張 莘，郭曉敏，常國(guó)斌，朱鵬飛，徐 璐，仇玲玲，張 揚(yáng)，徐 琪，陳國(guó)宏

(揚(yáng)州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009)

雞NLRC5啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列的初步研究

張 莘，郭曉敏，常國(guó)斌*，朱鵬飛，徐 璐，仇玲玲，張 揚(yáng)，徐 琪，陳國(guó)宏

(揚(yáng)州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009)

為了探討NLRC5啟動(dòng)子的潛在調(diào)控機(jī)制，將NLRC5基因啟動(dòng)子系列缺失片段插入到pGL3-basic載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞系。通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)尋找核心調(diào)控區(qū)，然后用目標(biāo)捕獲測(cè)序檢測(cè)27個(gè)雞品種的NLRC5核心啟動(dòng)子區(qū)的SNPs，并利用TRANSFAC，JASPAR 和 MethPrimer預(yù)測(cè)該區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)和CpG島。結(jié)果顯示，NLRC5啟動(dòng)子有2個(gè)核心區(qū)域，分別是1—617和1448—2108。第一個(gè)核心區(qū)域內(nèi)存在3個(gè)SNPs，其中SNP1影響轉(zhuǎn)錄因子Hic1的結(jié)合序列，但SNPs對(duì)CpG島不產(chǎn)生影響，表明NLRC5基因的啟動(dòng)子區(qū)的調(diào)控可能受不同因素的影響，但SNPs并不在甲基化的水平上影響啟動(dòng)子的活性。

雞；NLRC5啟動(dòng)子；SNPs；轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)；CpG島

先天免疫和適應(yīng)性免疫是動(dòng)物宿主防御病毒、細(xì)菌和寄生蟲等病原體的2種免疫防御形式，多種模式識(shí)別受體識(shí)別病原體進(jìn)而激活相應(yīng)的免疫反應(yīng)[1-2]來(lái)進(jìn)行防御。目前，已發(fā)現(xiàn)4種模式識(shí)別受體家族，分別是 TLRs(Toll-like receptors)、CLRs(C-type lectin receptors)、RLRs(RIG-I-like receptors) 和 NLRs(NOD-like receptors)[1，3]。NLRC5蛋白屬于NLR家族[4-5]，包含N端CARD、中心NACHT、C端LRRs 3個(gè)結(jié)構(gòu)域。文獻(xiàn)報(bào)道NLRC5表達(dá)于多種細(xì)胞和組織，免疫組織和器官表達(dá)水平較高[3,6-7]。有大量研究表明，NLRC5在先天免疫和適應(yīng)性免疫中都發(fā)揮著重要的作用，但本身的調(diào)控機(jī)制還不清楚，而啟動(dòng)子的調(diào)控在轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)中占據(jù)著至關(guān)重要的地位，國(guó)內(nèi)關(guān)于NLRC5啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)和調(diào)控等的研究較少，本研究克隆了NLRC5的啟動(dòng)子區(qū)，即起始密碼子前4 372 bp，并將不同長(zhǎng)度的啟動(dòng)子片段插入pGL3-basic載體中構(gòu)建系列缺失載體，轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞，利用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)來(lái)反映不同長(zhǎng)度啟動(dòng)子片段的活性來(lái)確定核心區(qū)域，檢測(cè)核心區(qū)域內(nèi)SNPs，并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)和CpG島預(yù)測(cè)，以期通過(guò)對(duì)NLRC5啟動(dòng)子區(qū)的初步分析，為NLRC5調(diào)控等提供信息和參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物和細(xì)胞系

本研究使用的細(xì)胞系和27個(gè)雞品種分別是：DF-1細(xì)胞系、紅色原雞(RJ)、茶花雞(CH)、藏雞(ZC)、白耳雞(BE)、仙居雞(XJ)、綠殼蛋雞(GS)、太湖雞(TH)、如皋雞(RG)、蕭山雞(XC)、北京油雞(BY)、固始雞(GS)、狼山雞(LS)、大骨雞(BB)、青腳麻雞(QJ)、廣西黃雞(GY)、文昌雞(WC)、絲羽烏骨雞(SC)、雪山草雞(XS)、鹿苑雞(LY)、溧陽(yáng)雞(LC)、斗雞(DJ)、斗雞與羅斯雞雜交后代(DR)、來(lái)航雞(LH)、羅斯雞(RC)、AA雞(AA)、安卡雞(AK)、隱形白洛克(RW)。其中DF-1細(xì)胞購(gòu)自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，用添加10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。27個(gè)雞品種中XJ、CH、LY、BE、ZC、GS、BB、DJ、LS、SC、XC、BY等12個(gè)地方雞品種來(lái)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院家禽科學(xué)研究所國(guó)家地方禽種資源基因庫(kù)，RJ亞種采自云南省野生動(dòng)物救護(hù)中心，另外14個(gè)雞品種來(lái)自揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院遺傳資源實(shí)驗(yàn)室禽種資源基因庫(kù)。

