花榜清張秋香 劉振民 吳正鈞

(1. 江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2. 光明乳業(yè)股份有限公司乳業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200436)

牛類芽孢桿菌BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)培養(yǎng)條件的優(yōu)化

花榜清1,2張秋香1劉振民2吳正鈞2

(1. 江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2. 光明乳業(yè)股份有限公司乳業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200436)

為提高牛類芽孢桿菌BD3526在麩皮培養(yǎng)基中抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量，以藤黃微球菌為指示菌，抑菌圈直徑為指標(biāo)，分別考察了培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、種齡、接種量以及麩皮濃度5個(gè)單因素對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響。其中，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、接種量以及麩皮濃度4個(gè)因素對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量影響顯著，故選取該4個(gè)因素進(jìn)行響應(yīng)面法優(yōu)化。優(yōu)化后的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度29 ℃、培養(yǎng)時(shí)間73 h、接種量3.2%、麩皮濃度4.2%，在該條件下，BD3526抑菌圈直徑為19.88 mm，抑菌效價(jià)相對于優(yōu)化前提高了100%。

牛類芽孢桿菌 BD3526；抗菌物質(zhì)；培養(yǎng)條件

細(xì)菌素是指微生物在代謝過程中通過核糖體合成機(jī)制產(chǎn)生的一類具有生物活性的蛋白質(zhì)或肽類物質(zhì)，可以殺滅親緣相近的菌株或抑制其生長[1]。近年來，細(xì)菌素作為有潛力的天然食品防腐劑得到了廣泛的研究，乳酸鏈球菌素(Nisin)是目前唯一應(yīng)用于食品中的細(xì)菌素，其在食品中的應(yīng)用有助于減少化學(xué)防腐劑的使用，降低食品的滅菌強(qiáng)度，有利于產(chǎn)品營養(yǎng)物質(zhì)的保留，延長食品貨架期，使產(chǎn)品具有高品質(zhì)[2-3]。乳酸鏈球菌素在堿性條件下不穩(wěn)定且難以溶解，從而限制了其應(yīng)用范圍[4]。本試驗(yàn)所用供試菌株是從西藏地區(qū)牦牛奶中分離得到的，命名為P.bovisBD3526(CGMCC 8333 = DSM 28815)[5]，前期研究[6]表明其產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)對藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌、單增李斯特桿菌和枯草芽孢桿菌均有抑制作用，且耐酸堿，具有極強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，并初步判定其為多肽類抗菌物質(zhì)，在食品方面有著較大的應(yīng)用前景。菌株的自身特性是影響其產(chǎn)抗菌物質(zhì)能力大小的唯一內(nèi)在因素，此外，發(fā)酵條件如培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分[7-8]、培養(yǎng)溫度[9-10]和培養(yǎng)時(shí)間[11-12]等外在因素對其產(chǎn)抑菌物質(zhì)的能力大小也具有很大的影響，因此優(yōu)化發(fā)酵條件，是一種有效提高抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的辦法[13-14]。目前還未有關(guān)于牛類芽孢桿菌這種新的菌種產(chǎn)抗菌物質(zhì)能力大小的研究。本試驗(yàn)擬以牛類芽孢桿菌BD3526為研究對象，以經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的麩皮為發(fā)酵培養(yǎng)基，通過單因素試驗(yàn)得到顯著性影響因素，進(jìn)而通過響應(yīng)面法優(yōu)化培養(yǎng)條件，從而獲得其產(chǎn)抗菌物質(zhì)的最佳培養(yǎng)條件，為后期分離純化以及結(jié)構(gòu)鑒定的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌種

供試菌株P(guān).bovisBD3526(CGMCC 8333= DSM 28815)、指示菌藤黃微球菌(Micrococcusluteus)CGMCC1.1848：乳業(yè)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；

P.bovisBD3526生長培養(yǎng)基(TYC固體培養(yǎng)基)：胰酪蛋白胨15 g/L，酵母提取物5 g/L，蔗糖50 g/L，無水乙酸鈉20 g/L，氯化鈉1 g/L，碳酸氫鈉2 g/L，硫酸鈉 0.1 g/L，L-胱氨酸0.2 g/L，十二水合磷酸氫鈉2 g/L，瓊脂12 g/L；

P.bovisBD3526種子液培養(yǎng)基(TYC液體培養(yǎng)基)：胰酪蛋白胨15 g/L，酵母提取物5 g/L，蔗糖50 g/L，無水乙酸鈉20 g/L，氯化鈉1 g/L，碳酸氫鈉2 g/L，硫酸鈉 0.1 g/L，L-胱氨酸0.2 g/L，十二水合磷酸氫鈉2 g/L；

