藍(lán) 草，鄒 游，歐陽(yáng)少倫，吳映璇，邵琳智

（廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，廣東廣州 510623）

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評(píng)估

藍(lán) 草，鄒 游，歐陽(yáng)少倫，吳映璇，邵琳智

（廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，廣東廣州 510623）

建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評(píng)估數(shù)學(xué)模型，以甲硝唑?yàn)槔?，分別對(duì)測(cè)量過(guò)程中的樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量等不同來(lái)源的不確定度進(jìn)行分析評(píng)定，計(jì)算得到該方法測(cè)定硝基咪唑類藥物殘留量的相對(duì)合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)曲線定量和儀器定量對(duì)該方法不確定度的貢獻(xiàn)最大。

不確定度；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；硝基咪唑類

硝基咪唑（Nitroimidazoles）類藥物是近年來(lái)廣泛使用的一類抗菌素和抗原蟲(chóng)藥，能抑制細(xì)胞DNA合成、破壞DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)或阻斷其轉(zhuǎn)錄復(fù)制，從而使細(xì)胞死亡，達(dá)到殺菌和控制感染的目的。但是，由于硝基咪唑類藥物含有的硝基雜環(huán)類化合物具有細(xì)胞誘變性，從而導(dǎo)致此類藥物具有致癌和潛在致畸作用，被大多數(shù)國(guó)家列為禁止使用或允許使用但必須嚴(yán)格監(jiān)控的藥物[1]。

試驗(yàn)建立了同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的液質(zhì)聯(lián)用法，并對(duì)分析測(cè)試結(jié)果的不確定度進(jìn)行評(píng)定，以驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性[2]。

測(cè)量不確定度是表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，是度量化學(xué)分析工作結(jié)果的可信度，即期望結(jié)果與分析結(jié)果的相吻合程度，以此來(lái)證明結(jié)果適宜性的有用方法[3]。

測(cè)量不確定度是對(duì)測(cè)量結(jié)果質(zhì)量的定量表征[4]，一個(gè)完整的測(cè)量結(jié)果，除了給出被測(cè)量的最佳估計(jì)值之外，還應(yīng)同時(shí)給出測(cè)量結(jié)果的不確定度[5]。檢測(cè)結(jié)果的不確定度反映了結(jié)果的可靠性，同時(shí)可以反映出檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員的技術(shù)和儀器設(shè)備的水平[6]。試驗(yàn)參考《CNALS-GL06化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》中不確定度的理論依據(jù)，建立了液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)動(dòng)物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評(píng)估數(shù)學(xué)模型，分別對(duì)測(cè)量過(guò)程中的樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量等不同來(lái)源的不確定度進(jìn)行分析評(píng)定，計(jì)算得到該方法測(cè)定硝基咪唑類藥物殘留量的相對(duì)合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

QTRAP5500型四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó)AB質(zhì)譜公司產(chǎn)品；LC-20AD型液相色譜儀（二元高壓梯度輸液泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，電噴霧離子源，Valco二位流路切換閥），島津公司產(chǎn)品；Analyst儀器控制及數(shù)據(jù)處理軟件，AB公司產(chǎn)品；CPA22SD型分析天平、BT 124S型分析天平，Sartorius公司產(chǎn)品；Zymark TurboVapLV吹氮濃縮儀，配有35 mL大號(hào)氮吹濃縮管、16 mL中號(hào)氮吹濃縮管；SiGMA 3-18K型低溫高速離心機(jī)、1-14型高速離心機(jī)；肉類組織搗碎機(jī)；勻漿機(jī)，轉(zhuǎn)速滿足12 000 r/min以上，配備直徑19 mm勻漿刀；MS3 basic型漩渦振蕩器，IKA公司產(chǎn)品；Heidolph型水平振蕩器；固相萃取裝置及真空泵。

