艾秀清，董曉霞，張銀華，木妮熱·木沙江(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊 830011))

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乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)患者癌組織中Survivin、MMP-9的表達(dá)變化及意義

艾秀清，董曉霞，張銀華，木妮熱·木沙江
(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，烏魯木齊 830011))

目的 觀察乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)患者癌組織中Survivin、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 收集乳腺癌經(jīng)治療后再次復(fù)發(fā)的患者73例組織標(biāo)本，采用免疫組化SP法檢測73例患者原發(fā)腫瘤組織及復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)情況，并分析Survivin、MMP-9表達(dá)變化對患者生存情況的影響。結(jié)果 原發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性率分別為72.60%(53/73)、69.86%(51/73)，復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性率分別為65.75%(48/73)、58.90%(43/73)，原發(fā)腫瘤組織與復(fù)發(fā)腫瘤組織Survivin及MMP-9表達(dá)陽性率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。在原發(fā)性腫瘤與復(fù)發(fā)性腫瘤組織中Survivin表達(dá)均陽性31例(42.47%)、均陰性3例(4.11%)、從陽性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?2例(30.14%)、從陰性轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃?7例(23.29%)；在原發(fā)性腫瘤與復(fù)發(fā)性腫瘤組織中MMP-9表達(dá)均陽性26例(35.62%)、均陰性5例(6.86%)、從陽性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?5例(34.25%)、從陰性轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃?7例(23.29%)。復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin表達(dá)陽性患者1年、3年、5年生存率分別為91.78%、89.04%、68.49%，Survivin表達(dá)陰性患者1年、3年、5年生存率分別為94.52%、90.41%、78.08%，Survivin表達(dá)陰性患者生存情況優(yōu)于Survivin表達(dá)陽性患者(χ2=4.752，P<0.05)；復(fù)發(fā)腫瘤組織中MMP-9表達(dá)陽性患者1年、3年、5年生存率分別為94.52%、67.12%、52.05%，MMP-9表達(dá)陰性患者1年、3年、5年生存率分別為100.00%、89.04%、82.19%，MMP-9表達(dá)陰性患者生存情況優(yōu)于MMP-9表達(dá)陽性患者(χ2=8.062，P<0.05)。結(jié)論 乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)患者復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)與原發(fā)腫瘤組織比較,陽性可轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?，陰性可轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃?復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性與患者的生存預(yù)后差相關(guān)。

乳腺癌；局部復(fù)發(fā)；Survivin蛋白；基質(zhì)金屬蛋白酶9

乳腺癌近年發(fā)病率呈逐年上升且年輕化趨勢[1]。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與的生理過程，其中凋亡抑制基因在乳腺癌發(fā)病中起重要作用，Survivin作為一種具有特殊結(jié)構(gòu)的哺乳類凋亡抑制基因，與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。而金屬基質(zhì)蛋白酶9(MMP-9)則與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]。目前針對乳腺癌Survivin、MMP-9表達(dá)的研究主要集中于與患者病理特征的比較，而關(guān)于乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)患者瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)的研究鮮見報(bào)道。本研究觀察了73例乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)患者瘤組織中Survivin、MMP-9的表達(dá)變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2009年4月～2011年4月新疆腫瘤醫(yī)院收治的乳腺癌經(jīng)治療后再次復(fù)發(fā)的患者73例作為研究對象，年齡31～78(44.37±7.84)歲。均經(jīng)病理檢查確診為乳腺癌，且病理學(xué)確認(rèn)為乳腺癌局部復(fù)發(fā)，患者初診時(shí)均采取了手術(shù)治療方案；排除合并第二原發(fā)癌患者及臨床資料不完整患者。原位腫瘤位于左側(cè)40例、右側(cè)33例；初診時(shí)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例、出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例；TNM分期為Ⅰ期22例、Ⅱ期37例、Ⅲ期12例、Ⅳ期2例?；颊咦栽负炇鹬橥鈺?，且標(biāo)本采集符合醫(yī)院倫理學(xué)相關(guān)規(guī)定。采用門診隨訪或電話隨訪方式，從患者原發(fā)腫瘤手術(shù)時(shí)間開始計(jì)算患者的生存時(shí)間，以患者死亡作為隨訪終點(diǎn)，隨訪截止日期為2016年5月31日。隨訪包括乳腺B超、胸片及乳腺相關(guān)腫瘤抗原等，確定腫瘤進(jìn)展情況及死亡時(shí)間。

