張國庭，霍 飛，王遼遠，斯依提，申明明，陳靜波*（新疆畜牧科學院畜牧研究所，新疆 烏魯木齊 830000；新疆喀什地區(qū)畜禽繁育改良站，新疆 喀什 844000）

多胎多浪羊群胚胎移植擴繁試驗

張國庭1，霍 飛1，王遼遠2，斯依提2，申明明2，陳靜波1*
（1新疆畜牧科學院畜牧研究所，新疆 烏魯木齊 830000；2新疆喀什地區(qū)畜禽繁育改良站，新疆 喀什 844000）

（目的）綿羊多胎基因在多浪羊品種群體中攜帶率較低，為增加攜帶多胎基因多浪羊群的數(shù)量，提高多浪羊的繁殖率和養(yǎng)殖效益，本試驗選擇攜帶多胎基因的多浪羊作為供體進行了胚胎移植擴繁試驗。（方法）選取經檢測攜帶有多胎基因的種公羊4只、母羊19只，通過同期發(fā)情、超數(shù)排卵和手術法采卵，腹腔鏡移植技術給普通生產群的多浪羊受體移植。（結果）供體平均生產可用胚胎9.26枚（176/19），鮮胚移植受胎率為59.5%，另外制作A級冷凍胚胎57枚。（結論）結果表明胚胎移植技術能夠有效地用于攜帶有多胎基因羊繁殖生產，達到迅速擴群的目的。

多浪羊；多胎基因；胚胎移植

10.16863/j.cnki.1003-6377.2017.02.005

多浪羊體格大，肉用型明顯，體質結實，具有增重快、羔羊可當年育肥出欄的優(yōu)良特性，還具有耐干旱、耐熱、抗逆性好、抗病力強、適應性好等特點，并對荒漠化、半荒漠化惡劣生態(tài)環(huán)境具有較好的適應性；其所產羊肉色澤純正，肉質鮮嫩多汁，無膻味，營養(yǎng)價值高[1]。多浪羊是新疆優(yōu)秀的地方良種肉用羊品種，但是雙羔率相對較低,作為肉羊品種產生的經濟效益受到限制。

BMPR-IB基因在多胎多浪羊中存在3種基因型：野生型++，突變雜合型B+和突變純合型BB；基因型頻率分別為：++基因型0.741，B+基因型0.254，BB基因型0.005；等位基因頻率B和+分別為0.132和0.868［2］。B+和BB基因型比例高，多浪羊產羔數(shù)增加，反之，產羔數(shù)減少。用多胎多浪羊種群進行羊肉生產，以可提高母羊的繁殖率，減少飼養(yǎng)繁殖母羊的數(shù)量；因此多胎多浪羊具有良好的發(fā)展前景。

新疆畜牧科學院畜牧研究所一直從事馬、牛、羊等家畜胚胎移植［2］，本次試驗旨在將胚胎移植技術應用于多胎多浪羊繁殖生產，以達到迅速擴繁多胎多浪羊群的目的

1 材料與方法

1.1試驗動物

選取通過基因檢測攜帶有多胎基因的多浪羊母羊19只為供體，其中純合子母羊2只，雜合子母羊17只，年齡為1.5歲至2.5歲；通過基因檢測無多胎基因的150只多浪羊生產母羊為受體，所選羊只健康，無傳染病和繁殖疾病。

1.2 公母羊飼養(yǎng)管理

公羊飼喂混合精料量為玉米800 g、豆粕600 g、70 g預混料和食鹽15 g，分早晚兩次飼喂，苜蓿干草和麥草自由采食，雞蛋4個，胡蘿卜1 kg，分早晚兩次飼喂，自由飲水。

