譚燕華 謝翔 夏啟玉 張麗麗 霍姍姍 張家明 郭安平

摘 要 玉米種子含有豐富的磷，但大部分磷以植酸磷的形式存在，難以被豬和禽類等單胃動物利用。轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米是中國唯一獲得安全證書的轉(zhuǎn)基因玉米，含有高濃度的植酸酶，能夠提高動物對植酸磷的利用率；減少排泄物對環(huán)境的污染，具有商業(yè)化種植前景。轉(zhuǎn)基因作物需要進行必要的安全評價。本文綜述了近年來轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米安全性評價研究，主要包括轉(zhuǎn)植酸酶基因和目標蛋白的檢測、食用安全性評價、環(huán)境安全評價及非預期影響的研究，并對轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米應用及安全評價體系的發(fā)展作了展望。

關(guān)鍵詞 轉(zhuǎn)基因玉米；安全評價；植酸酶

中圖分類號 S514 文獻標識碼 A

Abstract Maize is one of the most important feed crops in China and it is rich in phosphorus. However， most phosphorus is trapped in phytate phosphorus and which is difficult to be used by animals such as pigs and poultry. Phytase transgenic maize contains high concentration of phytase and can increase the phosphate uptake of animals， which is the only transgenic maize that has been officially issued with a biosafety certificate in China and has great potential in the animal feed industry. Genetically modified crops should carry out safety evaluation before commercial application. In this article， we mainly reviewed the safety evaluation of phytase transgenic maize in recent years， including phytase gene and protein detection， food safety evaluation， environmental safety evaluation， and unintended effects. The application of phytase transgenic maize and the development of safety evaluation system were also discussed.

Key words Transgenic maize； safety evaluation； phytase

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.11.032

玉米是我國重要的糧食和飼料用作物，生產(chǎn)中每年大約80%的玉米用于飼料行業(yè)。磷是動物生長發(fā)育不可缺少的元素之一，玉米中含有豐富的磷，但大部分的磷是以植酸磷的形式存在，這種形式存在的磷難以被豬和禽類等單胃動物利用。因此，能夠增加動物磷酸鹽攝取的轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米，對養(yǎng)殖業(yè)顯得非常重要和有必要。植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸鹽的酶的總稱，是一種可使植酸磷復合物中的磷變成可利用磷的酸性磷酸酯酶。陳茹梅等用玉米胚特異性球蛋白-1啟動子在玉米種子中過表達黑曲霉（Aspergillus niger）菌株的植酸酶基因，得到了含有高濃度植酸酶的轉(zhuǎn)基因玉米，其植酸酶活性達到約2 200 U/kg種子，比非轉(zhuǎn)基因玉米種子約增加了50倍[1]，完全能滿足生產(chǎn)應用需要，可以替代傳統(tǒng)方式中用微生物發(fā)酵生產(chǎn)的植酸酶[2]。目前，轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米是我國唯一獲得安全證書的轉(zhuǎn)基因玉米，但還未進行商業(yè)化種植。轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化種植前必須進行必要的安全評價。近年來，已對轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米安全性評價進行了許多研究。

1 植酸酶基因玉米轉(zhuǎn)化事件和目標蛋白的檢測

隨著轉(zhuǎn)植酸酶基因作物的開發(fā)和對轉(zhuǎn)基因作物的監(jiān)管要求，需要準確地對產(chǎn)品進行驗證[3]。為了對轉(zhuǎn)基因作物目標基因進行檢測，已對轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米進行了定性、定量PCR檢測技術(shù)方法的研究[4-5]，農(nóng)業(yè)部已于2012年頒布了植酸酶基因玉米定性PCR檢測技術(shù)標準（農(nóng)業(yè)部 1782 號公告-11-2012），詳細的方法見表1。李俊等以真菌來源的植酸酶基因為研究對象，建立了植酸酶基因的特異性檢測方法，可檢測各種含有該基因的轉(zhuǎn)基因作物；同時還構(gòu)建了陽性質(zhì)粒分子pBS Endogenous-phytase，可作為轉(zhuǎn)植酸酶基因作物的檢測陽性材料[6]（圖1）。