發(fā)酵培養(yǎng)基(麩皮溶液培養(yǎng)基)：小麥麩皮40 g/L；

指示菌培養(yǎng)基(營養(yǎng)瓊脂)：牛肉膏1 g/L，酵母膏2 g/L，蛋白胨5 g/L，氯化鈉5 g/L，瓊脂15g/L。

1.2 試劑

營養(yǎng)瓊脂：上海盛思生化科技有限公司；

胰酪蛋白胨、酵母抽提物：上海拜力生物科技有限公司；

無水乙酸鈉、蔗糖、氯化鈉、碳酸氫鈉、硫酸鈉、十二水合磷酸氫鈉：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

L-胱氨酸：上海阿拉丁生化科技股份有限公司；

小麥麩皮：蛋白質(zhì)18.6%，脂肪6.2%，總碳水化合物63.9%，水分7.89%，灰分3.38%，市售。

1.3 儀器與設(shè)備

隔水式恒溫培養(yǎng)箱：GNP-9270型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；

超凈工作臺：TH-CB-402型，美國Labconco公司；

高壓蒸汽殺菌鍋：HVE-50型，日本Hirayama公司；

電子天平：TE612-L型，美國Sartorius公司。

1.4 方法

1.4.1 菌株的培養(yǎng)

(1) 供試菌株的培養(yǎng)：將菌株劃線接種于TYC瓊脂平板，30 ℃好氧培養(yǎng)48 h，備用。

(2) 指示菌的培養(yǎng)：指示菌劃線接種于營養(yǎng)瓊脂固體平板上，30 ℃好氧培養(yǎng)48 h，挑取單菌落于15 mL營養(yǎng)肉湯中，于30 ℃、180 r/min搖床中培養(yǎng)20 h，菌液稀釋備用。

1.4.2 發(fā)酵種子液的制備 挑牛類芽孢桿菌BD3526在TYC瓊脂平板上的單菌落，接種到20 mL TYC液體培養(yǎng)基中，于30 ℃、180 r/min搖床中培養(yǎng)16 h，即得種子液。

1.4.3 發(fā)酵液的制備 將P.bovisBD3526 TYC種子液按3.0 mL/100 mL接入40 g/L麩皮培養(yǎng)基中，裝量為50 mL/250 mL 錐形瓶，于30 ℃，180 r/min搖床培養(yǎng)72 h，即得發(fā)酵液。

1.4.4 牛類芽孢桿菌BD3526計(jì)數(shù)方法 取1 mL 培養(yǎng)后的BD3526樣品用無菌生理鹽水進(jìn)行10倍系列稀釋，取0.1 mL經(jīng)過稀釋后的菌懸液，采用傾注倒平板的方法、以營養(yǎng)瓊脂為培養(yǎng)介質(zhì)進(jìn)行計(jì)數(shù)。待營養(yǎng)瓊脂平板凝固后，于30 ℃好氧培養(yǎng)24 h取出，進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.4.5 抑菌活性的測定 將發(fā)酵液在6 000 g下離心10 min，將菌體和麩皮去除，發(fā)酵液上清60 ℃水浴30 min，將部分菌體滅活，測定發(fā)酵上清液的抑菌活性。抑菌活性的測定采用牛津杯法[15]。將培養(yǎng)好的指示菌菌液與融化后、冷卻至45 ℃的營養(yǎng)瓊脂混合，使指示菌終濃度為106CFU/mL，將培養(yǎng)基倒入平板。待瓊脂完全凝固后，在培養(yǎng)基表面放置牛津杯(內(nèi)徑6 mm、外徑8 mm、高10 mm的圓形光滑小管)，在杯中加入100 μL待檢樣品，置30 ℃培養(yǎng)48 h，觀察結(jié)果。

1.4.6 抗菌物質(zhì)的效價(jià)測定 采用二倍稀釋法測定抗菌物質(zhì)的效價(jià)。取牛類芽孢桿菌BD3526發(fā)酵上清液，用滅菌的生理鹽水進(jìn)行2 倍梯度稀釋，以能夠出現(xiàn)抑菌圈的最高稀釋度為一個(gè)活力單位(1 AU)，其倒數(shù)即為原發(fā)酵液的效價(jià)值(AU/mL)。

