王巖，趙立眾，夏曉影

(北京航天總醫(yī)院社區(qū)中心，北京100076)

BC-5310做血液常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目測(cè)量不確定度評(píng)定

王巖，趙立眾，夏曉影

(北京航天總醫(yī)院社區(qū)中心，北京100076)

目的對(duì)本實(shí)驗(yàn)室BC-5310全自動(dòng)血液分析儀測(cè)定血液常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目的結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定。方法通過(guò)對(duì)BC-5310測(cè)定血液常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目測(cè)量過(guò)程中WBC、RBC、HGB、PLT四個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目分析，確定并簡(jiǎn)化測(cè)量不確定度的來(lái)源包括：復(fù)現(xiàn)性、采血方法不同、放置時(shí)間、攜帶污染率和方法偏移等。并量化各不確定度分量，確定合成不確定度與擴(kuò)展不確定度。結(jié)果取k=2時(shí)，包含概率P=95.45%，4個(gè)項(xiàng)目高、中、低水平靜脈血和末梢血擴(kuò)展不確定度分別：U（WBC）=(靜脈：±0.89、±0. 44、±0.25；末梢：±1.21、±0.63、±0.37)×109/L，U（RBC）=(靜脈：±0.24、±0.16、±0.09；末梢：±0.60、±0.33、±0.20)×1012/L，U（HGB）=(靜脈：±9. 12、±3.55、±1.89；末梢：±16.37、±9.74、±4.47)g/L，U（PLT）=(靜脈：±55.79、±24.77、±12.80；末梢：±60.33、±34.87、±18.34)×109/L。結(jié)論有助于提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平，可使來(lái)自不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果或同一實(shí)驗(yàn)室不同時(shí)期的結(jié)果具有可比性。

血液常規(guī)檢測(cè)；不同采血方法；測(cè)量不確定度

血常規(guī)檢驗(yàn)是臨床上最為常規(guī)的檢查方法，隨著技術(shù)的進(jìn)步，檢查和應(yīng)用越來(lái)越迅速和廣泛，目前常用儀器是全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀。邁瑞公司生產(chǎn)的BC-53系列全自動(dòng)五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的主要參數(shù)檢測(cè)精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性較好，準(zhǔn)確度也較高，能滿足血細(xì)胞檢測(cè)的一般要求[1]。但是血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果除了受到上述機(jī)器本身參數(shù)影響因素外，還受到多種其他因素影響，為了使實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的表達(dá)趨于一致，臨床結(jié)果的可信性更清晰的表達(dá)，每個(gè)完整的和可溯源的測(cè)量結(jié)果應(yīng)附有合理評(píng)定的測(cè)量不確定度。ISO/IEC17025和ISO15189都對(duì)實(shí)驗(yàn)室的不確定度評(píng)定提出了相應(yīng)要求[2，3]。測(cè)量不確定度是指與測(cè)量結(jié)果相關(guān)的參數(shù)，表征可合理地賦予被測(cè)量值的分散性。測(cè)量不確定度表示指南(Guide to the expression of uncertainty in measurement，GUM)中給出的方法即基于不確定度傳播律以實(shí)現(xiàn)不確定度分量的合成。由于經(jīng)典GUM法在實(shí)際應(yīng)用中遇到許多困難[4]，2012年由中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)發(fā)布的CNAS技術(shù)報(bào)告“醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室—測(cè)量不確定度的評(píng)定與表達(dá)”闡述了常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目測(cè)量不確定度的評(píng)定和表示方法[5]。因此我們參考相關(guān)文件的要求，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案對(duì)BC-5310全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)量不確定度進(jìn)行評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)告結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑邁瑞B(yǎng)C-5310全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及儀器廠家原裝配套試劑，質(zhì)控品，校準(zhǔn)品；20μl微量采血吸管由山東奧賽特醫(yī)療器械有限公司制造；蘇州碧迪醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的ED-

TA-K2抗凝管。

1.2 樣本來(lái)源本中心健康體檢者、門(mén)診患者共計(jì)128人的血液。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 復(fù)現(xiàn)性引入的不確定度u(Rw)取本實(shí)驗(yàn)室連續(xù)3個(gè)月高、中、低三個(gè)水平的室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果計(jì)算WBC、RBC、HGB和PLT的復(fù)現(xiàn)性引入的不確定度：u(Rw)=s(Rw)；相對(duì)不確定度：urel=s(Rw)×100%/復(fù)現(xiàn)性引入的不確定度的影響因素包含：校準(zhǔn)品、試劑瓶間/批間差異、儀器狀態(tài)變化、操作人員變化、溫濕度變化等。能真實(shí)地反映實(shí)驗(yàn)室每日檢測(cè)的不確定度情況[6]。

