胡 萍，牛建平，宋葉華，彭瑞強(qiáng)，徐 娜，張奕文，陳新僑

脈血康軟膠囊對(duì)缺血性腦卒中病人MMP-9、Hcy表達(dá)的影響

胡 萍，牛建平，宋葉華，彭瑞強(qiáng)，徐 娜，張奕文，陳新僑

目的 觀察脈血康軟膠囊對(duì)缺血性腦卒中病人血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、同型半胱氨酸(Hcy)的影響。方法 入組病人67例，隨機(jī)分為試驗(yàn)組(35例)和對(duì)照組(32例)，另選30名健康人作為健康組，觀察所有研究對(duì)象第1天、第7天和第14天的MMP-9、Hcy及美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分變化。結(jié)果 試驗(yàn)組和對(duì)照組組內(nèi)第7天、第14天和第1天MMP-9水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；試驗(yàn)組和對(duì)照組組間第7天MMP-9水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018)。試驗(yàn)組與對(duì)照組第1天Hcy水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但均高于健康組；兩組與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其水平均在正常范圍內(nèi)，兩周內(nèi)呈逐漸下降的趨勢；試驗(yàn)組和對(duì)照組組間第7天Hcy水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012)；與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。血清Hcy水平與NIHSS評(píng)分進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)，r=0.507，P=0.002；r=0.206，P=0.025。結(jié)論 MMP-9、Hcy在缺血性腦卒中病人明顯升高，呈動(dòng)態(tài)變化，其中Hcy水平增高和單核細(xì)胞表面TLR4高表達(dá)與缺血性腦卒中嚴(yán)重程度密切相關(guān)，MMP-9水平的變化與腦卒中的評(píng)分表現(xiàn)出一致性，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脈血康軟膠囊可降低MMP-9、Hcy水平，改善缺血性腦卒中病人的臨床癥狀。

缺血性腦卒中；脈血康軟膠囊；美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表；基質(zhì)金屬蛋白酶-9；同型半胱氨酸

腦卒中是臨床上常見的腦血管病，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上列為死亡的第三大原因[1]。腦卒中病人約80%是缺血性腦卒中。至今沒有發(fā)現(xiàn)一類生物標(biāo)志物具有足夠的靈敏度和特異性應(yīng)用缺血性腦卒中的臨床診斷或在臨床運(yùn)用。大量研究證明基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)、同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是缺血性腦卒中發(fā)病和死亡的危險(xiǎn)因素，且這些指標(biāo)日益引起關(guān)注。國內(nèi)外研究對(duì)其研究多以基礎(chǔ)研究為主，臨床應(yīng)用及報(bào)道較少。

脈血康軟膠囊主要活性成分為水蛭素。水蛭素是高度特異性凝血酶抑制劑，能阻止纖維蛋白原活化和纖維蛋白凝固，抑制血小板結(jié)合血管內(nèi)皮膠原蛋白，抑制血小板黏附和聚集[2]。本研究觀察急性缺血性腦卒中病人第1天、第7天和第14天MMP-9、Hcy及美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評(píng)分變化，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用脈血康軟膠囊治療，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年6月—2015年12月廈門市第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院病人67例，所有病例均符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議標(biāo)準(zhǔn)(1995)和中國缺血性卒中亞型大動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)。隨機(jī)分為兩組，試驗(yàn)組35例，男22例，女13例，年齡66.79歲±6.64歲；對(duì)照組32例，男19例，女13例，年齡64.97歲±4.82歲。選取同期在我科門診健康體檢者30名作為健康組，男17名，女13名，年齡30.84歲±4.57歲。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡41歲～75歲；首發(fā)卒中；發(fā)病到入院≤3 d；NIHSS評(píng)分1分～15分。排除標(biāo)準(zhǔn)：溶栓病人；合并有明顯肝、腎或心功能衰竭病人發(fā)病前后有炎性感染性疾病病人；風(fēng)濕免疫系統(tǒng)疾病及腫瘤；近3個(gè)月內(nèi)患有血管閉塞性疾病；病人同意入組但不簽署知情同意書。

1.3 治療方法 所有病人均按照《中國腦血管病防治指南》進(jìn)行基礎(chǔ)治療，具體療程14 d。對(duì)照組：丹參酮(批號(hào)：國藥準(zhǔn)字H31022558，上海第一生化藥業(yè)有限公司)30 mg，靜脈輸注，每日1次；依拉達(dá)奉注射液(批號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20080056，國藥集團(tuán)國瑞藥業(yè)有限公司)30 mg，靜脈輸注，每日2次。試驗(yàn)組：在對(duì)照組治療基礎(chǔ)上加用脈血康軟膠囊(批號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z20033197，貴州信邦制藥股份有限公司)，每次3粒，每日3次，餐后口服。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察兩組病人第1天、第7天和第14天MMP-9、Hcy及NIHSS評(píng)分變化及健康組上述指標(biāo)的基礎(chǔ)值。ELISA檢測MMP-9(Catalog Number：SMP900，RD)，嚴(yán)格按照實(shí)際說明操作；Hcy由檢驗(yàn)科