酵母中表達和純化的phyA2蛋白被糖基化，其分子量約為75 ku；去糖基化蛋白的分子量從氨基酸序列預測約為55 ku；植酸酶蛋白在轉(zhuǎn)基因玉米種子樣品中顯示的帶約60 ku[1]。對目標蛋白植酸酶蛋白的檢測進行了ELISA、Western blot、免疫親和層析等多種方法的研究[7-8]。閆廣為等用60%～80%硫酸銨分級沉淀植酸酶，得到的植酸酶比活要比粗提液高6.1倍[8]。種子中提取的轉(zhuǎn)植酸酶基因蛋白帶在SDS-PAGE不分離[1]，趙倩倩等用80%硫酸銨沉淀植酸酶蛋白粗提液，透析后再通過免疫親和層析得到了在 SDS-PAGE膠上單一條帶的植酸酶蛋白[7]。Zhou等開發(fā)了一種快速免疫層析側(cè)流裝置，運用4種單克隆抗體（EH10a，F(xiàn)A7，AF9a，和CC1），能夠快速檢測出轉(zhuǎn)基因玉米中重組尼日爾曲霉phyA2表達蛋白[9]（圖2）。

2 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米食用安全性評價

對轉(zhuǎn)基因植酸酶玉米進行食用安全性評價時，首先比較了轉(zhuǎn)基因植酸酶玉米與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ沼衩谞I養(yǎng)成分的差異。轉(zhuǎn)基因玉米與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ沼衩紫啾龋谥饕煞郑ǖ鞍踪|(zhì)、脂肪、氨基酸、淀粉、水分、灰分等）、微量營養(yǎng)成分（礦物質(zhì)、維生素）等方面，沒有生物學意義上的差異，具有實質(zhì)等同性。但轉(zhuǎn)基因玉米中植酸酶活性明顯高于非轉(zhuǎn)基因玉米，非植酸磷含量比非轉(zhuǎn)基因玉米高1倍[10]。Gao等報道，轉(zhuǎn)基因植酸酶玉米與常規(guī)玉米相比，植酸酶活性有顯著差異（p<0.001），但化學成分差異不顯著。其中粗蛋白、總能量、總脂肪、灰分和礦物質(zhì)含量差異不顯著（p>0.05）；氨基酸分析顯示2種玉米的氨基酸含量也相似（p>0.05）。不過2種玉米在濕度上有顯著性差異（p<0.001）[11]。

食用安全性分析顯示，轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米作為飼料喂養(yǎng)肉仔雞，對其生長性能[12]、血清生理生化指標、免疫器官發(fā)育及免疫功能[13]均無不良影響，未出現(xiàn)“非期望效應”；對蛋雞的產(chǎn)蛋性能和雞蛋品質(zhì)均無影響[14-16]。對長期（50周）喂養(yǎng)植酸酶轉(zhuǎn)基因玉米的蛋雞檢測了食糜、血液、組織、和雞蛋中的轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源植物DNA片段和蛋白質(zhì)，分析發(fā)現(xiàn)phyA2基因和蛋白在消化道很快降解，沒有在血液、組織和雞蛋中檢測到phyA2基因和蛋白[15]。喂食轉(zhuǎn)基因玉米比喂食非轉(zhuǎn)基因玉米的豬含有著更容易消化和代謝的能量以及更高的的消化率[17]。飼糧中使用轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米有利于提高生長豬的生長性能[14]。因此飼喂轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米與常規(guī)玉米是同等安全的，且轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米可提高單胃動物對日糧中磷的利用率，從而減少日糧中無機磷的添加量，節(jié)約磷資源，降低磷的排出對環(huán)境造成的污染。

3 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米環(huán)境安全性評價

對轉(zhuǎn)基因植酸酶玉米環(huán)境安全性評價的研究也是研究的熱點。目前對轉(zhuǎn)植酸酶玉米進行環(huán)境安全性評價的研究主要是花粉介導的外源基因漂移以及對生物多樣性的影響；對生物多樣性的影響包括對節(jié)肢動物生物多樣性的影響以及對土壤微生物多樣性的影響。

轉(zhuǎn)基因玉米花粉擴散的頻率和距離受環(huán)境影響，在不同日期、不同氣象條件下，花粉漂移擴散的距離不盡相同。趙宗潮等采用花粉染色法研究了轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米花粉的擴散頻率和距離，結(jié)果表明，花粉擴散的風險概率在不同方位有不同，擴散的頻率隨著距離增加而降低；在試驗期間花粉擴散的最遠距離可達35 m[18]。

對田間節(jié)肢動物種群動態(tài)及多樣性的影響研究表明，轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米的種植未對田間主要害蟲和天敵種群動態(tài)產(chǎn)生顯著影響[19-20]；對亞洲玉米螟和棉鈴蟲的生長和營養(yǎng)利用均無影響[21]；對步甲物種多樣性及常見物種沒有明顯影響[22]。

