王元智，馬芹，陸濤峰，張圓圓，楊春文，陳洪巖*

(1.中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150000；2.牡丹江師范學院，黑龍江牡丹江 157000)

研究報告

王元智1，馬芹1，陸濤峰1，張圓圓1，楊春文2，陳洪巖1*

(1.中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所，哈爾濱 150000；2.牡丹江師范學院，黑龍江牡丹江 157000)

目的 建立棕背的實驗室繁育方法，測定棕背生長和繁殖數據，為開展棕背實驗動物化研究提供基礎。方法 將黑龍江省牡丹江市牡丹峰林地的野生棕背引入實驗室，于大型硬壁式嚙齒動物負壓隔離器內進行人工飼育、繁殖，測定棕背生長和繁育數據，評價棕背實驗室繁育效果。結果 棕背在實驗室條件下可以實現(xiàn)人工飼育、繁殖。妊娠率54.55%,平均妊娠期為20.4 d(18～22 d)；一個繁殖期內平均繁殖2.9次，最高繁殖次數為7次，遠遠超過自然條件下所統(tǒng)計到的繁殖次數(1～4次)；平均窩產仔數(4.3±1.22)只，單窩最高產仔數為8只；幼仔離乳率94.8%，生長發(fā)育狀況良好。結論 實現(xiàn)了棕背的實驗室繁育，測定了棕背在實驗室條件下的生長和繁育數據，為棕背實驗動物化打下了基礎。

棕背；繁育；實驗動物化

1 材料與方法

1.1 動物來源

2015年7～10月份分3批引進共116只長白山亞種的野生棕背，由牡丹江師范學院于牡丹峰林地捕獲。牡丹峰林地位于黑龍江省牡丹江市郊東南，地處長白山脈和完達山脈相交的老爺嶺山系，東與太平嶺相接，西與張廣才嶺毗鄰，坐標為129°52′42″E，44°21′4″N。牡丹峰海拔1008 m，總面積約400 km2，為針闊混交林型，是天然次生林生態(tài)系統(tǒng)自然保護區(qū)。

1.2 動物捕獲及隔離檢疫

動物通過0.3%溶敵百蟲藥浴5 min，驅除體表寄生蟲(藥液滅菌處理)，再進行隔離觀察并取樣檢測。每只動物取咽拭子及直腸拭子于無菌生理鹽水管中，設計引物進行漢坦(流行性出血熱)病毒、森林腦炎病毒、普馬拉病毒和淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒檢測，死亡動物取血及組織進行檢測。

1.3 飼育器具

負壓隔離環(huán)境實驗動物使用設施專用飼育室一間【SYXK(黑)2011-022】，內置4臺大型硬壁式嚙齒動物負壓隔離器(避免動物攜帶未知疫病病原體擴散至環(huán)境并致工作人員感染)，其中3臺用于親代飼育，1臺用于離乳子代飼育。籠盒為標準大鼠繁殖籠，木質墊料經高壓滅菌，巢材為滅菌棉絮。

1.4 食性分析

采用胃內容物和糞便顯微分析法分析主要食物的類別。將分別于4月、7月和10月捕獲的棕背麻醉后測量體尺并解剖，取出胃內容物和直腸中的糞便，浸于70%酒精中保存。將保存的樣品取出后，放入蒸餾水、甘油和乳酚為1∶1∶1的混合液中，分開至肉眼可見的顆粒，用醋酸洋紅染色制成裝片標本，顯微鏡鏡檢胃內容物和糞便成分。在100倍下選取10個視野統(tǒng)計記錄植物、動物組織殘片，用碘化鉀染色判斷種子成分，計算各成分所占比例。

1.5 飼料調配

根據GB14924.1-2001實驗動物配合飼料通用質量標準、GB14924.3-2010實驗動物配合飼料營養(yǎng)成分，以及棕背食性分析結果，配制臨時飼喂飼料，營養(yǎng)成分為：水分7.82%，灰分7.45%，蛋白質23.09%，脂肪5.85%，磷0.78%，鈣1.80%，粗纖維4.02%。維持飼料為小鼠顆粒維持飼料，每周1次胡蘿卜塊；生長飼料在維持飼料的基礎上每周添加1次松籽；繁殖飼料為小鼠顆粒維持飼料，每日添加胡蘿卜塊、松籽、拌有雞蛋的軟料，每周補充維生素合劑。

