田曉峰，王國軍

RP-HPLC法測定復(fù)方奧美拉唑干混懸劑的含量及有關(guān)物質(zhì)

田曉峰*，王國軍

目的 建立RP-HPLC法測定復(fù)方奧美拉唑干混懸劑中奧美拉唑的含量及其有關(guān)物質(zhì)。方法 采用Phenomenex Luna C18色譜柱(250 mm×4.60 mm，5 μm)，流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸(體積比為55∶45∶0.3∶0.12)，流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：20 μL，含量測定的檢測波長為302 nm，有關(guān)物質(zhì)測定的檢測波長為280 nm。結(jié)果 奧美拉唑經(jīng)強(qiáng)制破壞主峰與雜質(zhì)可得到良好的分離，濃度在0.133～30.0 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 7)，平均回收率為99.0%(RSD=0.2%，n=9)。3批樣品及對照藥品的含量分別為97.5%、97.6%、97.5%、92.3%，單一最大雜質(zhì)分別為0.06%、0.06%、0.05%、0.15%，總雜質(zhì)分別為0.11%、0.11%、0.11%、0.45%。結(jié)論 本法可用于測定復(fù)方奧美拉唑干混懸劑的含量及有關(guān)物質(zhì)。

奧美拉唑；高效液相色譜法；含量測定；有關(guān)物質(zhì)

0 引言

奧美拉唑(Omeprazole)是首個上市的質(zhì)子泵抑制劑，由瑞典阿斯特拉制藥公司(阿斯利康制藥前身)研發(fā)，于1988年在瑞士上市，用于治療十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎及Zollinger-Ellison綜合征[1-3]。復(fù)方奧美拉唑干混懸劑商品名為ZEGERID，由桑塔魯斯(Santarus)公司研制，于2004年6月15日獲批在美國上市，目前我國還沒有該藥上市。本品為其仿制藥，由奧美拉唑和碳酸氫鈉所組成，方中碳酸氫鈉不僅具有抑制胃酸分泌的直接效果，還能防止奧美拉唑被胃酸降解，組方合理。而且該藥服用后，藥物吸收快速，可以很快達(dá)到峰濃度水平，能有效控制胃酸。

為了確保本品的質(zhì)量，筆者依據(jù)《中國藥典》2010版二部、《英國藥典》(BP2009)中奧美拉唑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)[4-9]，將奧美拉唑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量及有關(guān)物質(zhì)測定的色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，并建立本品奧美拉唑含量及有關(guān)物質(zhì)測定的方法，為復(fù)方奧美拉唑干混懸劑及其相關(guān)制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1100型高效液相色譜儀(DAD檢測器，Chemstation system化學(xué)工作站)，瑞士Mettler AE240十萬分之一電子天平。

奧美拉唑?qū)φ掌?中國食品藥品檢定研究所，批號：100367-201104)，復(fù)方奧美拉唑干混懸劑(海南天煌制藥有限公司，規(guī)格：奧美拉唑20 mg，批號：20111101、20111102、20111103)，對照藥品：ZEGERID(Santarus公司，規(guī)格：奧美拉唑20 mg，批號：C1H45801)，奧美拉唑磺?；飳φ掌?雜質(zhì)D，中國食品藥品檢定研究所，批號：100838-201103)，雜質(zhì)A、B、E、H、I(均由深圳菲斯化工有限公司提供，批號分別為2011030211、20110321、20110407、1458-030A6、20110402)，娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)，甲醇、乙腈(天津康科德科技有限公司，色譜純)，三乙胺、磷酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Phenomenex Luna C18柱(250 mm×4.60 mm，5 μm)，流動相：甲醇-水-三乙胺-磷酸(體積比為55∶45∶0.3∶0.12)，流速：1.0 mL/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：20 μL，含量測定的檢測波長：302 nm，有關(guān)物質(zhì)測定的檢測波長：280 nm。