1.2 試劑與材料

甲硝唑、羥基甲硝唑、二甲硝咪唑、羥甲基甲硝咪唑和洛硝噠唑等5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度均大于98%，德國(guó)Dr.E公司提供；乙腈、甲醇為HPLC級(jí)，F(xiàn)isher Scientific公司提供；甲酸為專業(yè)分析級(jí)，Merck公司提供；所用試劑除注明外均為分析純；水為超純水；混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱（MCX），60 mg/mL（Waters OasisMCX）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

分別稱取10 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg）硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)品至25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混勻。此儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為400 mg/L，置于-18℃冰箱中保存，保存期1年。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液

分別吸取0.625 mL各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（詳見(jiàn)1.3.1）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此標(biāo)準(zhǔn)中間液質(zhì)量濃度為10.0 mg/L，保存期6個(gè)月。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A

準(zhǔn)確吸取0.250 mL標(biāo)準(zhǔn)中間液（詳見(jiàn)1.3.2）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此標(biāo)準(zhǔn)混合液質(zhì)量濃度為100 μg/L，保存期3個(gè)月。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B

在玻璃試管中準(zhǔn)確加入0.900 mL甲醇溶液和0.100 mL標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A（詳見(jiàn)1.3.3），混勻。此標(biāo)準(zhǔn)混合液質(zhì)量濃度為10.0 μg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.5 同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液

分別稱取10 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg）硝基咪唑類同位素內(nèi)標(biāo)至25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為400 mg/L，置于-18℃冰箱中保存，保存期1年。

1.3.6 同位素內(nèi)標(biāo)中間液

分別吸取0.625 mL各同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（詳見(jiàn)1.3.5）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)中間液質(zhì)量濃度為10.0 mg/L，保存期0.5年。

1.3.7 同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液

準(zhǔn)確吸取0.250 mL同位素內(nèi)標(biāo)中間液（詳見(jiàn)1.3.3）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液質(zhì)量濃度為100 μg/L，保存期3個(gè)月。

1.3.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制見(jiàn)表1，標(biāo)準(zhǔn)曲線配制見(jiàn)表2。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

按表1和表2準(zhǔn)確吸取一定量的硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A（詳見(jiàn)1.3.3）和標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B（詳見(jiàn)1.3.4）、同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液（詳見(jiàn)1.3.7）、定容液于液相色譜進(jìn)樣瓶中，搖勻備用。該標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液即配即用。

1.4 提取與凈化

稱取5 g制備好的樣品（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入100 μL質(zhì)量濃度為100 μg/L的同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液，靜置10~30 min。加入12 mL乙酸乙酯，在勻漿機(jī)中以轉(zhuǎn)速12 000 r/min勻漿30 s，取另1個(gè)50 mL離心管，加入12 mL乙酸乙酯洗滌勻漿刀10 s，不合并。提取液以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至35 mL氮吹濃縮管中，40℃氮吹濃縮至大約剩余2 mL。洗滌液轉(zhuǎn)入前1個(gè)含樣品的離心管中，用玻棒搗碎下層殘?jiān)?，在水平振蕩器上振?0 min，以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min，上清液合并至氮吹濃縮管中，于40℃條件下繼續(xù)吹氮濃縮至干。

向上述已吹干的濃縮管中加入5 mL正己烷，渦旋振蕩1 min溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中。再向氮吹濃縮管中加入5 mL的0.1 mol/L鹽酸溶液，渦旋振蕩1 min，合并至正己烷的離心管中。水平振蕩離心管10 min，以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min，將上層正己烷去除干凈，下清液備用。

將下清液通過(guò)已用3 mL甲醇和3 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液活化的MCX柱中，流速維持在1 mL/min。然后依次用3 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液、2 mL淋洗液（2%甲酸+甲醇，95+5，V/V）淋洗，真空抽干。用3 mL洗脫液（甲醇+水+氨水，80+20+2，V/V）洗脫，流速維持在1 mL/min，真空抽干，收集洗脫液，于40℃條件下氮?dú)獯蹈?。殘?jiān)?.0 mL定容液（5 mmol/L甲酸溶液+甲醇，9+1，V/V）溶解定容，漩渦振蕩器上振蕩2 min，經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定。

