辛琪，張勤，張娜，劉貴秋，溫立坤，張傳山，戰(zhàn)忠利

(1天津市第三中心醫(yī)院,天津300170；2天津市濱海新區(qū)大港醫(yī)院；3天津市腫瘤醫(yī)院)

CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸在腸型與彌漫型胃癌組織中的表達(dá)差異及意義

辛琪1，張勤1，張娜2，劉貴秋1，溫立坤1，張傳山1，戰(zhàn)忠利3

(1天津市第三中心醫(yī)院,天津300170；2天津市濱海新區(qū)大港醫(yī)院；3天津市腫瘤醫(yī)院)

目的 觀察CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸在腸型與彌漫性胃癌組織中的表達(dá)差異，并探討其臨床意義。方法 收集腸型胃癌組織60例、彌漫型胃癌組織55例，采用免疫組化法檢測組織中的CXCL12、CXCR7，分析其與兩型胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 腸型胃癌組織中CXCL12、CXCR7表達(dá)均高于彌漫型胃癌(P均﹤0.05)。在腸型胃癌中，CXCL12、CXCR7表達(dá)與腫瘤大小、浸潤深度、臨床分期及淋巴結(jié)、肝臟轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均﹤0.05)；但在彌漫型胃癌中，僅CXCL12與浸潤深度及淋巴結(jié)、卵巢轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均﹤0.05),CXCR7僅與腫瘤浸潤深度有關(guān)(P﹤0.01)。結(jié)論 腸型胃癌組織中CXCL12、CXCR7表達(dá)高于彌漫性胃癌，且與淋巴結(jié)、肝臟轉(zhuǎn)移有關(guān)；CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸在腸型胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中起重要作用，可作為阻止侵襲轉(zhuǎn)移的治療靶點。

腸型胃癌；彌漫型胃癌；CXCL12蛋白；CXCR7蛋白；生物學(xué)軸

胃癌是一種高病死率的惡性腫瘤，浸潤和轉(zhuǎn)移是影響其預(yù)后最重要的原因。趨化因子CXCL12在胃癌的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用[1,2]，可能是影響胃癌預(yù)后的一個獨立影響因子[3]。CXCR7是近年來發(fā)現(xiàn)的CXCL12的一個新受體，在各種腫瘤中均有表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4，5]。CXCR7通過與CXCL12結(jié)合形成生物學(xué)軸，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、黏附。我們之前的研究證實，CXCR7在胃癌組織中高表達(dá)，并能促進(jìn)其生長、侵襲[6，7]。本研究運用免疫組化法檢測CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸在腸型、彌漫型胃癌組織的表達(dá)，并分析其與患者臨床病理特征及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系，進(jìn)一步探討CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸作為治療靶點的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年～2012年在天津市腫瘤醫(yī)院行胃癌根治手術(shù)患者的石蠟標(biāo)本115例，均經(jīng)HE切片復(fù)讀確認(rèn)，術(shù)前未經(jīng)任何針對腫瘤的治療。按照Lauren′s分型法腸型胃癌60例，彌漫型胃癌55例(均為印戒細(xì)胞癌)。腸型胃癌中，男33例、女27例，年齡﹤56歲34例、≥56歲26例，腫瘤直徑﹤5 cm 26例、≥5 cm 34例，浸潤深度T1～T226例、T3～T434例，臨床分期Ⅰ～Ⅱ期29例、Ⅲ～Ⅳ期31例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例、肝轉(zhuǎn)移20例；腸型胃癌中男21例、女34例，年齡﹤56歲33例、≥56歲22例，腫瘤直徑﹤5 cm 23例、≥5 cm 32例，浸潤深度T1～T224例、T3～T431例，臨床分期Ⅰ～Ⅱ期30例、Ⅲ～Ⅳ期25例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例、卵巢轉(zhuǎn)移20例。同時，留取兩種胃癌的轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)及肝、卵巢組織。