1.3.2 偏移引入不確定uc(bias)取本實(shí)驗(yàn)室連續(xù)3個(gè)月高、中、低三個(gè)水平同一認(rèn)定值（靶值）的室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果計(jì)算WBC、RBC、HGB和PLT的x、s，并求得x±s為測(cè)量結(jié)果。BC-5310全自動(dòng)血液分析系統(tǒng)測(cè)量存在偏移uc(bias)，uc評(píng)定包含3部分內(nèi)容：偏移量值b、質(zhì)控品（CRM）標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(Cref)以及多次測(cè)量的質(zhì)控品不確定度u(CRM)。以上三部分相對(duì)不確定結(jié)果表達(dá)為：bref、uref(Cref)及uref(CRM)。利用質(zhì)控品做偏移不確定度評(píng)定以測(cè)量結(jié)果是否在“認(rèn)定值（±）不確定度”范圍內(nèi)為評(píng)價(jià)依據(jù)[7]：

⑴如果所測(cè)結(jié)果不在“認(rèn)定值±不確定度”內(nèi)：

⑵如果所測(cè)結(jié)果在“認(rèn)定值±不確定度”內(nèi)：

1.3.3 末梢血采集（fingertip blood sampling，fb）引入不確定uc(fb)及末梢血采集和放置時(shí)間不同（fingertip blood sampling and Place time，ft）共同引入不確定uc(ft)本院健康體檢者、門(mén)診患者共計(jì)128人，每個(gè)人使用EDTA-K2抗凝真空采血試管采集肘前靜脈血2ml。并同時(shí)采集同側(cè)食指或無(wú)名指內(nèi)側(cè)面末梢血20μl于180μl稀釋液中，輕輕搖勻。立即檢測(cè)，紀(jì)錄結(jié)果并計(jì)算差值△1i(i=1-128)。所有末梢血標(biāo)本放置30min后進(jìn)行第二次檢測(cè)[8]，紀(jì)錄結(jié)果并計(jì)算差值△2i(i=1-128)。所有結(jié)果根據(jù)WBC、RBC、HGB和PLT四個(gè)不同檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果按照高、中、低三個(gè)水平分類(lèi)，每個(gè)水平標(biāo)本數(shù)均大于20個(gè)。按照如下公式計(jì)算：

1.3.4 攜帶污染率(Carry-over rate)引入的不確定度uc(c)先取1份高值標(biāo)本，連續(xù)測(cè)定3次，隨后立即取1份低值標(biāo)本(生理鹽水)連續(xù)測(cè)定3次。然后根據(jù)以下公式計(jì)算

1.3.5 合成不確定度評(píng)定和擴(kuò)展不確定度計(jì)算靜脈血合成不確定度，末梢血立即檢測(cè)合成不確定度uc(FB)=末梢血放置30min合成不確定度uc(FT)=成不確定度ucrel(VB)，ucrel(FB)和ucrel(FT)。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告時(shí)，如對(duì)輸出量Y的賦值為正態(tài)分布，取包含因子k=2，包含概率P=95.45%[10]。以上四個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目均取k=2，并按下列公式計(jì)算擴(kuò)展不確定度U=k×uc，相對(duì)擴(kuò)展不確定度Urel=k×ucrel。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。WBC、RBC、HGB和PLT檢測(cè)結(jié)果取自然對(duì)數(shù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后保留2位有效數(shù)字。

2 結(jié)果

WBC測(cè)量不確定度，按照室內(nèi)質(zhì)控水平、醫(yī)學(xué)決定水平和參考區(qū)間，分為高、中、低三個(gè)水平。3個(gè)水平的靜脈組（VB）、末梢血立即檢測(cè)組(FB)、末梢血30min檢測(cè)組(FT)的相對(duì)合成不確定度根據(jù)上述公式計(jì)算，結(jié)果分別為ucrel(VB)=2.33%、2.50%、2.57%；ucrel(FB)=4.26%、4.67%、4.81%；ucrel(FT)=4.43%、4.74%、4.98%。RBC 3個(gè)水平結(jié)果分別為ucrel(VB)=1.85%、1.80%、1.90%；ucrel(FB)=3.66%、3.51%、3.96%；ucrel(FT)=3.86%、3.80%、4.14%。HGB 3個(gè)水平結(jié)果分別為ucrel(VB)=1.44%、1.34%、2.52%；ucrel(FB)=3.57%、3.45%、3.76%；ucrel(FT)= 3.82%、3.74%、4.01%。PLT 3個(gè)水平結(jié)果分別為ucrel(VB)=4.10%、4.03%、4.20%；ucrel(FB)=6.65%、7.02%、7.29%；ucrel(FT)=7.29%、7.10%、7.51%。取包含因子k=2，包含概率P=95.45%，四個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的擴(kuò)展不確定度U結(jié)果見(jiàn)摘要，其相對(duì)擴(kuò)展不確定度Urel結(jié)果見(jiàn)表1、2、3、4。