2 數(shù)學(xué)模型

式中：X——樣品中被測(cè)組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/kg；

C——回歸方程擬合得到的樣品溶液質(zhì)量濃度，μg/mL；

V——樣液最終定容體積，mL；

m——所稱樣品的質(zhì)量，g；

D——稀釋因子，該方法中D=1；

fr——重現(xiàn)性和偏差影響因子，由方法規(guī)定其值為1；

fQ——液質(zhì)聯(lián)用儀定量校正影響因子，由方法規(guī)定其值為1。

3 不確定度來(lái)源及其評(píng)定

參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-8]，以甲硝唑?yàn)槔?，根?jù)試驗(yàn)方法和數(shù)學(xué)模型分析，測(cè)量的不確定度主要來(lái)源于樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量。

不確定度分量來(lái)源見(jiàn)圖1。

圖1 不確定度分量來(lái)源

3.1 樣品稱量引入的不確定度Umrel

3.1.1 取樣

試驗(yàn)將待測(cè)樣品用組織粉碎機(jī)搗碎，均分成2份，作為試樣，可認(rèn)為樣品是均勻的、代表性充分，由此導(dǎo)致的不確定度忽略不計(jì)。

3.1.2 稱質(zhì)量

精度為0.01 g的天平計(jì)量檢定證書(shū)給出的擴(kuò)展不確定度Um為0.03 g，屬于正態(tài)分布，對(duì)于大約95%的置信水平，包含因子k值為2，稱質(zhì)量5.00 g，按B類評(píng)定，其相對(duì)不確定度為：

3.2 樣品前處理引入的不確定度Uvrel

分析該方法樣品前處理過(guò)程，可以發(fā)現(xiàn)影響試驗(yàn)不確定度的操作主要有3個(gè)，即內(nèi)標(biāo)溶液的加入，標(biāo)準(zhǔn)工作液的加入和樣品的定容，分別對(duì)這3個(gè)來(lái)源進(jìn)行分析。

3.2.1 樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度

樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度主要包括移液槍誤差、實(shí)驗(yàn)室溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。已知200 μL移液槍的容量允差為±1.33 μL，移液槍誤差引入不確定度屬于矩形分布，按B類評(píng)定，

實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時(shí)（K=1.96） 體積變化區(qū)間為±（100×3×0.001 2）= ±0.36 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

故樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的相對(duì)不確定度為：

3.2.2 樣品溶液標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的不確定度

與同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度相同，標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的不確定度包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。省略計(jì)算過(guò)程，得到標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的相對(duì)不確定度為：

3.2.3 樣品溶液定容引起的不確定度

樣品溶液定容引起的不確定度同樣包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。1 000 μL移液槍的容量允差為±4.44 μL，屬于矩形分布，按B類評(píng)定，

實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃，水溶液在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時(shí)（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（1 000×3×0.000 2）=± 0.6 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

樣品溶液定容引起的相對(duì)不確定度為：

故樣品前處理引入的相對(duì)不確定度為：

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引入的不確定度Ucrel

標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引入的不確定度主要包括原始標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合等所帶來(lái)的不確定度，內(nèi)標(biāo)溶液的配制過(guò)程不影響結(jié)果的不確定度。

3.3.1 原始標(biāo)準(zhǔn)物的不確定度

甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)標(biāo)明的純度為98.7%，給出的擴(kuò)展不確定度U為0.5%，屬于正態(tài)分布，對(duì)于大約95%的置信水平，包含因子k值為2。按B類評(píng)定，故甲硝唑原始標(biāo)準(zhǔn)物的不確定度為：

3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程主要分為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制、標(biāo)準(zhǔn)中間液配制、標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制及標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制，分別對(duì)這4個(gè)過(guò)程的不確定度進(jìn)行評(píng)估。

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制引入的不確定度主要包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱質(zhì)量和容量瓶定容所帶來(lái)的不確定度，其中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱質(zhì)量采用的是精度為0.1 mg的天平，其計(jì)量檢定證書(shū)給出的是其擴(kuò)展不確定度Ux為0.05 mg，屬于正態(tài)分布，對(duì)于大約95%的置信水平，包含因子k值為2。

