楊宇+葉勝強+王麗霞

摘要：利用6個微衛(wèi)星標(biāo)記對42只沔陽麻鴨個體遺傳多樣性進行評估。結(jié)果表明，6個微衛(wèi)星位點中有5個微衛(wèi)星位點在沔陽麻鴨群體中的多態(tài)信息含量為高度多態(tài)，可作為有效的遺傳標(biāo)記用于沔陽麻鴨遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系的分析，沔陽麻鴨平均雜合度為0.48。

關(guān)鍵詞：沔陽麻鴨；微衛(wèi)星；遺傳多樣性

中圖分類號：S834+.83 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2016）11-0008-02

中國是世界水禽生產(chǎn)和消費第一大國，水禽（鴨、鵝）年飼養(yǎng)量達30多億只，水禽產(chǎn)業(yè)為社會提供各類豐富的產(chǎn)品，如鮮蛋、皮蛋、咸蛋、羽絨、肉及各類深加工分隔產(chǎn)品，相關(guān)產(chǎn)值超900億元，是中國農(nóng)業(yè)及農(nóng)村經(jīng)濟發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)之一。

湖北省有三個地方鴨品種，分別是沔陽麻鴨、恩施麻鴨和荊江麻鴨。在2006年農(nóng)業(yè)部啟動全國畜禽遺傳資源調(diào)查時，沔陽麻鴨群體規(guī)模為10萬只[1]。遺傳資源調(diào)查結(jié)果顯示，沔陽麻鴨無瀕危危險，然而，十余年之后，隨著全國32個地方鴨品種的充分競爭，水禽產(chǎn)業(yè)集約化、自動化程度的提高，少數(shù)長期系統(tǒng)選育，生產(chǎn)性能更佳的地方鴨品種（如紹興鴨）逐步占領(lǐng)國內(nèi)大部分蛋鴨市場，而缺少系統(tǒng)選育、產(chǎn)蛋數(shù)偏低的地方鴨養(yǎng)殖量逐步萎縮，沔陽麻鴨群體規(guī)模從2006年時年存欄10萬余只到2016年僅存欄200～300只的危險狀況，沔陽麻鴨群體數(shù)量急劇下降。

微衛(wèi)星標(biāo)記是遺傳多樣性評價的一個手段，在雞中尤為突出。近年來，國內(nèi)學(xué)者利用微衛(wèi)星標(biāo)記對中國一些地方鴨的遺傳多樣性及系統(tǒng)進化樹進行了初步研究[2-4]，其中有部分研究的對象為沔陽麻鴨，經(jīng)過10年的變化，沔陽麻鴨在復(fù)雜的生存環(huán)境下遺傳多樣性的現(xiàn)狀需要重新評估，以針對沔陽麻鴨的種質(zhì)資源現(xiàn)狀制定合理的種質(zhì)資源保存、利用措施，更好的保護中國優(yōu)良種質(zhì)資源。為評估沔陽麻鴨群體遺傳多樣性現(xiàn)狀，本研究利用微衛(wèi)星DNA標(biāo)記對沔陽麻鴨進行系統(tǒng)分析，揭示沔陽麻鴨群體遺傳變異狀況，為沔陽麻鴨種質(zhì)資源的合理保護與開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

沔陽麻鴨來自仙桃國營畜禽良種場。沔陽麻鴨為翅靜脈采血，群體規(guī)模為42只，公母各半。采用天根公司試劑盒提取DNA，置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 微衛(wèi)星選擇及PCR擴增

微衛(wèi)星選擇參考文獻[4]，隨機選擇6個微衛(wèi)星（APL2、APL11、APL23、APL80、CMO12、APH9）作為試驗位點，引物序列由擎科生物合成。每對引物擴增時間參考李慧芳等[5]的方法，擴增溫度先做溫度梯度，瓊脂糖凝膠電泳篩選最佳擴增溫度，利用最佳擴增溫度擴增后變性，利用8%變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，擴增所用聚合酶和dNTPs購自Tokaro，所用分子量標(biāo)準(zhǔn)對照 為MspⅠ酶切的pBR322 DNA Marker。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

