重要危害因子單克隆抗體的制備及其食品安全快速檢測技術(shù)應(yīng)用

食品潛在污染物種類繁多，發(fā)展簡便、快速、高靈敏、低成本的檢測方法是保障食品安全的根本途徑?；趩慰寺】贵w的各類免疫分析技術(shù)是現(xiàn)代食品安全快速檢測技術(shù)發(fā)展的主要方向之一。因此，高活性單克隆抗體的制備及其應(yīng)用自然為眾多研究者所關(guān)注。

單克隆抗體的制備過程涉及到很多技術(shù)環(huán)節(jié)，包括抗原制備、免疫劑量設(shè)計、細(xì)胞融合、活性雜交瘤細(xì)胞篩選以及抗體純化等。江南大學(xué)胥傳來教授團(tuán)隊發(fā)展了基于理論模型來預(yù)測抗原抗體配對的新方法，創(chuàng)制了重金屬鉛、鎘、汞等元素的免疫分析試劑和產(chǎn)品。設(shè)計出真菌毒素、抗菌劑、殺蟲劑、抗生素、激素、病原微生物以及非法添加物等物質(zhì)的特異性新型半抗原和完全抗原，在抗體篩選以及抗原、抗體配對過程中引入食品基質(zhì)，有效提升了檢測試劑的基質(zhì)耐受性，獲得了200余種優(yōu)良抗體和配對抗原，解決了抗體和抗原在實際檢測過程中耐受性差，易失效的難題，提升了快速檢測結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性，相關(guān)檢測試劑和產(chǎn)品在行業(yè)內(nèi)獲得廣泛應(yīng)用。如中國專利CN201610538905.3提供的抗氫化可的松特異性單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CGMCC No.12022可以分泌產(chǎn)生對氫化可的松具有較好的特異性和較高的靈敏度，可以用于制備氫化可的松的免疫檢測試劑盒以及膠體金試紙條。CN201610480745.1公開了一株重金屬鉻單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C2及其應(yīng)用。該發(fā)明通過鉻完全抗原與等量弗氏佐劑混合乳化后，通過背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，經(jīng)過間接競爭ELISA篩選和三次亞克隆，得到重金屬鉻單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株C2。此細(xì)胞株分泌的單克隆抗體可識別重金屬三價鉻離子，特異性好和靈敏度高，可以用于食品安全中重金屬鉻的殘留檢測。CN201610480743.2公開了一株砷單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株FG1及其應(yīng)用。該發(fā)明獲得的抗砷離子單克隆抗體細(xì)胞株FG1，對砷有較好的檢測靈敏度和特異性。該細(xì)胞株FG1分泌的抗體穩(wěn)定性好：雜交瘤細(xì)胞凍存于液氮中至少保存5年，純化的抗體在-20℃冰箱中至少可存放2年；抗體特異性高：與其他金屬離子暫未發(fā)現(xiàn)交叉反應(yīng)。CN201610396856.4公開了基于沙門氏菌核心多糖單克隆抗體SQX6D8的檢測食品中沙門氏菌屬的膠體金試紙條的制備方法，其以高碘酸鈉法合成的鼠傷寒沙門氏菌脂多糖（LPS）與牛血清白蛋白（BSA）的偶聯(lián)物作為膠體金試紙條測試線（T線）的包被原，以沙門氏菌核心多糖單克隆抗體SQX6D8作為金標(biāo)抗體。CN201610372606.7公開了一株抗呋喃它酮代謝物AMOZ的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株YH4及其應(yīng)用，該發(fā)明雜交瘤細(xì)胞株YH4，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.12017。抗呋喃它酮代謝物AMOZ單克隆抗體，它由所述雜交瘤細(xì)胞株YH4分泌產(chǎn)生。此細(xì)胞株YH4分泌的單克隆抗體，對呋喃它酮代謝物AMOZ具有較好的特異性，有較好的檢測靈敏度和親和力，可用于食品安全中抗呋喃它酮代謝物AMOZ的特異性檢測。CN201610324645.X公開了一株抗雌三醇特異性單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株NaN2及其應(yīng)用。該發(fā)明的抗雌三醇特異性單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株NaN2，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 12016。CN201610056165.X公開了一株特異性抗丙烯酰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株2F6及其應(yīng)用。該發(fā)明將原藥丙烯酰胺與對巰基苯甲酸采用化學(xué)衍生加成制備半抗原，半抗原與BSA偶聯(lián)制備免疫原，半抗原與OVA偶聯(lián)制備包被原。對小鼠進(jìn)行免疫后得到一株特異性抗丙烯酰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株2F6。此細(xì)胞株2F6分泌的單克隆抗體，僅特異性針對衍生化丙烯酰胺，與丙烯酰胺本身、對巰基苯甲酸交叉率分別為2.19%、3.87%。獲得的抗丙烯酰胺單克隆抗體細(xì)胞株，有較好的檢測靈敏度和親和力，可以達(dá)到特異性檢測丙烯酰胺的目的。CN201610056172.X公開了一株特異性抗頭孢喹肟單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株2D4及其應(yīng)用。CN201610039900.6公開了一種基于單克隆抗體的檢測食品中李斯特菌屬的雙抗體夾心ELISA法。該發(fā)明用原核表達(dá)的單增李斯特菌P60蛋白免疫8周齡BALB/c小鼠，經(jīng)免疫、融合、多重篩選得到15株李斯特菌屬特異性單克隆抗體，分別標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP，并以單增李斯特菌CMCC54003為目標(biāo)物進(jìn)行兩兩配對。經(jīng)篩選不同配對的交叉反應(yīng)，以2G7為包被抗體、2H8-HRP為酶標(biāo)抗體建立夾心ELISA方法對包括單增李斯特菌在內(nèi)的李斯特菌屬均有交叉反應(yīng)。對測試的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、大腸桿菌O157、沙門氏菌、阪崎腸桿菌、空腸彎曲桿菌、結(jié)腸彎曲桿菌沒有交叉反應(yīng)。

單克隆抗體技術(shù)雖然在食品安全檢測領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，但是在如何開發(fā)高活性單克隆抗體方面還有很多技術(shù)問題有待于解決,需要研究者針對每個關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行深入研究。

（江南大學(xué)圖書館 張群）