稱質(zhì)量10 mg，按B類評(píng)定，其相對(duì)不確定度為：

采用25.00 mL容量瓶定容，A級(jí)容量允差為±0.000 04 mL，屬于矩形分布，按B類評(píng)定，容量瓶誤差帶來(lái)的不確定度：

容量瓶定容變異系數(shù)為0.000 24，定容至刻度變動(dòng)性引起的不確定度：

u2(2)=容量瓶體積×定容變異系數(shù)

=25.00 mL×0.000 24=0.006 0 mL.

實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時(shí)（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（25.00×3×0.001 2）=±0.09 mL，溫度變化引起的不確定度為：

故25.00 mL容量瓶定容過(guò)程引起的相對(duì)不確定度為：

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制引入的不確定度為：

（2）標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引入的不確定度主要包括容量瓶定容及1 mL移液槍移液625 μL所產(chǎn)生的不確定度，其中25.00 mL容量定容引入的相對(duì)不確定度計(jì)算方法同上；而移液槍移液引入的不確定度主要包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。1 mL移液槍的容量允差為±4.44 μL，屬于矩形分布，按B類評(píng)定，

實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時(shí)（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（625×3×0.001 2）= ±2.25 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

由1 mL移液槍移液625 μL引起的相對(duì)不確定度為：

故標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引起的相對(duì)不確定度為：

（3）標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引入的不確定度同樣包括容量瓶定容及移液槍移液所產(chǎn)生的不確定度，計(jì)算方法同3.3.2（2），結(jié)果如下：

由1 mL移液槍移液250 μL引起的相對(duì)不確定度為：

標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引起的相對(duì)不確定度為：

（4）標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引入的不確定度主要包括1 mL移液槍移液900 μL及200 μL移液槍移液100 μL所產(chǎn)生的不確定度。

1 mL移液槍的容量允差為±4.44 μL，屬于矩形分布，按B類評(píng)定，

實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時(shí)（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（900×3×0.001 2）=±3.24 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

由1 mL移液槍移液900 μL引起的相對(duì)不確定度為：

200 μL移液槍容量允差為±1.33 μL，屬于矩形分布，按B類評(píng)定，

實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時(shí)（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（100×3×0.001 2）= ±0.36 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

由200 μL移液槍移液100 μL引起的相對(duì)不確定度為：

故標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引起的相對(duì)不確定度為：

3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制的不確定度主要是移液槍移液所產(chǎn)生，實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃，水溶液在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時(shí)（k=1.96）吸取900，850，800，700 μL體積變化區(qū)間分別為±0.54 μL，±0.51 μL，±0.48 μL，±0.42 μL，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.28，0.26，0.24，0.21 μL。由此可得1 mL移液槍分別吸取900，850，800，700 μL水溶液時(shí)的相對(duì)不確定度分別為0.29%，0.30%，0.32%，0.37%。同理，已知甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1，可得200 μL移液槍分別吸取200，100，50 μL甲醇溶液時(shí)的相對(duì)不確定度分別為0.42%，0.79%，1.55%。

根據(jù)其移液次數(shù)，可得標(biāo)準(zhǔn)曲線配制引入的相對(duì)不確定度為：

3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

測(cè)定5個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到相應(yīng)的待測(cè)物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，用最小二乘法擬合得到直線方程y=a+bx。

最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)表3。

對(duì)樣品液進(jìn)行15次測(cè)定，由直線方程求得平均質(zhì)量濃度xpred=7.59μg/kg，則xpred的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為yobs

表3 最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果

式中：uXpred——最小二乘法擬合曲線引入的不確定度；

S(y)——標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)物質(zhì)信號(hào)殘差的標(biāo)準(zhǔn)差（貝塞爾公式）；