1.6 環(huán)境控制與飼養(yǎng)管理

飼育室執(zhí)行GB14925-2010實驗動物環(huán)境及設施，全年溫度控制在(22±1)℃，濕度控制在60%～80%，光照周期16L∶8D，明期開始于每天2:00，am。飼養(yǎng)管理同清潔級小鼠飼養(yǎng)管理，動物自由采食及飲水，每周更換2次墊料，換下的籠盒、飲水瓶、墊料高壓滅菌后再清洗。工作人員著無菌防護服，防止未知傳染源傳染。

1.7 飼育繁殖方法

2 結果

2.1 檢測

2.2 毛色觀察

2.3 行為觀察

2.4 食性分析

圖1 棕背毛色觀察Fig.1 Observation of the Myodes rufocanus coat color

圖2 棕背喜食食物的類別分析Fig.2 Analysis of the diet type of Myodes rufocanus

2.5 生長情況

在生物學研究中，經常使用體重與身體大小指數(長軸)建立評估生理、營養(yǎng)狀況的指數，國內一般將這類指數稱為肥滿度。一般認為，同樣身體大小(長軸)的個體中，體重越大的個體生理和營養(yǎng)狀況越好，其肥滿度值也就越高[17]。肥滿度的計算采用公式：

式中：K為肥滿度；W為體重(g)；L代表體長(cm)，計算實驗室條件下，雌性成年棕背的肥滿度為2.20 g/cm3，雄性成年棕背的肥滿度為2.24 g/cm3，略小于相同季節(jié)野生成年棕背的平均肥滿度(雌性2.79 g/cm3，雄性2.83 g/cm3)[18]。

注：野生棕背各年齡組體重引自參考文獻[6]圖3 棕背生長曲線Note. The body weight of wild Myodes rufocanus was cited from reference [6]Fig.3 Growth curves of the Myodes rufocanus

2.6 繁殖情況

圖4 各月產仔總量Fig.4 The amount of birth in each month

3 討論

動物的育肥狀況除了與食物條件有關外，與氣候因素也有一定的關系。野外氣溫較低，動物需要增加脂肪、體重、減少熱量散失，以適應寒冷的環(huán)境。本研究發(fā)現(xiàn)，經過人工飼養(yǎng)的棕背在體重和體長的指標上均超過了野生狀態(tài)下的棕背，而在肥滿度的指標上卻略低于野生棕背，表明人工飼養(yǎng)的棕背在體型大小上較野生棕背有明顯增加，而在體脂的積累上并沒有明顯增加，這種現(xiàn)象跟所處的環(huán)境有直接的相關性。實驗室條件下，充足的飲食和恒定的溫度、濕度環(huán)境，使得棕背不再需要自身儲存過多能量抵御寒冷。同時，也說明人工飼養(yǎng)條件能夠滿足棕背的生理需要，也能使棕背發(fā)揮出最佳的生產性能。

另外，在實際操作中，本研究參與人員也開展了尾靜脈血液采集、被毛采集、腹腔注射、眼球采血等實驗操作，在淺度麻醉與適度保定條件下，相關操作均能正常開展，說明野生棕背經實驗室馴化后可以作為實驗動物開展相關研究工作。

[1] 羅澤珣.中國動物志:獸綱,第六卷[M].北京:科學出版社,2000.

[2] 魏仰華,王風臣,何亦祥,等.大林姬鼠棕背引起流行性出血熱爆發(fā)流行調查報告[J].人民軍醫(yī),1983,11:26-19.

[3] 姚李四.中朝長白山毗鄰口岸區(qū)域鼠類和體表寄生蟲及其攜帶病原初步研究[D].長春:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院,2012.

[4] 耿英芝,姚文清,劉蕓,等.遼寧省普馬拉病毒檢測及基因特征分析[J].中國病原生物學雜志,2012,7(6):426-428.

[5] 華滿堂,金兆清,何成,等.新疆哈巴河鐵熱克提林牧區(qū)棕背攜帶伯氏疏螺旋體的研究[J].中國人獸共患病雜志,2000,16(3):110.