1.1.2 主要試劑

SYBR?PreniExTaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)、Prime STAR?GXL DNA Polymerase、MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit、DNA Ligation Kit Ver.2.1、DH5α感受態(tài)細(xì)胞購(gòu)自TaKaRa公司；雙熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3-basic和pRL-SV40、FuGENE?HD Transfection Reagent、Dual-Luciferase?Reporter Assay System購(gòu)自Promega公司；無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒、FastQuant RT Kit、離心柱型普通DNA產(chǎn)物純化試劑盒、質(zhì)粒小提試劑盒購(gòu)自天根公司；胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基、胰酶來(lái)自Hyclone；限制性內(nèi)切酶KpnⅠ和NheⅠ來(lái)自Thermo。

1.1.3 主要儀器

AG-2233Mini式小型高速離心機(jī)和普通PCR儀為Eppendorf公司，Nano Drop 1000分光光度計(jì)、CO2培養(yǎng)箱來(lái)自Thermo公司，凝膠成像系統(tǒng)Gel Doc TM EZ imager、自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀購(gòu)自BIO-RAD，DK-600 恒溫水槽和隔水式恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)自上海精宏，還有7500熒光定量PCR儀(ABI)、AllegraTMX-22R離心機(jī)(Beckman)、超低溫冰箱(海爾)、恒溫振蕩器(培英)、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)(北京六一)、IX71 熒光倒置顯微鏡(OLYMPUS)、Synergy 2 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀(Bio Tek)、SW-CJ-1F型無(wú)菌超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司)。

1.2 DNA提取

每個(gè)雞品種收集10個(gè)樣本，翅靜脈采血1 mL，置于盛有0.1 mL肝素鈉抗凝劑的2 mL離心管中用于提取基因組DNA，選擇完整性好(無(wú)拖尾現(xiàn)象)，D260/D280介于1.8～2.0之間的DNA樣品稀釋至50 ng·μL-1。

1.3 系列缺失表達(dá)載體的構(gòu)建

根據(jù)GenBank上紅色原雞NLRC5基因序列(Gene ID: 100857413)，采用系統(tǒng)缺失的方法設(shè)計(jì)引物(表1)，運(yùn)用PCR技術(shù)擴(kuò)增NLRC5啟動(dòng)子，使用KpnⅠ和NheⅠ限制性內(nèi)切酶雙酶切PCR純化產(chǎn)物和pGL3-Basic質(zhì)粒，切膠回收后進(jìn)行連接，然后轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)菌液PCR、酶切、測(cè)序鑒定正確后，無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒提取，-20 ℃保存、備用。

將構(gòu)建的系列缺失表達(dá)載體轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞以5×105的密度接種在24孔板中，待細(xì)胞完全貼壁生長(zhǎng)至80%融合度時(shí)，參照FuGENE?HD Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑的使用說(shuō)明書，分別將各目的質(zhì)粒與內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中。24 h后檢測(cè)其雙熒光素酶活性。

表1 NLRC5啟動(dòng)子系列缺失表達(dá)載體構(gòu)建引物

Table 1 Primers for deletion plasmids construction of chickenNLRC5 promoter

名稱Name引物序列Primersequence(5'-3')產(chǎn)物Product/bp作用FunctionP1-FGGGGTACCATGAGAGGAAGTGCAAGTATCTGTTCAGGCAGCAGG4372構(gòu)建P1ConstructingP1P1-RCGGCTAGCTGCTGTGTGGTCAGCCTCCCTTCAGTCGP2-FGGGGTACCGCGGCGCCGCGCTTTCACTTTTG3756構(gòu)建P2ConstructingP2P2-RCGGCTAGCTTGCTGTGTGGTCAGCCTCCCTTCAGTCP3-FGGGGTACCGAACCCCCATCCACCCTCTGTGG2925構(gòu)建P3ConstructingP3P3-RCGGCTAGCTTGCTGTGTGGTCAGCCTCCCTTCP4-FGGGGTACCAGCAGTAAGTTGTGAATTCATGAGAGAGGACG2265構(gòu)建P4ConstructingP4P4-RCGGCTAGCTTGCTGTGTGGTCAGCCTCCCTTC

下劃線為酶切位點(diǎn)；KpnⅠ識(shí)別序列GGTACC，NheⅠ識(shí)別序列GCTAGC。

Underline indicates restriction enzyme recognition sites;KpnⅠrecognizes GGTACC;NheⅠrecognizes GCTAGC.