1.4.7 培養(yǎng)溫度和時(shí)間對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 在40 g/L麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基(50 mL/250 mL三角瓶)中，以3.0 mL/100 mL接種量接入活化的牛類芽孢桿菌BD3526，分別置于20，25，30，35 ℃搖床中進(jìn)行培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速為180 r/min，分別取不同培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的發(fā)酵液進(jìn)行抗菌物質(zhì)活性和活菌數(shù)量的測定。

1.4.8 種齡對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 將培養(yǎng)9，12，15，18，21，24，27 h的種子液以3.0 mL/100 mL的接種量接種到40 g/L 麩皮培養(yǎng)基中(50 mL/250 mL三角瓶)，于30 ℃、180 r/min培養(yǎng)72 h，發(fā)酵結(jié)束后，測定活菌數(shù)和抗菌活性。

1.4.9 接種量對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 在40 g/L 麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基(50 mL/250 mL三角瓶)中，分別接入1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL/100 mL活化的牛類芽孢桿菌BD3526，在30 ℃、180 r/min條件下?lián)u床培養(yǎng)72 h后，取發(fā)酵液進(jìn)行抗菌活性和活菌數(shù)量測定。

1.4.10 麩皮濃度對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 將BD3526 種子液按3.0 mL/100 mL 的接種量分別接入麩皮濃度為10，20，30，40，50 g/L的麩皮培養(yǎng)基中(50 mL/250 mL)，于30 ℃、180 r/min搖床培養(yǎng)72 h后，取樣測定抗菌物質(zhì)活性和活菌數(shù)。

1.4.11 抗菌物質(zhì)產(chǎn)量影響因素的響應(yīng)面優(yōu)化 在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，選取顯著影響因素，以抗菌物質(zhì)的抑菌圈直徑為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 數(shù)據(jù)處理和分析方法

采用Design Expert 8. 0 與SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，并進(jìn)行顯著性分析，其中P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著；運(yùn)用Excel對試驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制表格；運(yùn)用Origin 8.0對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 培養(yǎng)溫度和時(shí)間對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 由圖1可知，在不同的培養(yǎng)溫度和時(shí)間下，BD3526抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量差異顯著。當(dāng)菌株BD3526的培養(yǎng)溫度為20 ℃時(shí)，發(fā)酵液活性極低，直到60 h才檢測出活性，圖2中此溫度下BD3526的活菌數(shù)明顯較少，菌體處于半休眠狀態(tài)。隨著溫度的升高，抗菌物質(zhì)的抗菌活性增強(qiáng)，當(dāng)溫度為30 ℃時(shí)，菌體進(jìn)入穩(wěn)定期最早，抗菌效果最好，然而隨著溫度的繼續(xù)升高，抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量明顯下降。當(dāng)菌株BD3526的培養(yǎng)溫度為25，30，35 ℃時(shí)，均在24 h時(shí)檢測出活性，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長抗菌物質(zhì)產(chǎn)量持續(xù)增加，72 h時(shí)產(chǎn)量達(dá)到最大值。此后，抗菌物質(zhì)的抑菌圈直徑明顯下降，可能是菌體自身產(chǎn)的蛋白酶降解了部分抗菌物質(zhì)[16]。在培養(yǎng)時(shí)間為72 h時(shí)，不同培養(yǎng)溫度下BD3526抗菌物質(zhì)產(chǎn)量有明顯的差異，在30 ℃和35 ℃下，BD3526的活菌數(shù)差異不大，但抗菌物質(zhì)產(chǎn)量差異較大，表明菌株在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溫度下(25～35 ℃)活菌數(shù)的多少對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量沒有影響。在本試驗(yàn)中不同培養(yǎng)溫度和時(shí)間下，菌株BD3526所產(chǎn)抗菌物質(zhì)的生物活性均存在顯著差異(P<0.05)，且在30 ℃，72 h的培養(yǎng)條件下抗菌活性最大，因此選取培養(yǎng)溫度30 ℃，培養(yǎng)時(shí)間72 h作為下一步響應(yīng)面試驗(yàn)的中心試驗(yàn)點(diǎn)。

Figure 1 Diameter of inhibition zone of fermented wheat bran broth with obtained under different cultivation temperature and period

Figure 2 Viable account of fermented wheat bran broth with obtained under different cultivation temperature and period

2.1.2 種齡對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 由圖3可知，在18 h內(nèi)隨著接種菌齡的增大，抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量逐漸變大。之后，抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量有所降低，方差分析結(jié)果顯示種齡在12～27 h對該抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量影響并不顯著(P>0.05)。因此，在后期的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)中未選擇種齡作為考察因素。