2.2 溶液的制備 對照品溶液：取奧美拉唑?qū)φ掌芳s20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。取1.0 mL置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，制成每1 mL中約含奧美拉唑20 μg的對照品溶液。

含量測定供試品溶液：取復(fù)方奧美拉唑干混懸劑約5.85 g(約相當(dāng)于奧美拉唑20 mg)，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。取1.0 mL置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，制成每1 mL中約含奧美拉唑20 μg的供試品溶液。

自身對照溶液：取奧美拉唑?qū)φ掌芳s20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。取1.0 mL置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，制成每1 mL中約含奧美拉唑2 μg的對照溶液。

有關(guān)物質(zhì)測定供試品溶液：取復(fù)方奧美拉唑干混懸劑約5.85 g(約相當(dāng)于奧美拉唑20 mg)，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，制成每1 mL中約含奧美拉唑200 μg的供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性 取奧美拉唑?qū)φ掌芳皧W美拉唑磺酰化物對照品，加流動相稀釋制成每1 mL中約含奧美拉唑及奧美拉唑磺酰化物各100 μg的混合對照品溶液，取20 μL注入液相色譜儀，奧美拉唑峰與奧美拉唑磺?；锓?相對保留時間約為0.8)的分離度應(yīng)>2.0(測得結(jié)果為5.7)，理論板數(shù)按奧美拉唑峰計算應(yīng)不低于2 000(測得結(jié)果為14 533)，見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性溶液色譜圖 注：1.奧美拉唑磺?；?，2.奧美拉唑

2.4 專屬性 取本品適量，精密稱定，加流動相稀釋制成約含奧美拉唑400 mg/L的儲備液，對其進(jìn)行強(qiáng)制破壞試驗。①酸破壞：精密量取儲備液5 mL，置10 mL量瓶中，加1 mol/L鹽酸溶液1 mL，室溫放置5 min，用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，加流動相定容。②堿破壞：精密量取儲備液5 mL，置10 mL量瓶中，加1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，室溫放置6 h，加1 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至中性，加流動相定容。③氧化破壞：精密量取儲備液5 mL，置10 mL量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為10%的過氧化氫溶液1 mL，室溫放置 30 min，加流動相定容。④高溫破壞：精密量取儲備液5 mL，置10 mL量瓶中，水浴加熱2 h，冷卻至室溫，加流動相定容。⑤光照破壞：精密量取儲備液5 mL，置10 mL量瓶中，置4 500 Lx光線下放置6 h，加流動相定容。取上述溶液各20 μL進(jìn)樣，見圖2。試驗結(jié)果表明，本品主成分峰與各分解產(chǎn)物峰均可實現(xiàn)基線分離，并且同法做空白輔料的破壞試驗，空白輔料對主峰含量檢測無干擾，故該方法專屬性良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性

2.5.1 含量測定供試品溶液穩(wěn)定性 取本品樣品(批號：20111101)約5.85 g，按照“2.2”項下制備含量測定供試品溶液，于室溫下放置8 h，分別于0、1、2、4、8 h，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果奧美拉唑峰面積的RSD為0.2%，表明室溫下放置8 h內(nèi)含量測定供試品溶液穩(wěn)定，滿足樣品含量測定要求。

2.5.2 有關(guān)物質(zhì)測定供試品溶液穩(wěn)定性 取本品樣品(批號：20111101)約5.85 g，按照“2.2”項下制備有關(guān)物質(zhì)測定供試品溶液，于室溫下放置8 h，分別于0、1、2、4、8 h，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果雜質(zhì)總峰面積不斷增大，并且雜質(zhì)數(shù)不斷增多，表明本品有關(guān)物質(zhì)測定供試品溶液室溫下放置易降解生成新的雜質(zhì)，樣品需要新鮮配制檢測。