對土壤生物的群落結(jié)構(gòu)和多樣性研究表明轉(zhuǎn)植酸酶玉米的田間種植未對土壤線蟲的生態(tài)指標和群落結(jié)構(gòu)造成直接影響[23]。同一時期同一種微生物數(shù)量在種植轉(zhuǎn)植酸酶玉米、非轉(zhuǎn)基因玉米及空白土壤中基本相同[24]；對土壤酶活性的影響中土壤蔗糖酶、土壤蛋白酶及土壤脲酶活性均無顯著影響；而對土壤酸性磷酸酶活性有顯著影響，轉(zhuǎn)植酸酶玉米的土壤酸性磷酸酶活性顯著高于親本非轉(zhuǎn)植酸酶玉米的土壤，這說明轉(zhuǎn)植酸酶玉米顯著提高了土壤酸性磷酸酶的活性，進而對土壤中磷酸酯的水解會起到一定的促進作用[25]。

4 非預期影響的評價

轉(zhuǎn)基因作物由于導入外源基因而使植物基因組發(fā)生改變，可能會導致意想不到的影響，從而影響人類的健康或環(huán)境[26]，隨著轉(zhuǎn)基因作物的商業(yè)化，這些非預期的未知影響是轉(zhuǎn)基因作物生物安全研究的熱點之一。評價非預期影響中，高通量的“組學”技術(shù)比有目標分析評價具有優(yōu)勢[27-28]，包括轉(zhuǎn)錄組學、代謝組學、蛋白質(zhì)組學等。其中蛋白質(zhì)直接參與代謝和細胞的生長，多數(shù)外源基因的表達或調(diào)控產(chǎn)物是蛋白質(zhì)[29]，一些毒素、抗營養(yǎng)因子或過敏原等蛋白還可能對人體健康產(chǎn)生很大的影響。因此，從蛋白質(zhì)組學上對轉(zhuǎn)基因作物生物安全性進行非預期影響評價非常重要[30]。

在轉(zhuǎn)基因玉米的非預期影響研究中，由于抗蟲轉(zhuǎn)基因玉米MON810在商業(yè)上的重要性，其與對照的非預期影響已被廣泛的研究，分別從轉(zhuǎn)錄組學[31-34]、代謝組學[35-38]、蛋白質(zhì)組學上[39-42]進行了比較研究，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因玉米MON810在轉(zhuǎn)錄組水平、代謝水平、蛋白質(zhì)水平上與其對照常規(guī)玉米具有實質(zhì)等同性。

我們對轉(zhuǎn)植酸酶玉米進行了比較蛋白質(zhì)組學研究，獲得了轉(zhuǎn)植酸酶玉米葉片和種子的總蛋白2DE圖譜，其中葉片鑒定了44個差異蛋白，COG功能分類表明這些差異蛋白主要與碳水化合物的轉(zhuǎn)運與代謝相關(guān)，其次與翻譯后修飾相關(guān)；KEGG分析顯示差異蛋白主要是參與光合作用的碳固定途徑[43]。利用2DE-MS/MS和iTRAQ技術(shù)一共鑒定了148個差異蛋白，COG功能分類表明差異蛋白主要是參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控與轉(zhuǎn)錄后修飾的蛋白[44]。與傳統(tǒng)育種的作物相比，轉(zhuǎn)植酸酶玉米葉片與常規(guī)玉米葉片具有實質(zhì)等同性，轉(zhuǎn)基因沒有顯著改變玉米的蛋白質(zhì)組。

5 展望

轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米作為飼料用玉米在我國的推廣使用有著極為重要的意義。目前對轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米進行的安全性評價主要是食用安全性方面的評價以及環(huán)境安全性評價，且主要是針對特定目標進行可預期影響的評價，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)植酸酶玉米與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ沼衩滓粯邮前踩摹５珜D(zhuǎn)植酸酶基因玉米從組學上進行的非預期影響的研究還很少，我們從蛋白質(zhì)組學上進行了比較分析，還未見從轉(zhuǎn)錄組學、代謝組學層面上進行比較研究。因此還應加強對轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米非預期影響的研究。