專業(yè)技師完成。

1.5 不良反應(yīng) 兩組病人在治療過程中有無出血、過敏、休克等不良反應(yīng)。

2 結(jié) 果

2.1 各組一般資料比較 各組年齡、性別、NIHSS評(píng)分、血壓、血脂等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 各組一般資料比較

2.2 3組MMP-9水平比較 試驗(yàn)組和對(duì)照組MMP-9水平兩周內(nèi)呈逐漸下降的趨勢，兩組組內(nèi)第7天、第14天和第1天MMP-9水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組組間比較，試驗(yàn)組第1天與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.603，P=0.551)；兩組第1天分別與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。試驗(yàn)組第7天MMP-9水平低于對(duì)照組，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.500，P=0.018)；試驗(yàn)組第14天MMP-9水平低于對(duì)照組，與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.223，P=0.230)；但兩組第14天MMP-9水平與健康組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

組別n第1天第7天第14天試驗(yàn)組3510.04±3.652)7.45±1.481)3)5.06±1.371)對(duì)照組3210.58±3.952)8.95±3.301)5.40±1.461)健康組304.71±1.54 與同組第1天比較,1)P<0.05;與健康組比較,2)P<0.05;與對(duì)照組第7天比較,3)P<0.05。

2.3 3組血清Hcy水平比較 試驗(yàn)組和對(duì)照組血清Hcy水平基本在正常范圍內(nèi)，且在兩周內(nèi)呈逐漸下降的趨勢，第1天、第7天Hcy水平均高于健康組，分別與健康組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。試驗(yàn)組和對(duì)照組組內(nèi)第7天、第14天和第1天Hcy水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。試驗(yàn)組第14天Hcy水平基本接近健康組，與健康組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；對(duì)照組第14天Hcy水平高于健康組，與健康組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。試驗(yàn)組與對(duì)照組第1天組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.290，P=0.774)，第7天組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.660，P=0.012)，第14天組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.670，P=0.105)。詳見表3。

表3 3組血清Hcy水平比較(±s) mg/L

2.4 試驗(yàn)組和對(duì)照組NHISS評(píng)分比較 試驗(yàn)組和對(duì)照組NIHSS評(píng)分2周內(nèi)均呈下降趨勢，兩組組內(nèi)第7天、第14天和第1天NIHSS評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組組間NIHSS評(píng)分第1天比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.028，P=0.312)；第7天比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.924，P=0.362)；第14天比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.380，P=0.024)。詳見表4。

表4 試驗(yàn)組和對(duì)照組 NHISS評(píng)分比較(±s) 分

2.5 相關(guān)性分析 試驗(yàn)組和對(duì)照組MMP-9水平與缺血性腦卒中NIHSS評(píng)分相關(guān)性檢驗(yàn)，分別為r=0.034，P=0.862；r=0.140，P=0.446，提示MMP-9水平與缺血性腦卒中嚴(yán)重程度無顯著相關(guān)性；試驗(yàn)組和對(duì)照組血清Hcy水平與缺血性腦卒中NIHSS評(píng)分相關(guān)性檢驗(yàn)，分別是(r=0.507，P=0.002；r=0.206，P=0.025)，提示Hcy水平增高與缺血性腦卒中嚴(yán)重程度有顯著相關(guān)性。

3 討 論

據(jù)2010年統(tǒng)計(jì)，全球腦卒中的發(fā)病人數(shù)為3 300萬人，其中死亡人數(shù)為1 690萬，大約三分之一是致命的，占全世界死亡總數(shù)的11%，也是全球死亡和殘疾的主要原因之一[3-4]。