1.4 SNP、轉(zhuǎn)錄因子及CpG島檢測(cè)

運(yùn)用目標(biāo)捕獲測(cè)序檢測(cè)27個(gè)雞品種NLRC5啟動(dòng)子區(qū)的SNPs。利用在線軟件TRANSFAC和JASPAR對(duì)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，并運(yùn)用MethPrimer預(yù)測(cè)目標(biāo)序列CpG島(GC含量大于50%，Obs/Exp比值>0.6和CpG島范圍大于100 bp為判定標(biāo)準(zhǔn))。

1.5 數(shù)據(jù)分析

對(duì)所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0軟件(SPSS， Chicago， IL， USA)進(jìn)行分析。用鄧肯氏法進(jìn)行多重比較，DNAstar軟件比對(duì)DNA測(cè)序結(jié)果。利用Microsoft Excel 2010對(duì)以上分析所得數(shù)據(jù)進(jìn)行整理歸納。

2 結(jié)果與分析

2.1 系列缺失載體雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

為了尋找NLRC5啟動(dòng)子的核心區(qū)域，構(gòu)建了4個(gè)缺失載體，經(jīng)酶KpnⅠ單酶切、酶KpnⅠ和NheⅠ雙酶切后瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖1，單酶切后條帶單一，雙酶切后得到線性載體片段和NLRC5啟動(dòng)子目的片段，大小和設(shè)計(jì)預(yù)期相同，載體構(gòu)建正確，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

上述4個(gè)缺失載體的雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖2)顯示片段P1的活性是片段P3的83%，并且兩者的活性都大于片段P2；片段P4的活性幾乎為0，說(shuō)明刪除1—617和1 448—2 109后，活性顯著下降，而刪除617—1 448后活性上升，2 109—4 372幾乎沒(méi)有啟動(dòng)子活性，初步推測(cè)NLRC5啟動(dòng)子存在2個(gè)活性區(qū)域，分別為1—617和1 448—2 109。

2.2 不同雞種的SNP

本研究利用目標(biāo)捕獲測(cè)序檢測(cè)27個(gè)雞種NLRC5啟動(dòng)子區(qū)SNPs，將測(cè)序結(jié)果中reads超過(guò)50%的低質(zhì)量堿基去除[quality value≤5 (E)]后的結(jié)果如表2、表3所示，共發(fā)現(xiàn)3個(gè)SNPs位點(diǎn)，其中SNP1位點(diǎn)和NCBI上dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)不匹配。表3顯示了各雞種NLRC5基因啟動(dòng)子SNPs分布情況，27個(gè)雞種中仙居雞、大骨雞、文昌雞、絲羽烏骨雞、安卡雞、隱形白洛克6種雞種沒(méi)有SNPs，其他雞種中SNP1出現(xiàn)的比例最高，SNP3僅存在于茶花雞、太湖雞、斗雞以及斗雞和羅斯雞雜交后代中。除茶花雞和太湖雞中含有3個(gè)SNPs外，其余雞種SNPs大致相同。這些SNPs與NLRC5的表達(dá)調(diào)控和雞的性狀之間的關(guān)系還需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

M為DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；P1～P4為4個(gè)缺失載體Letter M represented DNA relative molecular mass standard; Letter P1 to P4 represented 4 deletion plasmids圖1 雞NLRC5啟動(dòng)子系列缺失載體的單酶切(A)和雙酶切(B)瓊脂電泳結(jié)果Fig.1 Single and double restriction enzyme digestion products of plasmids of NLRC5 promoter

左邊顯示插入pGL3-basic載體的不同區(qū)域啟動(dòng)子片段，右邊顯示缺失載體的相對(duì)熒光素酶活性，數(shù)據(jù)表示為3個(gè)重復(fù)的平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，不同的小寫字母表示數(shù)據(jù)間差異顯著(P<0.05)The left showed the different length promoter fragments inserted into pGL3-basic vector. The right showed the relative luciferase expression activities of corresponding constructs. Data were expressed as mean±SD of 3 repeats. Different lowercase letters represented significant difference(P<0.05)圖2 雞NLRC5啟動(dòng)子系列缺失載體的活性Fig.2 Activity of different length of NLRC5 promoter of chicken

