徐明堂，張秀智，趙 靜，張淑艷，陳 琛，楊 帆，趙煥芬

介紹一種脂肪染色
——油紅滴染法

徐明堂，張秀智，趙 靜，張淑艷，陳 琛，楊 帆，趙煥芬

脂肪染色；滴染法；浸染法

油紅染色在病理科作為脂肪特殊染色應(yīng)用，傳統(tǒng)方法一般為浸染法。根據(jù)本科室的工作情況，實(shí)驗(yàn)改用滴染法，配成的工作液也可以重復(fù)使用，效果良好，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 1%油紅液：1 g油紅，溶于純異戊醇或無水乙醇100 mL。工作液：取儲(chǔ)存液1 mL(VP管)，加2～3滴蒸餾水，混勻，形成懸濁液，密封，2 000 r/min離心10 min。

1.2 標(biāo)本 常規(guī)冷凍切片，包括甲狀腺組織、膽囊、乳腺組織、子宮、卵巢腫瘤等129例。

1.3 儀器耗材 微波爐(美的家用型MP23C-BF，輸出功率600 W)，密封性良好的染色盒，蓋玻片，水溶性封片膠。

1.4 操作方法 (1)常規(guī)冷凍切片(7 μm厚)。不能當(dāng)日染色的于-20 ℃凍存，凍存不超過5天。(2)染色時(shí)取出切片、恢復(fù)室溫，平放，上滴加工作液離心后的上層液，上封蓋玻片，置入密封的染色盒內(nèi)，計(jì)時(shí)12～13 min。(3)去除蓋玻片，直接自來水浸洗，去除多余染液。(4)滴加蘇木精染液1～2 min，流水浸洗。(5)常規(guī)鹽酸乙醇分化及氨水返藍(lán)。(6)陰干。水溶性封片膠呈膠凍狀，置微波爐最高功率作用5～10 s，由膠凍狀變?yōu)橐簯B(tài)后，封固。

2 結(jié)果

脂肪成分：細(xì)胞內(nèi)中性脂肪呈紅色顆粒，而大的脂肪團(tuán)塊則呈大的紅色團(tuán)塊。在背景上還可能出現(xiàn)一些油紅析出的絮狀物或顆粒，核呈藍(lán)色(圖1、2)。

3 討論

脂肪染色實(shí)際操作、文獻(xiàn)介紹基本上是浸染法，并且在改良的染色方法中，多是降低乙醇的濃度，并且要求染色前過濾[1-3]。本文介紹的滴染法基本上遵循了這種思路，但采用了滴染法，節(jié)省了試劑，可重復(fù)使用，操作簡(jiǎn)便，該方法也可以用以培養(yǎng)爬片細(xì)胞的脂肪染色。

圖1 卵巢腫瘤：A.HE染色；B.油紅O染色，滴染法 圖2 培養(yǎng)細(xì)胞的脂肪染色，細(xì)胞內(nèi)脂肪呈大小不一顆粒，油紅O滴染法

3.1 配制油紅飽和液 脂肪染色的原理是利用了油紅O溶于脂質(zhì)的特點(diǎn)，從溶液中轉(zhuǎn)移到組織的脂肪成分中，使其呈油紅的顏色，該過程是從染液介質(zhì)轉(zhuǎn)移到組織脂肪介質(zhì)的過程，兩種介質(zhì)之間油紅濃度相差越大，則轉(zhuǎn)移滲透速度越快，組織脂肪內(nèi)滲透匯集的油紅量也越多。脂肪內(nèi)油紅量越大，呈色越濃艷，因此制作出乙醇或異戊醇的油紅飽和液，無疑是提高染液中油紅濃度的最佳方法。

用無水乙醇或異戊醇溶解油紅，使之呈完全溶解、游離，并且可做為原液長期保存。制作工作液時(shí)，原液加水，實(shí)際上就是降低乙醇濃度，使油紅溶解度降低，并趨于相應(yīng)乙醇或異戊醇濃度的飽和狀態(tài)。飽和后，多余的油紅將析出；也只有油紅析出了，才標(biāo)志著染液中油紅濃度達(dá)到了飽和狀態(tài)。由于無水乙醇或異戊醇本身也會(huì)溶解組織中脂肪，所以原液中加水，降低其濃度，也降低了其溶脂能力，防止組織中脂肪的溶解，所以原液加水非常必要。但飽和析出的油紅成固體顆粒狀，使染液呈懸濁液狀態(tài)，用這種狀態(tài)的染液做脂肪染色，雖能染出組織中脂肪，但背景會(huì)沉積很多大小不一的油紅顆粒(呈黑色)，如果顆粒太多，就會(huì)影響鏡下結(jié)果觀察。文獻(xiàn)中提出的過濾方法，實(shí)際上就是過濾掉析出的油紅顆粒[4]。

3.2 離心取代過濾及注意事項(xiàng) 如果配制較多的工作液，進(jìn)行過濾是可行的，但量少時(shí)進(jìn)行過濾，實(shí)際效果不佳。而離心取上層液對(duì)配制少量染液也不錯(cuò)。油紅飽和狀態(tài)的工作液，離心時(shí)油紅顆粒沉淀底層，而上層液將是飽和無顆粒油紅液。工作液量少時(shí)，無法進(jìn)行浸染，只適合滴染。但滴染過程中又會(huì)面臨染液揮發(fā)問題。染液揮發(fā)實(shí)際上揮發(fā)的是溶劑：乙醇或異戊醇。本已飽和的油紅液，由于乙醇或異戊醇揮發(fā)，再次析出，將直接沉淀到組織表面，同樣影響結(jié)果觀察。所以阻止染色過程中染液揮發(fā)具有必要性。本科室用蓋玻片封蓋及置封閉的染色盒中，正是基于該認(rèn)識(shí)；如果用95%乙醇滴到盒蓋周邊，封閉效果更好。在用蓋玻片封蓋時(shí)，滴加的染液量要充分些，讓蓋玻片能夠浮在液面上；量少時(shí)會(huì)緊貼在組織表面，不利于染色完畢后移除蓋玻片。

3.3 重復(fù)使用 1～2 mL的工作液，可直接在2 mL的VP管中配制，配制完成或染色剩余者密封，阻止乙醇液或異戊醇揮發(fā)，油紅懸濁液可以保持?jǐn)?shù)日。使用時(shí)仍離心取上層液，進(jìn)行染色，效果無變化。

[1] 王德田, 董建強(qiáng). 實(shí)用現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)[M]. 北京: 中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社, 2012:114-117.

[2] 中華醫(yī)學(xué)會(huì). 臨床技術(shù)操作規(guī)范·病理學(xué)分冊(cè)[M]. 北京: 人民軍醫(yī)出版社, 2004:162-163.

[3] 汪 偉, 張 萍, 鄒玉蓉, 等. 介紹一種改良的腎組織脂肪染色技術(shù)[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2010,26(3):377.

[4] 熊紅梅, 蘭玉華, 邱曉明. 脂肪染色的改良及應(yīng)用[J]. 診斷病理學(xué)雜志, 2012,19(1):72.

時(shí)間：2017-2-27 10:14

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徐明堂，男，副主任技師。Tel: (0311)85988122，E-mail: xmingtang@126.com

R 361.2

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1001-7399(2017)02-0221-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.028

接受日期：2016-10-10