圖2 破壞試驗色譜圖 注：A.酸破壞，B.堿破壞，C.氧化破壞，D.高溫破壞，E.光照破壞，F(xiàn).空白

2.6 檢測限和定量限 以信噪比S/N≥3時的濃度為檢測限，以信噪比S/N≥10時的濃度為定量限。取對照品溶液稀釋若干倍后進(jìn)樣20 μL，測得奧美拉唑的檢測限為0.040 mg/L，定量限為0.133 mg/L。

2.7 線性范圍 精密稱取奧美拉唑?qū)φ掌?0 mg，置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，制成每1 mL含200 μg的對照品儲備溶液，精密量取0.2、0.4、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，分別置于10 mL量瓶內(nèi)，加流動相溶解并稀釋至刻度，得4.0、8.0、16.0、20.0、24.0、30.0 mg/L的系列對照品溶液，精密量取上述溶液及定量限溶液(0.133 mg/L)各20 μL進(jìn)樣，記錄主成分峰面積，并以質(zhì)量濃度C(mg/L)為橫坐標(biāo)、峰面積A為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=43.248 C-2.879 9 (r=0.999 7)，結(jié)果表明，其在質(zhì)量濃度0.133～30.0 mg/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.8 精密度、重復(fù)性、準(zhǔn)確度試驗

2.8.1 儀器精密度 按“2.2”項下制備對照品溶液和自身對照溶液，分別按照“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，量取峰面積，計算峰面積的RSD分別為0.1%和0.7%。在可接受范圍內(nèi)，表明儀器精密度良好。

2.8.2 重復(fù)性 取本品樣品(批號：20111101)6份，分別按照“2.2”項下平行制備含量測定供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，得奧美拉唑含量的RSD為0.1%，在可接受范圍內(nèi)，表明方法重復(fù)性良好。

2.8.3 準(zhǔn)確度 以回收率試驗來驗證準(zhǔn)確度，按處方比例稱取各輔料9份，置于100 mL量瓶中，按復(fù)方奧美拉唑干混懸劑20 mg規(guī)格標(biāo)示量的80%、100%、120%，分別精密量取奧美拉唑?qū)φ掌芳s16、20、24 mg各3份，置于上述100 mL量瓶內(nèi)，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含16、20、24 μg的溶液，搖勻，濾過，作為供試品溶液。精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取峰面積并計算回收率，見表1。

表1 奧美拉唑回收率結(jié)果

2.9 奧美拉唑含量及有關(guān)物質(zhì)測定 取3批奧美拉唑干混懸劑，按照“2.2”項下制備對照品溶液、含量測定供試品溶液、自身對照溶液及有關(guān)物質(zhì)測定供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計算奧美拉唑的含量，以自身對照法計算有關(guān)物質(zhì)的含量，結(jié)果見表2。

表2 含量及有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

3.1 色譜柱類型改變 色譜柱由以辛烷基硅烷鍵合硅膠的填料類型更換成以十八烷基硅烷鍵合硅膠的填料類型，是由于考慮到C18柱比C8柱的碳鏈更長，保留特性更好，并且C18柱和C8柱相比，耐用性能較好，使用壽命長，成本低。

3.2 流動相改變 流動相由乙腈-水的緩沖鹽系統(tǒng)改為甲醇-水的緩沖鹽系統(tǒng)，雖然有機(jī)溶劑類型有所改變，但緩沖鹽的pH值范圍基本保持不變，并且對樣品的色譜行為影響幾乎不變。

3.3 檢測波長 通過全波長掃描可知，奧美拉唑與奧美拉唑雜質(zhì)A、B、D、E、H、I的最大吸收峰為202、276、302 mn，由于202 nm是靠近末端吸收，不建議采用該波長。故檢測波長的選擇依據(jù)《中國藥典》2010版二部中奧美拉唑腸溶片及奧美拉唑腸溶膠囊的含量和有關(guān)物質(zhì)測定波長，分別選擇302、280 nm作為含量及有關(guān)物質(zhì)的檢測波長。