2.3NLRC5啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)

本研究利用在線軟件TRANSFAC和JASPAR對(duì)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)SNP1處于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子Hic1(圖3)，基序?yàn)镚GGTGGCAT，此處結(jié)合序列發(fā)生變化，藏雞、仙居雞、固始雞、狼山雞、大骨雞、青腳麻雞、文昌雞、絲羽烏骨雞、斗雞、安卡雞、隱形白洛克沒(méi)有這個(gè)SNP，NLRC5啟動(dòng)子區(qū)SNPs通過(guò)影響轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)來(lái)影響啟動(dòng)子的活性，從而影響基因的表達(dá)調(diào)控，使機(jī)體表現(xiàn)不同的抗病力。

2.4NLRC5啟動(dòng)子區(qū)CpG島預(yù)測(cè)

本研究利用MethPrimer預(yù)測(cè)1-617序列CpG島(圖4)，發(fā)現(xiàn)存在1個(gè)CpG島，其范圍是312～562 bp，大小為251 bp，有2個(gè)SNP位點(diǎn)(SNP2和SNP3)位于CpG島內(nèi)，將突變后的序列重新提交，發(fā)現(xiàn)CpG島數(shù)量和長(zhǎng)度均未發(fā)生改變。推斷SNP位點(diǎn)可能不通過(guò)影響啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平而調(diào)控基因表達(dá)。

表2 NLRC5啟動(dòng)子第一個(gè)核心區(qū)域SNP信息

Table 2 SNP in the first core region ofNLRC5 promoter

多態(tài)位點(diǎn)信息PolymorphicsiteinformationSNP1SNP2SNP3位點(diǎn)坐標(biāo)Location/bp217408551突變MutationA/GT/YG/R數(shù)據(jù)庫(kù)一致性Databaseconsistency011

0，不匹配；1，匹配；簡(jiǎn)并堿基Y(C+T)、R(A+G)。

0， Mismatching; 1， Match; Y (C+T); R (A+G).

表3 不同雞種SNP分布情況

Table 3 SNP status in different chicken breeds

品種BreedRJCHZCBEXJGSTHRGXCBYGSLSBBQJGYWCSCXSLYLCDJDRLHRCAAAKRW總計(jì)TotalSNP1++++++++++++++++16SNP2++++++++8SNP3++++4總計(jì)Total13110231111101100111121210028

+，存在；空白，不存在。

+， Existence; Blank， Non-existent.

圖3 NLRC5啟動(dòng)子第一個(gè)核心區(qū)域的示意圖Fig.3 The first core region of NLRC5 promoter

圖4 SNP2和SNP3突變前、后NLRC5啟動(dòng)子第一個(gè)核心區(qū)域CpG島預(yù)測(cè)Fig.4 CpG islands predicted by MethPrimer in NLRC5 promoter

3 討論

NLRC5可調(diào)控NF-κB(nuclear factor-k-gene binding)[8-9]、I型干擾素[6，10]、炎性體信號(hào)路徑及MHC-I(major histocompatibility complex class I)基因表達(dá)[3，11-12]， 表明其在免疫過(guò)程中有重要作用。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NLRC5啟動(dòng)子具有1—617和1 448—2 108兩個(gè)核心區(qū)域，本研究主要研究NLRC5啟動(dòng)子1—617核心區(qū)域，通過(guò)對(duì)27個(gè)雞種的測(cè)序發(fā)現(xiàn)了3個(gè)SNPs位點(diǎn)，SNP3位點(diǎn)只在茶花雞、太湖雞、斗雞以及斗雞和羅斯雞雜交后代4個(gè)雞種中檢測(cè)到，仙居雞、大骨雞、文昌雞、絲羽烏骨雞、安卡雞、隱形白洛克6種雞中未發(fā)現(xiàn)SNPs，造成這種現(xiàn)象的可能原因是：雞種受外界環(huán)境和遺傳條件的影響，不同類型雞種有不同的表現(xiàn)型，從而導(dǎo)致雞種的抗病力不同，所以不同類型雞種的SNPs位點(diǎn)也不相同。到目前為止，大量文獻(xiàn)報(bào)道了很多基因的啟動(dòng)子區(qū)域呈現(xiàn)相對(duì)豐富的多態(tài)性，并使基因的表達(dá)調(diào)控發(fā)生改變，從而對(duì)動(dòng)物的多種性狀產(chǎn)生影響[13-18]，但是這些SNPs位點(diǎn)是否影響雞種的抗病力需要進(jìn)一步作缺失來(lái)縮短核心啟動(dòng)子區(qū)，擴(kuò)大樣本量來(lái)尋找核心啟動(dòng)子區(qū)的不同單倍型來(lái)驗(yàn)證。