2.1.3 接種量對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 由圖4可知，隨著接種量的增加，抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量也逐漸增大，當(dāng)接種量為3%時(shí)該抗菌物質(zhì)的抑菌活性最高，隨后抗菌活性隨接種量增加而下降，接種量對BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)的影響顯著(P<0.05)。因此選擇接種量為3%進(jìn)行下一步的響應(yīng)面試驗(yàn)。

Figure 3 Diameter of inhibition zone of fermented wheat bran broth with different inoculum age

Figure 4 Diameter of inhibition zone of fermented wheat bran broth with different inoculum amount

2.1.4 麩皮濃度對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響 由圖5可知，隨著麩皮濃度的增加，抑菌圈的直徑逐漸變大，抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量逐漸增加，當(dāng)麩皮的濃度達(dá)到4%時(shí)產(chǎn)量最大，繼續(xù)增加麩皮濃度，抑菌圈直徑明顯變小，在前期的研究[17]中發(fā)現(xiàn)麩皮濃度的增加有利于BD3526 產(chǎn)胞外多糖，導(dǎo)致發(fā)酵液黏度增加，從而影響溶氧，可能菌體發(fā)酵產(chǎn)抗菌物質(zhì)的能力大小與通氧量有關(guān)。因此選擇麩皮濃度為4% 進(jìn)行下一步的響應(yīng)面試驗(yàn)。

Figure 5 Diameter of inhibition zone of fermented wheat bran broth with different concentration of bran

2.2 抑菌物質(zhì)產(chǎn)量影響因素的響應(yīng)面優(yōu)化

2.2.1 試驗(yàn)結(jié)果 在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，選取培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、接種量和麩皮濃度4個(gè)顯著影響因素，以抗菌物質(zhì)的抑菌圈直徑為響應(yīng)值，設(shè)計(jì)4因素3水平響的應(yīng)面試驗(yàn)，見表1，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

2.2.2 影響抗菌物質(zhì)產(chǎn)量因素的回歸模型建立與顯著性分析 利用Design Expert 8.0軟件對表2 中的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，獲得的抑菌圈直徑(Y)對培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、接種量和麩皮濃度二次多項(xiàng)式回歸模型方程為

Y=19.8+0.56A+0.16B+0.69C-0.53D+0.46AB-0.82AC-0.14AD-0.04BC-0.19BD+0.57CD-1.48A2-0.6B2-3.03C2-1.33D2。

(1)

回歸模型的決定系數(shù)為0.943 2，說明該模型能夠解釋94.32%的變化。失擬項(xiàng)值為0.144 6，沒有達(dá)到顯著水平，說明非試驗(yàn)因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響不大，表明該模型能準(zhǔn)確模擬各因素對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響。因此，可用此模型對 BD3526代謝產(chǎn)抗菌物質(zhì)的發(fā)酵條件進(jìn)行分析和預(yù)測。由F值(見表3)可以看出，各因素對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的影響順序?yàn)椋号囵B(yǎng)時(shí)間>接種量>培養(yǎng)溫度>麩皮濃度。

? P<0.05，差異顯著； P<0.01，差異極顯著。

2.2.3 響應(yīng)面分析 4個(gè)顯著因素(發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度、接種量和麩皮濃度)對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的交互作用可以由響應(yīng)面圖和等高線圖直觀地看出(圖6)。其中各圖表示當(dāng)A、B、C、D中任意兩個(gè)變量取零水平時(shí)，其余兩個(gè)變量對抗菌物質(zhì)產(chǎn)量的交互影響。

由圖6可知，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、接種量和麩皮濃度兩兩之間均有比較明顯的交互作用，其中培養(yǎng)時(shí)間與接種量、培養(yǎng)時(shí)間與培養(yǎng)溫度之間的交互作用最明顯。回歸方程存在穩(wěn)定點(diǎn)，即極大值點(diǎn)。通過軟件分析得出BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)的最佳條件為：培養(yǎng)溫度28.91 ℃、培養(yǎng)時(shí)間73.44 h、接種量3.22%、麩皮濃度4.25%，在此條件下BD3526抑菌圈直徑為19.967 mm。為了更便于操作，將參數(shù)修正為培養(yǎng)溫度29 ℃、培養(yǎng)時(shí)間73 h、接種量3.2%、麩皮濃度4.2%，牛類芽孢桿菌BD3526采取上述修正后的條件進(jìn)行培養(yǎng)，測得其產(chǎn)抗菌物質(zhì)的平均抑菌圈直徑為19.88 mm，比預(yù)測值低1.9%，說明該模型能較好地預(yù)測試驗(yàn)結(jié)果。