測(cè)量不確定度的報(bào)告方式：為了便于用戶比較實(shí)驗(yàn)室的能力和水平，在檢測(cè)報(bào)告上應(yīng)出具測(cè)量結(jié)果的不確定度[11]。根據(jù)本研究結(jié)果報(bào)告方式可采用以下方式進(jìn)行：以報(bào)告結(jié)果=x±U(k=2)，其中為測(cè)量系統(tǒng)給出結(jié)果，U為擴(kuò)展不確定度。例如：WBC的靜脈血檢測(cè)結(jié)果為8.9×109/L，報(bào)告結(jié)果=（8.9±0.44）×109/L。

表1 WBC測(cè)量相對(duì)擴(kuò)展不確定度評(píng)定結(jié)果

表2 RBC測(cè)量相對(duì)擴(kuò)展不確定度評(píng)定結(jié)果

表3 HGB測(cè)量相對(duì)擴(kuò)展不確定度評(píng)定結(jié)果

表4 PLT測(cè)量相對(duì)擴(kuò)展不確定度評(píng)定結(jié)果

3 討論

ISO 15189條款5.6.2[12]要求“適用且可能時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度。應(yīng)考慮所有重要的不確定度分量。不確定度來(lái)源可包括采樣、樣品制備、樣品部分的選擇、校準(zhǔn)品、參考物質(zhì)、輸入量、所用設(shè)備、環(huán)境條件、樣品狀態(tài)和操作人員的變更等”。影響血液常規(guī)檢測(cè)因素有多種，如：每日實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)環(huán)境溫、濕度的變化、不同檢測(cè)人、儀器穩(wěn)定性、不同批號(hào)試劑及同一標(biāo)本重復(fù)性檢測(cè)差異等引入隨機(jī)誤差（主要體現(xiàn)復(fù)現(xiàn)性引入不確定度）；方法偏移引入系統(tǒng)誤差（主要體現(xiàn)方法偏移引入不確定度）；采集方法及放置時(shí)間不同引入的誤差。這些誤差都將影響檢測(cè)結(jié)果。

目前大多實(shí)驗(yàn)室采取“從上到下”的方法進(jìn)行評(píng)定[13，14]：模型使用統(tǒng)計(jì)原理直接估計(jì)測(cè)量系統(tǒng)的總不確定度，一般通過(guò)評(píng)估特定設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)或者方法確認(rèn)數(shù)據(jù)。即以室內(nèi)質(zhì)量控制評(píng)定實(shí)驗(yàn)室測(cè)量復(fù)現(xiàn)性，以有證參考物質(zhì)評(píng)定方法偏倚，此種評(píng)定測(cè)量不確定度方法簡(jiǎn)單且有效可行[15]。血液常規(guī)檢測(cè)采集方法主要有靜脈血和手指末梢血采集。靜脈血不確定度評(píng)估主要涉及到兩個(gè)因素：復(fù)現(xiàn)性和方法偏移引入的不確定度?？梢圆捎谩皬纳系较隆钡姆椒ㄟM(jìn)行評(píng)定。末梢血采集有操作簡(jiǎn)單快速、用血量少、檢查血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果與靜脈血同在一個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平之內(nèi)[16]等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于臨床門(mén)診操作。末梢血除了受到上述兩個(gè)因素影響外，還受到多種其他因素影響，如：氣溫變化、液流通不暢，常常擠壓局部造成組織液滲入、采血管質(zhì)量和人工操作誤差、不能及時(shí)檢測(cè)等。本實(shí)驗(yàn)室門(mén)診血液常規(guī)檢測(cè)大多采集手指末梢血，筆者認(rèn)為只做靜脈血不確定度評(píng)估，不能反映本實(shí)驗(yàn)室血液常規(guī)檢測(cè)真實(shí)情況，因此要單獨(dú)對(duì)末梢血的不確定度進(jìn)行評(píng)估。