1.2 瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)檢測 采用免疫組化SP法檢測患者原發(fā)腫瘤組織及復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)。腫瘤組織經(jīng)石蠟包埋后常規(guī)連續(xù)切片，將切片經(jīng)10%中性二甲苯脫蠟固定后常規(guī)脫水處理，經(jīng)浸蠟、鋪片、脫蠟后使用HE染色，然后加入Survivin或MMP-9單克隆抗體。采用DAB顯色，使用PBS代替一抗作為陰性對照，使用已知的Survivin、MMP-9表達(dá)陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照。結(jié)果由我院病理科兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立評估，隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野內(nèi)計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，采用雙評分半定量分析法[4]，根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比及顯色深淺進(jìn)行雙評分。Survivin、MMP-9免疫組化陽性產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃褐色顆粒狀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier生存曲線進(jìn)行生存分析，采用Log-rank檢驗(yàn)患者生存率。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9的表達(dá)變化 原發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性率分別為72.60%(53/73)、69.86%(51/73)，復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性率分別為65.75%(48/73)、58.90%(43/73)。原發(fā)腫瘤組織與復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin及MMP-9表達(dá)陽性率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。Survivin表達(dá)從原發(fā)性腫瘤組織陽性轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)發(fā)性腫瘤組織陰性22例(30.14%)，從原發(fā)性腫瘤組織陰性轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)發(fā)性腫瘤組織陽性17例(30.14%)；MMP-9表達(dá)從原發(fā)性腫瘤組織陽性轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)發(fā)性腫瘤組織陰性25例(34.25%)，從原發(fā)性腫瘤組織陰性轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)發(fā)性腫瘤組織陽性17例(23.29%)。

2.2 復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)對患者生存的影響 復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin表達(dá)陽性患者1年、3年、5年生存率分別為91.78%、89.04%、68.49%，Survivin表達(dá)陰性患者1年、3年、5年生存率分別為94.52%、90.41%、78.08%，Survivin表達(dá)陰性患者生存情況顯著優(yōu)于Survivin表達(dá)陽性患者(χ2=4.752，P<0.05)；復(fù)發(fā)腫瘤組織中MMP-9表達(dá)陽性患者1年、3年、5年生存率分別為94.52%、67.12%、52.05%，MMP-9表達(dá)陰性患者1年、3年、5年生存率分別為100.00%、89.04%、82.19%，MMP-9表達(dá)陰性患者生存情況顯著優(yōu)于MMP-9表達(dá)陽性患者(χ2=8.062，P<0.05)。

3 討論

乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多步驟、多階段的復(fù)雜病理過程，在此過程中，細(xì)胞凋亡起負(fù)調(diào)控作用，若細(xì)胞凋亡基因表達(dá)受到抑制，將導(dǎo)致細(xì)胞躲過程序性死亡而發(fā)生異常增殖，最終引起腫瘤發(fā)生[5,6]。Survivin作為目前發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的一種凋亡抑制因子，其不僅抑制細(xì)胞凋亡，同時(shí)亦參與到對細(xì)胞周期調(diào)控及新生血管形成過程中[7,8]。研究[9，10]顯示，Survivin高表達(dá)能有效抑制細(xì)胞多途徑p53、Casepase、Fas等誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)在調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂過程中發(fā)揮重要作用，如胞質(zhì)的分裂、卵裂溝形成及微管的聚合，在腫瘤細(xì)胞中，過度的Survivin表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞跳過細(xì)胞周期G2/M期檢查點(diǎn)，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生異常有絲分裂，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，從而使腫瘤細(xì)胞逃避凋亡。此外，有學(xué)者研究顯示，Survivin與腫瘤血管的形成有密切聯(lián)系，Survivin異常增高可促進(jìn)VEGF所誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖及毛細(xì)血管網(wǎng)形成，豐富的血供可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移[11]。腫瘤細(xì)胞在發(fā)生侵襲及轉(zhuǎn)移過程中，必須破壞細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，而在參與破壞ECM的酶類中基質(zhì)金屬蛋白酶類(MMPs)起主要作用，其中MMP-9與腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移最為密切[12]。MMP-9高表達(dá)能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞破壞ECM能力增強(qiáng)，從而促使患者發(fā)生早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，因此MMP-9可作為乳腺癌惡性程度及預(yù)后判斷的一個(gè)重要指標(biāo)[13]。