1.2 CXCL12、CXCR7檢測方法 所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定，常規(guī)石蠟包膜，4 μm連續(xù)切片。采用免疫組化SP法檢測腸型胃癌、彌漫型胃癌組織及淋巴結(jié)、肝臟、卵巢組織中的CXCL12、CXCR7，CXCL12、CXCR7多克隆抗體購自美國Dako公司，快捷型酶標(biāo)羊抗鼠/兔IgG聚合物及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)酶底物顯色試劑盒等均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，按試劑盒說明書操作。細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃至棕黃色染色為CXCR7、CXCL12陽性細(xì)胞，隨機選取5個高倍鏡視野(×400)進(jìn)行判斷。陽性細(xì)胞百分比：﹤1%計0分，1%～﹤30%計1 分， 30%～﹤60%計2 分，≥ 60%計3分；染色強度:無染色計0 分，淡黃色計1 分，棕黃色計2 分，深棕黃色計3 分。兩項得分相乘< 2為陰性表達(dá)，≥2為陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗，相關(guān)性分析用Spearman等級相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腸型與彌漫型胃癌組織中CXCL12、CXCR7的表達(dá)比較 腸型胃癌組織中CXCL12、CXCR7陽性表達(dá)分別為38、42例，均高于彌漫型胃癌組織中的24、25例(χ2=4.418，P<0.05；χ2=7.109，P<0.01)。

2.2 CXCL12、CXCR7表達(dá)與腸型、彌漫型胃癌臨床病理特征的關(guān)系 CXCR7與CXCL12的表達(dá)均與腸型胃癌腫瘤直徑、浸潤深度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均﹤0.05)，但與年齡、性別無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

在彌漫型胃癌中，CXCR7表達(dá)僅與腫瘤浸潤深度有關(guān)(P<0.01)，而與年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P均>0.05)；CXCL12表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度有關(guān)(P均<0.05)。見表2。

表1 CXCL12、CXCR7表達(dá)與腸型胃癌臨床病理特征的關(guān)系(例)

3 討論

影響晚期胃癌預(yù)后最重要的因素就是發(fā)生轉(zhuǎn)移,不同類型胃癌有不一樣的分子學(xué)機制,根據(jù)各自的分子學(xué)機制來研究其靶向治療和個性化治療是減少胃癌病死率最有效的方法。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌轉(zhuǎn)移受趨化因子及其受體的調(diào)節(jié)。趨化因子是具有趨化作用的小細(xì)胞因子家族中的一類，它通過與受體結(jié)合在胚胎發(fā)育及許多惡性腫瘤的發(fā)生過程中都起關(guān)鍵性作用。CXCL12就是趨化因子中的一種，它在許多惡性腫瘤中表達(dá),并能通過與其受體結(jié)合促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。一直以來，CXCR4被認(rèn)為是CXCL12的惟一受體；但近年研究表明，CXCR7是CXCL12的另外一個受體，并且與CXCL12的親和性還明顯高于CXCR4。同CXCL12/CXCR4生物學(xué)軸一樣，CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸在腫瘤的形成及發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。

表2 CXCL12、CXCR7表達(dá)與彌漫型胃癌臨床病理特征的關(guān)系(例)