另外本實(shí)驗(yàn)室血液常規(guī)檢測(cè)標(biāo)本從采集到檢測(cè)一般不會(huì)超過(guò)30min。靜脈血結(jié)果在放置30min之內(nèi)檢測(cè)，結(jié)果穩(wěn)定性無(wú)顯著差異。在采集末梢血進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，如采集后立即進(jìn)行檢測(cè)，會(huì)出現(xiàn)白細(xì)胞暫時(shí)性升高、血小板暫時(shí)性降低的假性結(jié)果，從而造成檢測(cè)結(jié)果偏低的現(xiàn)象發(fā)生。因此在做末梢血不確定評(píng)估時(shí)，應(yīng)該把放置時(shí)間這一因素考慮在內(nèi)。筆者在設(shè)計(jì)末梢血不確定評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方案時(shí)，一組為立即檢測(cè)組，另一組為放置30min檢測(cè)組，并比較這兩組末梢血的不確定度的差異。

從上述結(jié)果可以看出，WBC、RBC、HGB和PLT四個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目高、中、低3個(gè)水平的靜脈血合成uc(VB)、擴(kuò)展U(VB)、相對(duì)合成ucrel(VB)、相對(duì)擴(kuò)展Urel(VB)不確定度均在質(zhì)量目標(biāo)范圍內(nèi)；末梢血高、中、低3個(gè)水平不確定度的立即檢測(cè)組uc(FB)、U (FB)、ucrel(FB)、Urel(FB)和30min檢測(cè)組uc(FT)、U (FT)、ucrel(FT)、Urel(FT)結(jié)果中WBC和PLT均在質(zhì)量目標(biāo)范圍內(nèi)，RBC和HGB均不在質(zhì)量目標(biāo)范圍內(nèi)；末梢血不確定度評(píng)估立即檢測(cè)組結(jié)果比放置30min檢測(cè)結(jié)果低，但總體差異不大。因此建議，在使用全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀做血常規(guī)檢測(cè)時(shí)，特別是對(duì)RBC和HGB結(jié)果判斷，選用靜脈血為佳。本實(shí)驗(yàn)方案做血液常規(guī)檢測(cè)不確定度評(píng)定從整個(gè)檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行分析，將主要影響因素量化，比較直觀顯現(xiàn)出各個(gè)分量在總體檢驗(yàn)結(jié)果中所占比例，有助于改進(jìn)實(shí)驗(yàn)過(guò)程或選取合理的檢測(cè)方法，有利于臨床更好的考慮不同檢測(cè)結(jié)果差值的意義，為提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平和治療疾病做出正確的判斷提供保證。

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Evaluation of the uncertainty of blood cell count and hemoglobin determination by BC-5310

WANG Yan，ZHAO Lizhong，XIAXiaoying.Community Health Center of Beijing Aerospace General Hospital，Beijing 100076，China.

Objective To estimate the uncertainty of measurement in detecting of blood cell count and hemoglobin determination by full automatic blood machine(BC-5310)，and discuss the application value.Methods The process of the detection of RBC，WBC，HGB and PLT by BC-5310 was analyzed to confirm and simplify the sources of uncertainties of measurement，which included Reproducibility，Different blood sampling methods，Place time，Carry-over rate and Bias uncertainty.Combined uncertainty and expanded uncertainty were obtained by statistical methods．Results When k=2，Probability=95.45%，4 items in high，medium，low three levels form venous blood(VB)and fingertip blood(FB)sampling were：U（WBC）=(VB：±0.89、±0.44、±0.25；FB：±1.21、±0.63、±0.37)×109/L，U（RBC）=(VB：±0.24、±0.16、±0.09；FB：±0.60、±0.33、±0.20)×1012/L，U（HGB）=(VB：±9.12、±3.55、±1.89；FB：±16.37、±9. 74、±4.47)g/L，U（PLT）=(VB：±55.79、±24.77、±12.80；FB：±60.33、±34.87、±18.34)×109/L.Conclusion It provides guide significance for observing the cure effect of blood cell count and hemoglobin determination and choosing the concentration of quality control.

Blood cell count and hemoglobin determination；Different blood sampling methods；Uncertainties of measurement

R446.11+1

A

1674-1129(2017)02-0186-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.02.015

2016-11-10；

2017-03-07)

王巖，女，1985年生，檢驗(yàn)師，本科，醫(yī)學(xué)學(xué)士學(xué)位，主要從事血液檢測(cè)研究。E-mail:15201631615@139.com。