實(shí)體。取材按菌蓋、菌柄與菌蓋交界處兩個(gè)部位進(jìn)行分離，培養(yǎng)基為PDA 加富培養(yǎng)基，常規(guī)方法制作，置于生化培養(yǎng)箱25℃培養(yǎng)。

1.3 供試母種培養(yǎng)基配方試驗(yàn)設(shè)計(jì)五個(gè)配方:配方①馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g；配方②馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g；配方③馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，蛋白胨2 g；配方④馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，蛋白胨4 g；配方⑤馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，麩皮10 g。

將大容山野生香菇母種，取菌齡相同0.5 cm 大小的活化菌絲塊分別接入試管斜面中，每個(gè)配方接7 支試管斜面，25℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫培養(yǎng)。接種培養(yǎng)10 d后測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，觀察菌絲形態(tài)。

1.4 pH 梯度試驗(yàn)試驗(yàn)所用的培養(yǎng)基為PDA加富培養(yǎng)基配方③。設(shè)置7 個(gè)pH 為pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pH10。將分離大容山野生香菇母種擴(kuò)大培養(yǎng)，取菌齡相同0.5 cm 大小的接種塊接入上述試管斜面中，每個(gè)pH 處理接6 支試管，3 個(gè)重復(fù)。置25℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，接種培養(yǎng)10 d 后測(cè)量菌絲生長(zhǎng)速度，觀察菌絲形態(tài)特征等。

1.5 菌絲培養(yǎng)溫度試驗(yàn)擴(kuò)大培養(yǎng)培養(yǎng)基為PDA加富培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度設(shè)10℃、15℃、20℃、25℃，每個(gè)溫度處理培養(yǎng)7支試管。接種培養(yǎng)后10 d測(cè)量生長(zhǎng)速度，觀察菌絲形態(tài)特征等。

2 結(jié)果與分析

2.1 大容山野生香菇菌絲不同組織分離培養(yǎng)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果，用菌柄與菌蓋交界處組織塊分離效果比較好，分離成功率達(dá)85%。原因是柄與菌蓋交界處組織細(xì)胞生長(zhǎng)活力較強(qiáng)，菌肉肥厚，與外界環(huán)境接觸少，不容易受細(xì)菌、霉菌感染（表1）。

表1 不同組織分離培養(yǎng)結(jié)果

2.2 不同母種培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲結(jié)果從表2、圖2可知，菌絲生長(zhǎng)最好的培養(yǎng)基是配方④，菌絲粗壯，濃密、爬壁力強(qiáng)，生長(zhǎng)速度最快；其次為配方②，菌絲生長(zhǎng)最差是配方⑤，菌絲較稀疏纖細(xì)。菌絲長(zhǎng)勢(shì)從好到差依次為配方④、配方②、配方①、配方③、配方⑤。配方④加入4 g 蛋白胨，含氮量豐富，因此菌絲生長(zhǎng)最好。

表2 供試母種培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)情況

圖2 配方④培養(yǎng)母種

2.3 培養(yǎng)基pH 試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果表明:當(dāng)培養(yǎng)基pH 為5 時(shí)菌絲生長(zhǎng)最好，表現(xiàn)為菌絲粗壯濃密、潔白尖端整齊、爬壁力強(qiáng)；其次為pH4，菌絲除爬壁力比pH5 稍弱，其它各項(xiàng)指標(biāo)與pH5 基本差不多；pH6、pH7、pH8菌絲總體長(zhǎng)勢(shì)差不多，但與pH5相比稍差，pH9、pH10 長(zhǎng)勢(shì)基本一致，但比其他各pH 培養(yǎng)基差。由此可見大容山野生香菇母種菌絲在偏酸性培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好，偏堿性培養(yǎng)基稍差，其中最適宜的pH為5（表3）。

2.4 菌絲培養(yǎng)溫度試驗(yàn)結(jié)果由表4 可見，大容山野生香菇菌絲在25℃培養(yǎng)長(zhǎng)勢(shì)最好，白色、濃密、粗壯、尖端整齊、爬壁力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度最快。其次為20℃培養(yǎng)，白色、濃密、較粗壯、爬壁力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度較快。第三為15℃培養(yǎng)，白色、濃密、較粗壯、整齊、爬壁力較弱、生長(zhǎng)速度一般。培養(yǎng)溫度10℃，生長(zhǎng)速度最慢，菌絲灰白，較濃，較細(xì)、尖端較整齊，爬壁力弱。

表3 不同pH培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)情況

表4 不同培養(yǎng)溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

3 小結(jié)與討論

通過對(duì)大容山野生香菇的分離培養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果得出大容山野生香菇分離母種時(shí)從菌柄與菌蓋交接處挑取組織塊成功率最高，組織塊萌發(fā)快；母種的培養(yǎng)溫度為25℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)最快長(zhǎng)勢(shì)最好。培養(yǎng)基pH4～pH10 菌絲均可生長(zhǎng)，偏酸性比偏堿性菌絲生長(zhǎng)好，以培養(yǎng)基pH5 為最佳。大容山野生香菇最適母種培養(yǎng)基:馬鈴薯100 g，葡萄糖10 g，瓊脂8.3 g，硫酸鎂2 g，磷酸二氫鉀2 g，蛋白胨4 g。

大容山為廣西桂東南最高峰，山高林密，云霧繚繞，山水清轍，森林茂密，生物資源豐富，生態(tài)環(huán)境質(zhì)量良好。生長(zhǎng)其中香菇肉質(zhì)特別脆嫩，味道特別鮮美，香氣特別濃郁，今后應(yīng)對(duì)大容山野生香菇人工栽培進(jìn)一步研究。