供體母羊飼喂混合精料量為玉米800 g、麩皮200 g、50 g預混料和食鹽10 g，分早晚兩次飼喂，麥草自由采食，中午自由采食苜蓿干草，自由飲水。

受體母羊飼喂混合精料量為玉米300 g、麩皮100 g，分早晚兩次飼喂，麥草自由采食，自由飲水。

1.3 試驗藥品和儀器

氯前列烯醇（PG-cl）和促排-3號（GnRH analogy）激素藥品均由寧波三生藥業(yè)公司生產;促卵泡素（FSH）有兩種，一種為寧波三生藥業(yè)公司生產，另一種為加拿大生產，已過期，冷凍保存。

B超儀為日本Aloka SSD-500B-型超聲波診斷儀，5.0MHZ線陣探頭；內窺鏡由德國生產。

1.4 處理方法

供體發(fā)情后9~12 d開始超數(shù)排卵。10只供體用加拿大生產冷凍保存的過期藥品FSH1.2倍劑量超排（總劑量12 mg），9只供體用寧波三生藥業(yè)生產的FSH1倍劑量超排（總劑量10 mg）。發(fā)情后12 h公羊首次配種，同時注射促排-3號12.5 mg，再間隔12 h公羊第二次配種。發(fā)情當日為第0 d，第6 d沖胚胎移植。

1.5 數(shù)據統(tǒng)計分析

各數(shù)據之間差異顯著性檢驗采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行，試驗數(shù)據結果均用平均值±標準差表示。

2 結 果

獲得可用胚胎176枚，鮮胚移植119只受體，冷凍胚胎 57枚，平均出可用胚胎9.26枚，移植妊娠率59.50%。

2只純合子母羊體況瘦弱，未沖出可用胚胎。

加拿大生產冷凍保存的過期藥品FSH1.2倍劑量和寧波三生藥業(yè)生產的FSH1倍劑量超排效果見表1。

表1 不同激素的超排效果

不同體況供體超排后黃體與沖出可用胚胎數(shù)比較結果見表2。

表2 不同體況供體超排效果

供體年齡對超排效果的影響見表3。

表3 年齡對超排效果的影響

供體體重對超排效果的影響見表4。

表4 供體體重對超排效果的影響

3 討 論

3.1 多浪羊攜帶有多胎基因可能是影響超排效果的因素之一

大量的生產實踐證明，綿羊經過同期發(fā)情超數(shù)排卵后，每只供體平均沖出可用胚胎5~7枚。2011年，在新疆溫宿縣每只黑薩?？搜蚱骄鶝_出可用胚胎7.5枚，2012年，在新疆阿勒泰每只阿勒泰羊平均沖出可用胚胎5.3枚，2014年，在新疆伊吾縣每只黑頭杜泊羊平均沖出可用胚胎6.2枚。本次試驗中，每只攜帶有多胎基因的多浪羊供體平均沖出可用胚胎9.26枚，較以往超排獲得較高的出胚率。供體綿羊沖出可用胚胎的數(shù)量受到多種因素的影響，諸如營養(yǎng)狀況、年齡和公羊精夜品質等，攜帶有多胎基因是否是影響超排效果的因素有待于進一步驗證。

3.2 多浪羊母羊攜帶有純合子基因可能影響體況

通過基因檢測所選19只多浪羊供體母羊，2只攜帶有純合子基因，其余的攜帶有雜合子基因。2只純合子基因母羊，1只1歲，1只2歲。在同一羊群同樣飼養(yǎng)管理條件下，2只純合子母羊身體瘦弱，超數(shù)排卵后未沖出可用胚胎，其余雜合子母羊體況明顯優(yōu)于2只純合子母羊，且每只雜合子母羊均沖出可用胚胎。本次試驗中，由于攜帶有純合子基因母羊數(shù)量少，攜帶有純合子基因是否是影響母羊體況和超數(shù)排卵效果的一個因素有待于在以后的試驗中繼續(xù)驗證。