CXCR7在多種不同的癌細(xì)胞表面表達(dá),能促進(jìn)腫瘤的生長,并能調(diào)節(jié)免疫、血管發(fā)生和器官特異性的轉(zhuǎn)移[8，9]。我們發(fā)現(xiàn)，在不同分型的胃癌組織中CXCL12/CXCR7表達(dá)水平不同，腸型胃腺癌組織中CXCL12/CXCR7表達(dá)明顯高于彌漫型胃癌。我們分析CXCL12/CXCR7和腸型胃癌的生物學(xué)行為發(fā)現(xiàn)，腸型胃癌中CXCL12/CXCR7的表達(dá)與腫瘤直徑、浸潤深度、臨床分期有關(guān)，腫瘤直徑越大、浸潤深度越深、臨床分期越高，CXCL12/CXCR7表達(dá)越高，提示CXCL12/CXCR7表達(dá)能夠促進(jìn)腸型胃癌的侵襲。但是，在彌漫型胃癌中CXCL12/CXCR7表達(dá)僅與浸潤深度有關(guān)，而與其他病理特征無關(guān)。有學(xué)者[10，11]發(fā)現(xiàn)，皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中CXCR7表達(dá)僅與浸潤深度有關(guān)，但是在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中CXCL12/CXCR7表達(dá)與分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。這一現(xiàn)象與不同的癌組織具有不同的分子學(xué)機制有關(guān)。同時，體外研究[12]發(fā)現(xiàn)沉默CXCR7能抑制人肝癌細(xì)胞生長和侵襲能力。但是，目前關(guān)于CXCR7對腫瘤侵襲能力的調(diào)節(jié)機制尚有很大的爭議。有研究認(rèn)為，CXCR7促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲并非通過增強腫瘤細(xì)胞運動能力，而是通過促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌降解胞外基質(zhì)，從而有利于腫瘤細(xì)胞的侵襲[13]。

在向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的過程中，表達(dá)趨化因子受體的實體腫瘤在其配體趨化因子的引導(dǎo)下，向特定的靶器官轉(zhuǎn)移，表現(xiàn)為歸巢現(xiàn)象。其中CXCL12就是引導(dǎo)其歸巢遷移的一個重要的趨化因子。Zhao等[14]發(fā)現(xiàn)，CXCL12在胃癌組織中陽性表達(dá)且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Iwasa等[15]也發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤患者血清CXCL12水平比未發(fā)生轉(zhuǎn)移者高，且與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。因此，我們推測表達(dá)CXCR7的胃癌細(xì)胞可以沿著CXCL12濃度梯度移動到相應(yīng)的靶器官。淋巴結(jié)和肝臟是胃癌最常見的轉(zhuǎn)移器官,本研究發(fā)現(xiàn)腸型胃癌CXCL12/CXCR7表達(dá)與淋巴結(jié)和肝轉(zhuǎn)移都有關(guān)，提示我們在腸型胃癌中CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸參與淋巴結(jié)、肝臟轉(zhuǎn)移這一過程。 因此在腸型胃癌中CXCL12/CXCR7的表達(dá)與侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，能夠作為胃癌治療的新靶點。其他研究顯示，CXCL12的另一受體CXCR4在腸型胃癌中也能夠促進(jìn)淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移[15]。但是與腸型胃癌不同，彌漫型胃癌組織中CXCL12表達(dá)與淋巴結(jié)及卵巢轉(zhuǎn)移有關(guān)，但CXCR7表達(dá)僅與腫瘤浸潤深度有關(guān)，并不能促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，這可能與腸型胃癌與彌漫型胃癌具有不同的分子學(xué)機制有關(guān)。在彌漫型胃癌中，CXCL12可能與另外一個受體CXCR4相互作用趨化促進(jìn)淋巴結(jié)或卵巢轉(zhuǎn)移。因此，在腸型胃癌中CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸發(fā)揮了重要作用，能夠促進(jìn)其侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，能夠預(yù)測腸型胃癌的預(yù)后，靶向抑制CXCL12/CXCR7可能阻斷腸型胃癌的淋巴結(jié)和肝臟轉(zhuǎn)移，提示CXCL12/CXCR7生物學(xué)軸可能成為腸型胃癌治療的新靶點。

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天津市濱海新區(qū)衛(wèi)生局醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目(2011BHKY021)；天津市濱海新區(qū)大港區(qū)域社會發(fā)展科技項目(20120211)；天津市濱海新區(qū)科技發(fā)展戰(zhàn)略研究計劃項目(2012DK15W007)。

張娜(E-mail: zhangna169@163.com )

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.10.017

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1002-266X(2017)10-0052-03

2016-07-19)