[7] Chen Y, Dong Y, Xiang X, et al.Sex determination of Microtus mandarinus mandarinus is independent of Sry gene[J]. Mamm Genome.2008,19: 61-68.

[8] Sadowska ET, Baliga-Klimczyk K, Chrzascik KM, et al.Laboratory model of adaptive radiation: a selection experiment in the bank vole[J]. Physiol Biochem Zool,2008,81: 627-640.

[9] Chrzascik KM, Sadowska ET, Rudolf A, et al.Learning ability in bank voles selected for high aerobic metabolism, predatory behaviour and herbivorous capability[J]. Physiol Behav,2014,135: 143-151.

[10] Sadowska ET, Stawski C, Rudolf A, et al. Evolution of basal metabolic rate in bank voles from a multidirectional selection experiment[J]. Proc Biol Sci,2015,282(1806):20150025. doi: 10.1098/rspb.2015.0025.

[11] Matsuzaki T, Wakana S, Ebukuro S,et al.Laboratory breeding of the red-backed vole (Clethrionomys rufocanus bedfordiae)[J].Jikken Dobutsu,1992,41(2).

[12] 戴麗軍,韋永芳,梁成結,等.普通級長爪沙鼠封閉群的建立[J].廣州醫(yī)學院學報,2001,29(4):25-27.

[13] 柏熊,邢正弘,沈志敏,等.東方田鼠人工繁育觀察[J].實驗動物與比較醫(yī)學,2006,26(4):242-244.

[14] 梁虹,潘思丹,施海霞,等.布氏田鼠封閉群建立及繁殖特性研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2009,19(12):2767-2769.

[15] 李貴,嚴曄,常云艷,等.樹鼩實驗室繁殖的新方法[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2009,(3):18-21.

[16] 鄭強,林永紅.野生動物實驗動物化的研究概況[N].地方病通報,1996,11(增刊):83-88.

[17] 戴強,戴建洪,李成,等.關于肥滿度指數的討論[J].應用與環(huán)境生物學報,2006,12(5):715-718.

[19] 孫儒泳,張玉書,方喜葉.嚙齒類繁殖生態(tài)研究中雄性繁殖強度的意義[J].動物學報,1977,23(2):187-200.

[21] 楊可興.黑龍江省獸類志[M].哈爾濱:黑龍江科學技術出版社,1986:305-316.

A standardized breeding study of gray red-backed voles(Myodesrufocanus)in the laboratory

WANG Yuan-zhi1, MA Qin1, LU Tao-feng1, ZHANG Yuan-yuan1, YANG Chun-wen2, CHEN Hong-yan1*

(1. State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150000, China; 2.College of Life Science and Technology, Mudanjiang Normal University, Mudanjiang 157000)

Objective To establish a breeding method ofMyodesrufocanusin the laboratory, collect their growth and reproduction data, and provide a basis for carrying out the experimental animalization.Methods WildMyodesrufocanuscaught in the Moranbong woodland were brought back to the laboratory. They were bred artificially in a large hard wall rodent negative pressure isolator. Their growth and reproduction data were recorded for evaluating the results of breeding. Results TheMyodesrufocanuswere successfully bred in the laboratory. The pregnancy rate was 54.55%.The average pregnancy length was 20.4 days(8 to 22 days). During one breeding period,they gave birth 2.9 times on average. The maximum number of births was 7 times,far more than the number tested under field conditions.The average litter size was 4.3±1.22. The highest litter number of a single nest was 8. The weaning rate of pups was 94.8%. The growth and development of pups were good. Conclusions The breeding method forMyodesrufocanusis established. The growth and reproduction data are tested too. The results of our study laid a foundation for the experimental animalization ofMyodesrufocanus.

Myodesrufocanus; Breeding; Experimental animalization

CHEN Hong-yan, E-mail: chenhongyan@caas.cn

哈爾濱市實驗動物質量檢測平臺(編號：2014QA3BN002)；國家科技支撐計劃(編號：2015BAI07B02-02)。

王元智(1991-)，男，碩士研究生，專業(yè)：獸醫(yī)學。E-mail: 282216566@qq.com

陳洪巖(1963-)，男，研究員，研究方向：實驗動物與比較醫(yī)學。E-mail： chenhongyan@caas.cn

Q95-33

A

1005-4847(2017) 02-0169-05

10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.010

2016-12-21