3.3 不同來源激素和超排劑量影響超排效果

本次試驗中，寧波三生藥業(yè)生產的FSH1倍劑量相較加拿大生產冷凍保存的過期藥品FSH1.2倍劑量超排生成平均黃體數(shù)和平均可用胚胎數(shù)分別提高1.34和1.61。此次試驗表明，F(xiàn)SH過期后在冰箱中冷凍保存，雖然仍具有良好的藥效，但是效力有所下降，超排后生成黃體數(shù)和可用胚胎數(shù)有所降低，從生產胚胎的效益和超排藥物的經濟成本核算來看，在超數(shù)排卵、胚胎移植中盡量避免使用過期超排藥品，而在生產中為充分利用藥品，可用過期超排藥品治療家畜卵巢靜止、排卵延遲等卵巢疾病，誘導家畜發(fā)情。

3.4 母羊體況影響超排效果

在胚胎生產、胚胎移植中供體母羊在不同的飼養(yǎng)管理條件下體況差異較大，即使在相同的飼養(yǎng)條件下，不同個體間體況也有差異。從本次試驗可以看出，體況良好和中等的母羊與體況較差的母羊生成黃體數(shù)和出胚胎數(shù)差異顯著。膘情良好、膘情中等和膘情差的母羊生成黃體數(shù)和生產可用胚胎數(shù)分別為19.22±6.61和12.44±7.32，15.80±5.54和10.00±4.74，8.60±2.97和2.80±4.65。母羊膘情好，出可用胚胎數(shù)多，母羊膘情差，出可用胚胎數(shù)少。當母羊膘情處于中等以下水平時，沖不出胚胎的母羊比例大幅增加，胚胎生產成本相對增加。供體母羊每做一次沖卵手術，子宮粘連的幾率增加，影響下次沖卵手術，因而母羊膘情較差時不建議做超數(shù)排卵和胚胎移植。

3.5 母羊年齡影響超排效果

本次試驗中，青年母羊和成年母羊通過超數(shù)排卵后生成的黃體數(shù)和獲得可用胚胎數(shù)分別為14.92± 7.71，8.00±7.31和15.16±5.04，12.00±6.35。成年母羊較青年母羊平均每只可用胚胎數(shù)增加4枚，在胚胎生產中對供體羊年齡的選擇具有指導意義。動物對激素的敏感性隨著年齡的增長而提高，但是高齡動物超排效果較差[5]。丁紅[6]等研究顯示，母羊在2.5～4.5歲之間，隨著年齡的增長可用胚數(shù)增加。。洪瓊花[7]等用3／4劑量的FSH相同的超排方案對育成羊進行超排，結果顯示，經產羊平均回收胚胎數(shù)明顯高于育成羊。周歲齡德國美利奴羊對超排敏感，較成年羊超排效果略差[8]。體內胚胎生產中經常遇到一種現(xiàn)象，青年母羊沖出未受精卵和退化胚胎較多，而成年母羊沖出未受精卵和退化胚胎較少，可能原因是外源激素更易擾亂青年母羊生殖激素水平，而對成年母羊影響較小，因而成年母羊更易提供胚胎發(fā)育的良好條件。

3.6 母羊體重影響超排效果

相同的飼養(yǎng)管理條件下，通常成年母羊體重大，體況好，青年母羊體重小，體況稍差，通常情況下，個體體重與體況呈正相關關系。青年母羊攝取的營養(yǎng)物質一部分用于自身的生長需要，一部分用來維持體況，因而青年母羊體況稍差。同時，成年母羊有穩(wěn)定的激素水平，因而超數(shù)排卵后獲得可用胚胎較多。

3.7 營養(yǎng)狀況影響超排效果

經過近些年來多批次超排羊出胚胎的結果來看，供體母羊在良好的營養(yǎng)狀況時出胚胎數(shù)量多，質量好，在低營養(yǎng)狀況時，出胚胎數(shù)量少，質量差；在超數(shù)排卵前供體注射適宜劑量的維生素ADE和亞硒酸鈉維生素E有助于胚胎數(shù)量和質量的提高。王峰等在2003年做不同營養(yǎng)狀況下的牛超排試驗，供體牛第一組259頭，飼喂青干草和每天補飼精料4 kg；第二組238頭，飼喂低營養(yǎng)的玉米稈，每天補飼只有2 kg左右。結果表明：第一組的平均可用胚數(shù)(5.90±3.01)枚，第二組平均可用胚數(shù)(3.48±2.97)枚，兩者之間差異極顯著(P＜0.01)[4]。