MMP-9又叫做92kDa酶，是Destin Beach在基質(zhì)金屬蛋白酶學(xué)術(shù)會(huì)議上提出并命名的[5]。MMP-9是調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular ma-trix，ECM)動(dòng)態(tài)平衡的最主要酶系，發(fā)揮降解和再塑造血管壁分泌細(xì)胞外基質(zhì)的作用。MMP-9失衡導(dǎo)致血管壁結(jié)構(gòu)變化[6-8]，該變化超過血管代償能力引起斑塊不穩(wěn)定，進(jìn)而破裂形成附壁血栓，最終導(dǎo)致缺血性腦卒中的發(fā)生。本研究試驗(yàn)組和對(duì)照組第1天MMP-9水平明顯高于健康組，其產(chǎn)生機(jī)制如上所述，也與Zhao等[9]研究腦卒中病人血清基質(zhì)金屬蛋白酶大量表達(dá)的結(jié)果一致。進(jìn)一步證據(jù)表明，MMP-9局部過量表達(dá)是通過增加細(xì)胞因子的刺激和組織因子介導(dǎo)的凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的[10]?；A(chǔ)試驗(yàn)及臨床觀察均提示一些藥物不僅可降低不同細(xì)胞MMP-9的表達(dá)及活性，且影響MMP-9釋放[11-13]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過脈血康軟膠囊治療腦卒中干預(yù)的試驗(yàn)組MMP-9水平較對(duì)照組下降明顯，試驗(yàn)組第7天與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.018)；兩組第7天、第14天MMP-9水平呈下降趨勢，且第14天MMP-9水平與健康組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脈血康可顯著降低MMP-9，機(jī)制可能如上述所述，但具體途徑尚待進(jìn)一步研究。

大量研究實(shí)驗(yàn)及流行病學(xué)調(diào)查顯示，Hcy升高是心血管疾病的一個(gè)重要獨(dú)立的危險(xiǎn)因素，且進(jìn)一步證明Hcy可擾亂銅(Cu)穩(wěn)態(tài)，降低Cu利用率，嚴(yán)重引起線粒體Cu-依賴酶(CCO)活性下降，使參與線粒體呼吸鏈反應(yīng)電子傳遞無法進(jìn)行，進(jìn)而伴隨線粒體膜電位Hcy處理細(xì)胞的崩潰，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的裂解，使細(xì)胞內(nèi)Hcy大量釋放到血液中，引起Hcy水平升高[14]。一項(xiàng)薈萃分析研究報(bào)告說明空腹Hcy每升高3 μmol/L，缺血性心臟疾病發(fā)病率增加11%和中風(fēng)發(fā)病率增加19%，同型半光氨酸血癥增加中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)5倍，且Hcy每增加2.5 μmol/L中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)可增加約20%[15-17]。本研究試驗(yàn)組和對(duì)照組第1天血清Hcy含量顯著高于健康組，并且隨著神經(jīng)功能缺損程度減少，血清Hcy水平明顯下降，且血清Hcy與神經(jīng)功能缺損有相關(guān)性(r=0.347，P=0.004)，提示Hcy水平升高與腦卒中病情發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)，進(jìn)一步提示Hcy可作為腦卒中的預(yù)警因子，其水平升高可能是導(dǎo)致腦卒中病人血液黏度升高的主要原因。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組與對(duì)照組第1天Hcy水平雖然均在正常范圍內(nèi)，但是通過藥物干預(yù)后，兩組Hcy水平在兩周內(nèi)仍呈逐漸下降趨勢，且相關(guān)性檢驗(yàn)顯示Hcy水平增高與NIHSS評(píng)分顯著相關(guān)，提示目前臨床使用的正常值范圍可能不適于腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，選擇更低的目標(biāo)值可能有利于卒中的預(yù)防，同時(shí)Hcy水平高低與卒中的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，提示該指標(biāo)可能預(yù)測進(jìn)展性卒中，其有待進(jìn)一步擴(kuò)大研究樣本量證實(shí)。試驗(yàn)組和對(duì)照組第14天Hcy水平與健康組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；試驗(yàn)組與對(duì)照組第7天組間Hcy水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；試驗(yàn)組與對(duì)照組第14天組間Hcy水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示脈血康膠囊可能更有效下調(diào)血清Hcy水平，從而改善腦卒中的臨床癥狀。

綜上所述，根據(jù)本研究結(jié)果認(rèn)為MMP-9、Hcy水平增高與缺血性腦卒中發(fā)生密切相關(guān)，提示MMP-9、Hcy聯(lián)合監(jiān)測可比單一指標(biāo)監(jiān)測更有效預(yù)測腦卒中，Hcy水平高表達(dá)與缺血性腦卒中嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，提示其更有效地預(yù)測病情的進(jìn)展，反映病情的嚴(yán)重程度，預(yù)測和判斷預(yù)后。MMP-9水平變化與腦卒中的評(píng)分雖表現(xiàn)出一致性，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示其可能參與缺血性腦卒中發(fā)生的慢性病理生理過程，與腦卒中發(fā)生有一定的關(guān)聯(lián)，但不是腦卒中急性期病理生理變化的主要炎癥介質(zhì)。通過藥物干預(yù)后兩組NHISS評(píng)分在治療周期內(nèi)逐漸下降，表明降低Hcy、MMP-9水平可改善缺血性腦卒中病人臨床癥狀。本研究試驗(yàn)組NIHSS評(píng)分下降程度明顯高于對(duì)照組，說明試驗(yàn)組比對(duì)照組能更顯著降低Hcy、MMP-9水平，提示中藥脈血康膠囊可通過降低上述指標(biāo)從而改善缺血性腦卒中病人臨床癥狀。