本研究結(jié)果顯示，原發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性率分別為72.60%、69.86%，復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性率分別為65.75%、58.90%，原發(fā)腫瘤組織與復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin及MMP-9表達(dá)陽性率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而在上述患者中，其中一部分患者復(fù)發(fā)腫瘤組織中表達(dá)情況較原發(fā)腫瘤組織中發(fā)生了改變，在原發(fā)性腫瘤與復(fù)發(fā)性腫瘤組織中Survivin表達(dá)均陽性31例(42.47%)、均陰性3例(4.11%)、從陽性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?2例(30.14%)、從陰性轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃?7例(23.29%)；在原發(fā)性腫瘤與復(fù)發(fā)性腫瘤組織中MMP-9表達(dá)均陽性26例(35.62%)、均陰性5例(6.86%)、從陽性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?5例(34.25%)、從陰性轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃?7例(23.29%)。表明復(fù)發(fā)腫瘤組織與原發(fā)腫瘤組織Survivin、MMP-9表達(dá)并不是一成不變的。此外，本研究對比分析復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)情況對患者生存的影響，結(jié)果顯示，Survivin及MMP-9表達(dá)陰性患者生存情況優(yōu)于Survivin表達(dá)陽性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此與臨床研究結(jié)果相似，可能是由于Survivin、MMP-9表達(dá)能從一定程度上反映患者腫瘤病情，從而與患者的生存預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，乳腺癌術(shù)后局部復(fù)發(fā)患者其復(fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)與原發(fā)腫瘤組織比較,陽性可轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?，陰性可轉(zhuǎn)變?yōu)殛栃?；?fù)發(fā)腫瘤組織中Survivin、MMP-9表達(dá)陽性與患者的生存預(yù)后差相關(guān)。

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Expression and significance of survivin and MMP-9 in patients with local recurrence of breast cancer after operation

AIXiuqing,DONGXiaoxia,ZHANGYinhua,MunireMushajiang

(CancerHosptialofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Objective To observe the expression changes of survivin and matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) in the cancer tissues of patients with local recurrence of breast cancer after surgery and to explore its significance. Methods Seventy-three cases of tissue specimens from patients with breast cancer recurrence after treatment were collected, and the expression of survivin and MMP-9 in the primary tumor tissues and recurrent tumor tissues were detected by immunohistochemical SP method. Furthermore, we analyzed the effects of survivin and MMP-9 expression changes on the survival condition of patients.Whether the changes of Survivin and MMP-9 expression can effect on survival was also analyzed. Results The positive expression rates of survivin and MMP-9 were 72.60% (53/73) and 69.86% (51/73), respectively in the primary tumor tissues, versus 65.75% (48/73) and 58.90% (43/73) in the recurrent tumor tissues. There was no statistically significant difference in the positive expression rates between them (bothP>0.05). In the primary and recurrent tumor tissues, survivin expression was both positive in 31 cases (42.47%), both negative in 3 cases (4.11%), 22 cases (30.14%) changed from positive to negative, and 17 cases (23.29%) changed from negative to positive. In the primary and recurrent tumor tissues, MMP-9 expression was both positive in 26 cases (35.62%), both negative in 5 cases (6.86%), 25 cases (34.25%) changed from positive to negative, and 17 cases (23.29%) changed from negative to positive. The one-, three-, and five-year survival rates were 91.78%, 89.04%, and 68.49%, respectively, in patients with survivin positive recurrent tumor tissues, versus 94.52%, 90.41%, and 78.08% in in patients with survivin negative recurrent tumor tissues.The survival condition of patients with survivin negative recurrent tumor tissues was better than that of patients with survivin positive (χ2=4.752,P<0.05). The one-, three-, and five-year survival rates were 94.52%, 67.12%, and 52.05%, respectively, in patients with MMP-9 positive recurrent tumor tissues, versus 100%, 89.04%, and 82.19% in patients with MMP-9 negative recurrent tumor tissues. The survival condition of patients with MMP-9 negative recurrent tumor tissues was better than that of patients with MMP-9 positive (χ2=8.062,P<0.05).Conclusions The expression of survivin and MMP-9 in primary and local recurrent tissues of patients with breast cancer can be transformed between positive and negative. The positive expression of survivin and MMP-9 in tumor tissues of recurrence could be correlated with the poor prognosis.

breast carcinoma; local recurrence; survivin protein; matrix metalloproteinase 9

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金聯(lián)合基金資助項(xiàng)目(2016D01C346)。

艾秀清(1975-)，女，副主任醫(yī)師，主要研究方向?yàn)槿橄侔┓派渲委?。E-mail：maojiayue11@163．com

木妮熱.木沙江(1962-)，女，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)槿橄侔┓派渲委煛-mail：muni6@163．com

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.25.006

R737.9

A

1002-266X(2017)25-0020-03

2017-02-10)