利用POPGENE軟件計算等位基因數(shù)和等位基因頻率，并利用Cervus3.0.7軟件統(tǒng)計多態(tài)信息含量、遺傳雜合度。

2 結(jié)果與分析

2.1 各微衛(wèi)星座位遺傳參數(shù)

溫度梯度擴增體系研究6對微衛(wèi)星的最佳擴增條件，6對微衛(wèi)星最佳擴增溫度見表1。沔陽麻鴨樣本內(nèi)檢測6對微衛(wèi)星的遺傳參數(shù)結(jié)果見表2。在檢測群體內(nèi)共檢測到44個等位基因，其中，等位基因數(shù)最多的位點為APL11，為9個，最少的為CMO12，為6個，平均等位基因數(shù)為7.33個，平均有效等位基因數(shù)為3.62。平均多態(tài)信息含量為0.64，除APL80的PIC為中度多態(tài)外，其他位點均為高度多態(tài)位點，位點的PIC與有效等位基因數(shù)呈正相關(guān)。本研究中6個微衛(wèi)星中有5個為高度多態(tài)，可作為有效的遺傳標(biāo)記用于鴨種的遺傳多樣性分析。

2.2 群體平均多態(tài)信息含量和平均雜合度

利用軟件Curves 3.0.7計算平均多態(tài)信息含量和平均雜合度結(jié)果見表2。平均雜合度范圍為0.10～1.00，6個位點在沔陽麻鴨中的平均雜合度為0.48，各位點雜合度差異較大，最高的位點為1.00，最低位點為0.10。

3 討論

多態(tài)信息含量（PIC）可衡量微衛(wèi)星多態(tài)性。當(dāng)PIC>0.5時，該位點為高度多態(tài)位點；當(dāng)0.25

遺傳雜合度（H）又稱基因多樣度，是指隨機抽取的樣本中其兩個等位基因不相同的可能性，期望雜合度主要是根據(jù)種群內(nèi)當(dāng)前優(yōu)勢等位基因的分布頻率來推算的，稀有基因的貢獻極其微弱。沔陽麻鴨的雜合度范圍是0.10～1.00，最高位點為1.00，最低位點為0.10，平均雜合度為0.48，說明沔陽麻鴨品種內(nèi)的遺傳變異差別較大，群體有一定的近交衰退，遺傳多樣性豐富程度較前人報道的有所降低[2-4]。

沔陽麻鴨群體規(guī)模已經(jīng)急劇下降，群體遺傳多樣性豐富程度有所下降，表明該品種資源的保護面臨嚴峻的挑戰(zhàn)，亟需出臺相應(yīng)的保護措施，防止品種近交衰退和遺傳多樣性進一步下降，防止中國優(yōu)秀的地方鴨種質(zhì)資源的丟失。

參考文獻：

[1] 國家畜禽遺傳資源委員會.中國畜禽遺傳資源志 家禽志[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.

[2] 李慧芳，李碧春，楊 寧，等.華中地區(qū)家鴨種質(zhì)資源的遺傳結(jié)構(gòu)研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報，2008，39（3）：291-295.

[3] 李 新，宋衛(wèi)濤，徐文娟，等.湖北省部分家鴨群體遺傳結(jié)構(gòu)探討[J].中國家禽，2008，30（23）：36-39.

[4] 屠云潔，陳寬維，李慧芳，等.湖北省3個地方鴨品種遺傳多樣性研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2007，22（6）：857-861.

[5] 李慧芳，章雙杰，陳寬維，等.我國重點保護地方雞品種資源的遺傳變異[J].中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，10（3）：21-24.

[6] BOTSTEIN D，WHITE R I，SKOLNICK M，et al. Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms[J].Am J Hun Genet，1980，32：314-331.