[1] Nabavi SF，Sureda A，Habtemariam S，et al.Ginsenoside Rd and ischemic stroke；a short review of literatures[J].J Ginseng Res，2015，39(4)：299-303.

[2] Nabavi SF，Turner A，Dean O，et al.Post-stroke depression therapy：where are we now?[J].Curr Neurovasc Res，2014，11(3)：279-289.

[3] Feigin VL，F(xiàn)orouzanfar MH，Krishnamurthi R，et al.Global and regional burden of stroke during 1990-2010：findings from the Global Burden of Disease Study 2010[J].Lancet，2014，383(9913)：245-254.

[4] Shim R，Wong CH.Ischemia，immunosuppression and infection-tackling the predicaments of post-stroke complications[J].Int J Mol Sci，2016，17(1)：551-556.

[5] Nagase H，Barrett AJ，Woessner JJ.Nomenclature and glossary of the matrix metalloproteinases[J].Matrix，1992(Suppl 1)：421-424.

[6] Raffetto JD，Khalil RA.Matrix metalloproteinases and their inhibitors in vascular remodeling and vascular disease[J].Biochem Pharmacol，2008，75(2)：346-359.

[7] Glagov S，Weisenberg E，Zarins CK，et al.Compensatory enlargement of human atherosclerotic coronary arteries[J].N Engl J Med，1987，316(22)：1371-1375.

[8] Mcpherson DD，Sirna SJ，Hiratzka LF，et al.Coronary arterial remodeling studied by high-frequency epicardial echocardiography：an early compensatory mechanism in patients with obstructive coronary atherosclerosis[J].J Am Coll Cardiol，1991，17(1)：79-86.

[9] Zhao BQ，Wang S，Kim HY，et al.Role of matrix metalloproteinases in delayed cortical responses after stroke[J].Nat Med，2006，12(4)：441-445.

[10] Morishige K，Shimokawa H，Matsumoto Y，et al.Overexpression of matrix metalloproteinase-9 promotes intravascular thrombus formation in porcine coronary arteries in vivo[J].Cardiovasc Res，2003，57(2)：572-585.

[11] Copin JC，Merlani P，Sugawara T，et al.Delayed matrix metalloproteinase inhibition reduces intracerebral hemorrhage after embolic stroke in rats[J].Exp Neurol，2008，213(1)：196-201.

[12] Izidoro-Toledo TC，Guimaraes DA，Belo VA，et al.Effects of statins on matrix metalloproteinases and their endogenous inhibitors in human endothelial cells[J].Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，2011，383(6)：547-554.

[13] Lakhan S E，Bagchi S，Hofer M.Statins and clinical outcome of acute ischemic stroke：a systematic review[J].Int Arch Med，2010，3(1)：22.

[14] Luo X，Xiao Y，Song F，et al.Increased plasma S-adenosyl-homocysteine levels induce the proliferation and migration of VSMCs through an oxidative stress-ERK1/2 pathway in apoE(-/-) mice[J].Cardiovasc Res，2012，95(2)：241-250.

[15] Smulders YM，Blom HJ.The homocysteine controversy[J].J Inherit Metab Dis，2011，34(1)：93-99.

[16] Kalani A，Kamat PK，Tyagi SC，et al.Synergy of homocysteine，microRNA，and epigenetics：a novel therapeutic approach for stroke[J].Mol Neurobiol，2013，48(1)：157-168.

[17] He Y，Li Y，Chen Y，et al.Homocysteine level and risk of different stroke types：a meta-analysis of prospective observational studies[J].Nutr Metab Cardiovasc Dis，2014，24(11)：1158-1165.

(本文編輯薛妮)

廈門市科技局立項(xiàng)課題(No.3502Z20139013)

福建省廈門市第二醫(yī)院(福建廈門 361021)

牛建平，E-mail：549872685@qq.com

R743 R289.5

B

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.08.030

1672-1349(2017)08-0994-04

2016-10-12)

引用信息：胡萍，牛建平，宋葉華，等.脈血康軟膠囊對(duì)缺血性腦卒中病人MMP-9、Hcy表達(dá)的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2017，15(8)：994-997.