有報(bào)道稱Hic1是抑癌候選基因，在正常組織中廣泛表達(dá)，但在多種腫瘤中表達(dá)缺失[14]。一系列的研究表明Hic1是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)及凋亡關(guān)鍵基因的中心轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，抑制Hedgehog信號(hào)通路[18]和調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路[16]，并且能夠調(diào)節(jié)phrin-A1基因的直接轉(zhuǎn)錄，從而抑制上皮腫瘤的形成[17]，所以Hic1應(yīng)該與機(jī)體的免疫有關(guān)。有研究表明，NLRC5可正調(diào)控Wnt信號(hào)通路，進(jìn)而誘導(dǎo)下游靶基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，從而影響肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲特性[19]。由此可以看出，Hic1和NLRC5之間可能存在一定聯(lián)系。本研究預(yù)測(cè)到NLRC5啟動(dòng)子存在該轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，可能影響NLRC5的轉(zhuǎn)錄。另外，SNP1位點(diǎn)位于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)影響轉(zhuǎn)錄因子與調(diào)控序列的結(jié)合來(lái)調(diào)控基因表達(dá)，說(shuō)明NLRC5啟動(dòng)子區(qū)SNPs對(duì)啟動(dòng)子調(diào)控有影響。有文獻(xiàn)報(bào)道，DNA甲基化可影響靶基因表達(dá)水平[20]，本研究預(yù)測(cè)到NLRC5啟動(dòng)子區(qū)有范圍較近的1個(gè)CpG島，并且發(fā)現(xiàn)有2個(gè)SNPs位點(diǎn)處于預(yù)測(cè)的CpG島區(qū)，說(shuō)明DNA甲基化水平對(duì)NLRC5表達(dá)調(diào)控有重要作用。但是SNPs不對(duì)CpG島產(chǎn)生影響，該原因可能是本研究所采用的序列位于核心啟動(dòng)子區(qū)，其保守性較強(qiáng)，SNPs位點(diǎn)可能不在甲基化水平上影響NLRC5的表達(dá)水平，NLRC5啟動(dòng)子功能和NLRC5的調(diào)控機(jī)制還需進(jìn)一步研究探討。

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(責(zé)任編輯 盧福莊)

Preliminary study on transcriptional regulation sequence of chickenNLRC5 promoter

ZHANG Xin， GUO Xiaomin， CHANG Guobin*， ZHU Pengfei， XU Lu， QIU Lingling， ZHANG Yang， XU Qi， CHEN Guohong

(CollegeofAnimalScienceandTechnology，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China)

In order to explore the potential regulation mechanism of chickenNLRC5 promoter， deletion fragments of chickenNLRC5 promoter was cloned and inserted into pGL3-basic vector to construct recombinant plasmids for transfecting DF1 cells. Dual-luciferase assay was carried out to find the core regulation region. Then target sequence capture assay was used to detect SNPs in the core region ofNLRC5 promoter of 27 chicken breeds. Finally， transcription factor binding sites and CpG islands were predicted by using online softwares TRANSFAC， JASPAR and MethPrimer. The results showed thatNLRC5 promoter had 2 core regions， 1 to 617 and 1 448 to 2 108， respectively. There were 3 SNPs loci totally in the first core region in all breeds. SNP1 was found to influence the transcription factor Hic1 binding site. However， SNPs in the first core region did not affect CpG island. The results above suggested thatNLRC5 promoter activity might be regulated by different factors， but SNPs didn’t influence the promoter activity at methylation level.

chicken;NLRC5 promoter; SNPs; transcription factor binding site; CpG island

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.03.07

2016-10-01

國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2015BAD03B03)；江蘇省六大人才高峰項(xiàng)目(2015-NY-019)

張莘(1995—)，女，江蘇邳州人，本科在讀，E-mail: 768655881@qq.com

*通訊作者，常國(guó)斌，E-mail: passioncgb@163.com

S852.4

A

1004-1524(2017)03-0395-06

浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2017，29(3): 395-400

http://www.zjnyxb.cn

張莘，郭曉敏，常國(guó)斌，等. 雞NLRC5啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列的初步研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，29(3): 395-400.