本次試驗提示，體況好、體重大的成年母羊較體況差、體重小的青年母羊經超數(shù)排卵后獲得較多的可用胚胎；在胚胎生產中應選用保存良好的未過期超排藥品；超數(shù)排卵、胚胎移植技術能夠迅速增加多浪羊多胎多羔基因，達到迅速擴群的目的。

[1]金森.多浪羊細管冷凍精液和超數(shù)排卵的研究[D]．烏魯木齊：新疆農業(yè)大學碩士學位論文，2008.

[2]王旭.多胎多浪羊及其F1高繁殖力候選基因研究[D]．烏魯木齊：新疆農業(yè)大學碩士學位論文，2010.

[3]龔成潤．新疆畜牧科學院志[M]．烏魯木齊：新疆人民出版社，1992．

[4]王峰，黃春華，張東，等.多種因素對牛超數(shù)排卵效果影響的研究[J]．中國農學通報，2013，（17）：19-24.

[5]李建棟，柏學進，吳鐵榮，等．淺析影響奶牛超排效果四項因素的研究[J]．養(yǎng)殖技術顧問，1997，(03)：7-9．

[6]丁紅，瑪依拉，楊冬梅，等．促卵泡素和年齡對綿羊超數(shù)排卵效果的影響[J]中國畜牧雜志，1998，（03）：18-20．

[7]洪瓊花，邵慶勇，馬興躍，等．山羊超數(shù)排卵與胚胎移植技術的研究與應用[J]．生物技術通報，2004，(4)：39～43．

[8]阿依努爾·亞森，董紅，陳靜波，等.胚胎移植在德國美利奴青年羊應用的初步研究[J].草食家畜2012，（4）：34-36.

Embryo Transfer in Dao-lang Sheep

ZHANG Guo-ting1,HUO Fei1,WANG Liao-yuan2,SIYITI2,SHEN Ming-ming2,CHEN Jing-bo1*
（1.Institute of Animal Science,Xinjiang Academy of Animal Science,Urumqi 830000,China;
2.Kashgar Livestock and Poultry Improvement Station,Kashgar 844000,China）

（object）The multiple-fetus gene of sheep has low carrying rate in dao-lang sheep breeds population,，In this study,dao-lang sheeps carrying multiple-fetus genes were selected as donor to carry out embryo transfer and propagation experiments to increase the number of dao-lang sheep group carrying multiple-fetus genes and,Improve the reproduction rate of dao-lang sheep and Breeding benefits,（method）Four rams and 19 ewes with multiple-fetus genes were selected by gene testing.Ovums obtained by Synchronous estrus and superovulation was transferred to dao-lang sheep recipients.in common yielding group by surgery collecting oyums and Laparoscopic transplantation technique.(Results)Average Donor producted 9.26 (176/19)embryos,The Pregnancy,rate of fresh embryo transfer was 59.5%,and 57 A-grade frozen embryos was producted.（conclusion）The result shows that the embryo transfer technique can be effectively applied in breeding production of sheep with multiple-fetus genes To achieve the purpose of rapid expansion group.

duo-lang sheep；multiple-fetus gene;embryo transfer

S814.8

A

1003－6377（2017）02－0023-05

新疆農財項目（2013年）“多浪羊多胎（多羔）新品系培育聯(lián)合育種計劃”

張國庭（1976-），男，助理研究員，碩士，主要從事家畜繁殖與胚胎工程研究。E-mail:zhangguoting3@sina.com

陳靜波（1956-），男，研究員，博士，主要從事家畜繁殖研究。E-mail:chenjb126@126.com

2016-12-11，

2017-01-17