2.3 抗菌物質(zhì)效價(jià)的測定

由于牛類芽孢桿菌BD3526采取上述修正后的條件進(jìn)行培養(yǎng)，測得抗菌物質(zhì)的抑菌圈直徑與優(yōu)化前相近，故而通過測定培養(yǎng)條件優(yōu)化前后抗菌物質(zhì)的效價(jià)來比較兩者的差異，將BD3526在優(yōu)化后的培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)后測得其產(chǎn)抗菌物質(zhì)的效價(jià)為200 AU/mL，較優(yōu)化之前所得抑菌物質(zhì)效價(jià)100 AU/mL 提高了1倍，因此利用響應(yīng)面法對牛類芽孢桿菌BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)條件進(jìn)行優(yōu)化具有一定的意義。

3 結(jié)論

單因素試驗(yàn)結(jié)果顯示：牛類芽孢桿菌BD3526產(chǎn)有抗菌物質(zhì)的最佳發(fā)酵溫度30 ℃、最佳發(fā)酵時(shí)間72 h、最佳接種量為3%、最佳麩皮濃度為4%。在此試驗(yàn)基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面法對其發(fā)酵條件進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化，經(jīng)驗(yàn)證，該模型合理可靠。通過模型分析并將其產(chǎn)抗菌物質(zhì)的培養(yǎng)條件進(jìn)行修正后得到的最佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度29 ℃、培養(yǎng)時(shí)間73 h、接種量3.2%、麩皮濃度4.2%，采取上述優(yōu)化條件進(jìn)行培養(yǎng)， BD3526抑菌圈直徑為19.88 mm，通過測定效價(jià)得出優(yōu)化培養(yǎng)條件下BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)效價(jià)為200 AU/mL，較優(yōu)化之前所得抗菌物質(zhì)效價(jià)(100 AU/mL)提高了1倍。因此，利用響應(yīng)面法對牛類芽孢桿菌BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)條件進(jìn)行優(yōu)化對后期進(jìn)一步的試驗(yàn)研究具有一定的指導(dǎo)意義。菌體發(fā)酵產(chǎn)抗菌物質(zhì)能力的大小除了與以上研究的發(fā)酵條件有關(guān)外，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分對其產(chǎn)量也有很大的影響，因此后續(xù)試驗(yàn)可以考慮研究碳源、氮源和無機(jī)鹽的種類及其添加量對牛類芽孢桿菌BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)能力大小的影響，從而更全面地探討影響牛類芽孢桿菌BD3526產(chǎn)抗菌物質(zhì)能力的因素。

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Optimization on cultivation conditions for antimicrobial substance production byPaenibacillusbovissp.nov. BD3526

HUA Bang-qing1,2ZHANGQiu-xiang1LIUZhen-min2WUZheng-jun2

(1.SchoolofFoodScienceandTechnology,JiangnanUniversity,Wuxi,Jiangsu214122,China; 2.StateKeyLaboratoryofDairyBiotechnology,BrightDairyandFoodCo.,Ltd.,Shanghai200436,China)

In order to increase the production of the antimicrobial substances byP.bovisBD3526 in wheat bran broth，the effect of individual fermentation parameter including cultivation temperature, period, inoculum ratio, age of the inoculum and concentration of wheat bran on the inhibitory intensity of the fermented wheat bran broth was determined, employingMicrococcusluteusas the indicator. Based on the results of single factor tests, four variables i.e. cultivation temperature, cultivation period, inoculum ratio and concentration of wheat bran were employed to further optimize the fermentation conditions for antimicrobial components production by the strain BD3526 by response surface methodology. The optimal cultivation conditions for BD3526 to produce antimicrobial substance were composed of a cultivation temperature of 29 ℃, a cultivation period of 73 h, an inoculum ratio of 3.2% and a wheat bran concentration of 4.2%. The inhibitory zone of the cultivated wheat bran broth under the optimal condition onM.luteusreached 19.88 mm in diameter, and the potency of bacteriocin produced under the optimal conditions was raised by 100% and 300% as compared to that produced under the original fermentation conditions.

P.bovisBD3526; antimicrobial substance; cultivation conditions

國家“十二五”科技支撐計(jì)劃 (編號：2013BAD18B01)；上海市科委項(xiàng)目(編號：16DZ2280600)

花榜清，女，江南大學(xué)在讀碩士研究生。

張秋香(1979—)，女，江南大學(xué)副教授，博士。 E-mail: zhangqx@jiangnan.edu.cn

2017-01-05

10.13652/j.issn.1003-5788.2017.03.007