P——樣品溶液測(cè)定次數(shù)；

n——標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定次數(shù)；

a——截距；

b——斜率；

xpred——樣品溶液中待測(cè)物質(zhì)的含量；

x——標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物質(zhì)含量的測(cè)定平均值；

xpredi——標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)的待測(cè)物質(zhì)含量；

yobs——標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)的待測(cè)物質(zhì)信號(hào)響應(yīng)值；

y——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的待測(cè)物質(zhì)信

號(hào)響應(yīng)回歸值。

其中，a=-0.005 65，b=0.093 2，P=15，n=6，

故標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引起的相對(duì)不確定度為：

3.4 重現(xiàn)性和偏差引入的不確定度

3.4.1 精密度研究

在樣品中添加0.5 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，做6個(gè)平行樣品測(cè)定甲硝唑的回收率。標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

6個(gè)平行樣品中甲硝唑的加標(biāo)回收及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表4。

3.4.2 偏差引入的不確定度

表4 6個(gè)平行樣品中甲硝唑的加標(biāo)回收及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

分析程序的偏差是通過(guò)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部確認(rèn)研究中使用標(biāo)準(zhǔn)添加樣品來(lái)進(jìn)行研究的。將收集的2015年連續(xù)12個(gè)月共36個(gè)批次的標(biāo)準(zhǔn)添加回收。

甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)添加回收結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)添加回收結(jié)果

故重現(xiàn)性和偏差引起的相對(duì)不確定度為：

3.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀定量引入的不確定度urel(fQ)

參照J(rèn)JF 1317—2011液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范用5 μg/L的硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)溶液和10 μg/L的內(nèi)標(biāo)溶液對(duì)液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行校準(zhǔn)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣體積為5 μL。

6次信噪比比值結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 6次信噪比值結(jié)果

試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差S=0.032。其中，測(cè)量重復(fù)性為A類不確定度，其他為B類不確定度。

3.5.1 測(cè)量重復(fù)性u(píng)rA

測(cè)量重復(fù)性可以通過(guò)計(jì)算6次測(cè)量平均值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差得到

式中：z——甲硝唑信噪比測(cè)量結(jié)果與甲硝唑內(nèi)標(biāo)信噪比測(cè)量結(jié)果的比值，為6次測(cè)量的平均值；

zj——第j次測(cè)量的信噪比比值；

j——測(cè)量次數(shù)

s——試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

3.5.2 溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度的相對(duì)不確定度ur(c)

包括前面標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所帶來(lái)的所有誤差、稀釋至5 μg/L移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度，以及內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至10 μg/L移液槍誤差、實(shí)驗(yàn)室溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度，計(jì)算過(guò)程同上，結(jié)果如下：

標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的相對(duì)不確定度為：

內(nèi)標(biāo)溶液加入引起的相對(duì)不確定度為：u9rel=0.79%故溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度的相對(duì)不確定度為：

3.5.3 進(jìn)樣體積的相對(duì)不確定度

采用的進(jìn)樣量V=5 μL，容量允差為±0.015 μL，屬于矩形分布，按B類評(píng)定，

3.5.4 噪聲強(qiáng)度測(cè)量的不確定度ur(Hn)

噪聲強(qiáng)度的A類不確定度已經(jīng)在“測(cè)量重復(fù)性”中計(jì)算，該項(xiàng)為噪聲強(qiáng)度的B類不確定度。在實(shí)際計(jì)算中，將譜圖放大后從軟件上讀取噪聲強(qiáng)度，該項(xiàng)不確定度極小，可忽略。

故液質(zhì)儀器校準(zhǔn)引起的不確定度為：

3.6 相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)擴(kuò)展不確定度

甲硝唑測(cè)量不確定度分量見(jiàn)表7。

表7 甲硝唑測(cè)量不確定度分量

不考慮以上各不確定度的相關(guān)性，可得動(dòng)物源性食品中甲硝唑殘留的相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