3.4 兩種方法下樣品與對照藥品對比 采用《中國藥典》2010版二部中奧美拉唑原料藥有關(guān)物質(zhì)檢測方法和本品有關(guān)物質(zhì)檢測方法，分別對自制樣品與對照藥品ZEGERID進(jìn)行檢測，見表3。

由以上對比結(jié)果可見，本品有關(guān)物質(zhì)檢測方法與《中國藥典》2010版二部奧美拉唑原料藥有關(guān)物質(zhì)檢測方法相比：①將保留時間提前，縮短了檢測時間；②奧美拉唑與奧美拉唑磺?；锓蛛x度由原來的2.8提高到6.2；③檢測出的雜質(zhì)個數(shù)相同；④兩種方法下測得的總雜質(zhì)含量接近；⑤空白輔料對樣品檢測均不產(chǎn)生干擾。優(yōu)化的有關(guān)物質(zhì)檢測方法更適用于本品有關(guān)物質(zhì)檢測，與《中國藥典》2010版二部奧美拉唑的有關(guān)物質(zhì)檢測方法相比，同樣能夠達(dá)到檢測目的。3.5 已知雜質(zhì)研究 通過將《英國藥典》(BP2009)有關(guān)物質(zhì)中的已知雜質(zhì)(奧美拉唑雜質(zhì)A、B、D、E、H、I)對照品與本品原料藥及制劑的雜質(zhì)進(jìn)行對比，確定本品中雜質(zhì)是否為已知雜質(zhì)。由于本品有關(guān)物質(zhì)檢測方法與《英國藥典》(BP2009)中方法存在差異，因此采用兩種方法進(jìn)行對比研究，見表4。

由以上對比結(jié)果可見：①原料藥中含有3個已知雜質(zhì)；②制劑中含有2個已知雜質(zhì)；③《英國藥典》(BP2009)有關(guān)物質(zhì)檢測方法中雜質(zhì)B和雜質(zhì)D相對保留時間相同，雜質(zhì)峰出現(xiàn)重疊現(xiàn)象，該方法不能將所有雜質(zhì)在同一條件下較好地分離，而本品的有關(guān)物質(zhì)方法可以將所有雜質(zhì)在同一條件下較好地分離，更適合本品有關(guān)物質(zhì)的檢測。

表3 兩種方法下樣品與對照藥品對比結(jié)果

表4 雜質(zhì)定性分析結(jié)果

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Detection of the content and related substances of compound omeprazole powder for oral suspension by RP-HPLC

TIAN Xiao-feng*,WANG Guo-jun

(Tieling Central Hospital,Tieling 112000,China)

Objective To establish an RP-HPLC method for the determination of omeprazole and its related substances in compound omeprazole powder for oral suspension.Methods A Phenomenex Luna C18column (250 mm×4.60 mm,5 μm) was used,the mobile phase consisted of methanol-water-triethylamine-phosphoric acid (V∶V∶V∶V=55∶45∶0.3∶0.12) at the rate of 1.0 mL/min,the column temperature was 30 ℃ and the injection volume was 20 μL;the detection wavelength was 302 nm and 280 nm for the determination of the content and related substances,respectively.Results Omeprazole was completely separated from its degradation products,the linear range was 0.133～30.0 mg/L(r=0.999 7),and the average recovery was 99.0%(RSD=0.2%,n=9).The contents of 3 batches of samples and reference drug were 97.5%,97.6%,97.5% and 92.3%,respectively.The maximum single impurity was 0.06%,0.06%,0.05% and 0.15%,respectively.The total impurities were 0.11%,0.11%,0.11% and 0.45%,respectively.Conclusion The method can be used for the determination of the content and related substances in compound omeprazole powder for oral suspension.

Omeprazole;HPLC;Content determination;Related substance

2016-08-26

鐵嶺市中心醫(yī)院，遼寧 鐵嶺 112000

*通信作者

10.14053/j.cnki.ppcr.201704022