在95%置信區(qū)間，取包含因子k=2，甲硝唑的測(cè)定含量相對(duì)擴(kuò)展不確定度為：

通過(guò)同樣的計(jì)算過(guò)程可以得到在95%置信區(qū)間，羥基甲硝唑、二甲硝咪唑、羥甲基甲硝咪唑和洛硝噠唑的相對(duì)擴(kuò)展不確定度分別為11.0%，11.4%，11.2%，11.3%。

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類藥物殘留檢測(cè)方法不確定度各來(lái)源的評(píng)定，可以知道該方法的不確定度主要是由標(biāo)準(zhǔn)曲線定量和液質(zhì)聯(lián)用儀器定量引起，樣品稱量的不確定幾乎可以忽略不計(jì)。因此在實(shí)際工作中，應(yīng)加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程訓(xùn)練，減少試驗(yàn)過(guò)程中人為因素產(chǎn)生的誤差，并定期對(duì)試驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，保持穩(wěn)定的狀態(tài)。在實(shí)際檢測(cè)中，某動(dòng)物源性食品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)量甲硝唑的含量結(jié)果為0.49 μg/kg，經(jīng)考慮其測(cè)量不確定度=0.49 μg/kg×10.6%=0.05 μg/kg，則其結(jié)果應(yīng)表達(dá)為0.49±0.05 μg/kg。

[1]汪紀(jì)倉(cāng)，王大菊，楊自軍，等.硝基咪唑類藥物殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展 [J].中國(guó)獸藥雜志，2007，41（8）：31-33.

[2]魏博娟，吳成業(yè)，錢卓真.液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留量的不確定度評(píng)定 [J].南方水產(chǎn)科學(xué)，2012，8（3）：59-64.

[3]中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-GL06化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南 [S].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2006.

[4]伊魁宇，王猛.標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量檢測(cè)的不確定度來(lái)源分析 [J].廣州化工，2012，40（9）：143-144，153.

[5]卞永東，王德祥，湯勇，等.LC-MS法測(cè)定動(dòng)物源性食品中抗生素殘留的不確定度評(píng)定 [J].福建分析測(cè)試，2011，20（2）：49-54.

[6]吳小松，劉沐雨，曹玉發(fā)，等.HPLC法測(cè)定嬰兒配方奶粉中維生素A含量的不確定度評(píng)定 [J].食品工業(yè)科技，2013，34（9）：309-311，339.

[7]楊洋，徐春祥，車文軍.高效液相色譜法測(cè)定奶粉中的三聚氰胺及其不確定度分析 [J].食品科學(xué)，2010，31（4）：250-253.

[8]趙健亞，陳丹，謝懷根，等.高效液相色譜法測(cè)定雞肉中磺胺類藥物殘留的不確定度評(píng)定 [J].食品科學(xué)，2013，34（10）：144-147.

Evaluation of Uncertainty in Determination of Nitroimidazoles Residues in Foodstuffs of Animal Origin by LC-MS/MS

LAN Cao，ZOU You，OUYANG Shaolun，WU Yingxuan，SHAO Linzhi
（Inspection and Quarantine Technology Center，Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Guangzhou，Guangdong 510623，China）

This study establish a mathematical model for evaluation of the uncertainty in determination of 5 kinds of nitroimidazoles residues in foodstuffs of animal origin by high performance liquid-MS/MS（LC-MS/MS），and analyze the uncertainty of different sources such as sample weighting，filtrating，the standard curve fitting，measuring repeatability and LC-MS/MS quantify.By calculating the components of all uncertainties，relative combined standard uncertaintyand expand uncertainty，we obtain a report of uncertainty of nitroimidazoles.The results show that the main source of the uncertainty comes from the standard curve fitting and LC-MS/MS quantify.

uncertainty；liquid chromatography-tandem mass spectrometry；nitroimidazoles

TS254.7

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.02.038

1671-9646（2017）02b-0035-06

2017-01-18

廣東省省級(jí)科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015A030401075）；廣東檢驗(yàn)檢疫局科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015GDK10）。

藍(lán) 草（1988— ），女，碩士，助理工程師，研究方向?yàn)楂F藥殘留檢測(cè)。