轉(zhuǎn)基因作物的安全性評價是一項長期工作，需要建立科學的評價技術(shù)體系進行長期跟蹤監(jiān)測。首先，轉(zhuǎn)基因作物的安全性評價應遵循個案的原則一個一個的進行。其次，對轉(zhuǎn)基因作物進行安全性評價時，既要用目標分析法對其進行預期影響進行評價，還應使用非目標的組學方法對其進行非預期影響研究。其中對轉(zhuǎn)基因作物的生態(tài)風險及環(huán)境安全進行評價研究時，在不同地區(qū)、不同土壤類型條件下，需要分別進行長期定位監(jiān)測。評價轉(zhuǎn)基因作物的非預期影響時，還應結(jié)合多種組學技術(shù)，包括轉(zhuǎn)錄組學、代謝組學和蛋白質(zhì)組學技術(shù)等，評價可以更全面、更客觀[41]。

參考文獻

[1] Chen R， Xue G.， Chen P， et al. Transgenic maize plants expressing a fungal phytase gene[J]. Transgenic Res. 2008， 17（4）： 633-643.

[2] Gao C Q. Phytase transgenic corn in nutrition of laying hens： Residual phytase activity and phytate phosphorus content in the gastrointestinal tract[J]. Poultry Sci， 2013， 92（11）： 2 923-2 929.

[3] 易小平， 譚燕華， 彭存智， 等. 轉(zhuǎn)基因作物安全評價的檢測技術(shù)[J]. 熱帶生物學報， 2015， 6（1）： 98-104.

[4] 于彩虹， 田少亭， 路興波， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因phyA2玉米定性定量PCR檢測[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報， 2012， 20（4）： 356-361.

[5] 張廣遠， 孫紅煒， 李 凡， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米phyA2基因標準質(zhì)粒分子構(gòu)建及其檢測應用[J]. 作物學報， 2013， 39（8）： 1 501-1 506.

[6] 李 俊， 劉 信， 曹應龍， 等. 植酸酶基因定性PCR檢測方法及陽性質(zhì)粒分子的構(gòu)建[J]. 作物學報， 2012， 38（4）： 639-647.

[7] 趙倩倩， 周曉今， 柳小慶， 等. 轉(zhuǎn)基因玉米中植酸酶蛋白免疫親和純化體系的建立[J]. 中國生物工程雜志， 2013， 33（6）： 125-130.

[8] 閆廣為， 陳茹梅， 石鵬君， 等. 轉(zhuǎn)基因玉米中植酸酶蛋白沉淀條件探索[J]. 中國農(nóng)業(yè)科技導報， 2009， 11（4）： 118-122.

[9] Zhou X， Hui E， Yu X L， et al. Development of a Rapid Immunochromatographic Lateral Flow Device Capable of Differentiating Phytase Expressed from Recombinant Aspergillus niger phyA2 and Genetically Modified Corn[J]. J Agric Food Chem， 2015， 63（17）： 4 320-4 326.

[10] 劉晉生， 鄧俊良， 牛一兵， 等. 轉(zhuǎn)基因植酸酶玉米主要營養(yǎng)成分及其豬消化率的測定[J]. 中國飼料， 2012， 14： 10-14 .

[11] Gao C Q， Ma Q G， Ji C， et al. Evaluation of the compositional and nutritional values of phytase transgenic corn to conventional corn in roosters[J]. Poult Sci， 2012， 91（5）： 1 142-1 148.

[12] 張軍民， 鄧麗青， 陳茹梅， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米對肉仔雞生長性能及鈣磷代謝的影響[J]. 中國獸醫(yī)學報， 2011， 31（2）： 283-287.

[13] 郭 江， 呂 林， 劉松柏， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米對肉仔雞生長性能、 胴體性能及肉品質(zhì)的影響[J]. 中國畜牧獸醫(yī)， 2013， 40（1）： 85-88.

[14] Wang S， Tang C H， Zhang J M， et al. The effect of dietary supplementation with phytase transgenic maize and different concentrations of non-phytate phosphorus on the performance of laying hens[J]. Br Poult Sci， 2013， 54（4）： 466-470.

[15] Ma Q， Gao C， Zhang J， et al. Detection of Transgenic and Endogenous Plant DNA Fragments and Proteins in the Digesta， Blood， Tissues， and Eggs of Laying Hens Fed with Phytase Transgenic Corn[J]. Plos One， 2013， 8（4）： e61 138.

[16] 冉崇銀， 呂 林， 劉松柏， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米對蛋種雞產(chǎn)蛋性能及血清生化指標的影響[J]. 中國畜牧獸醫(yī)， 2013， 40（2）： 100-103.

[17] Li S F， Niu Y B， Liu J S， et al. Energy， amino acid， and phosphorus digestibility of phytase transgenic corn for growing pigs[J]. J Anim Sci， 2013， 91（1）： 298-308.

[18] 趙宗潮， 郭維維， 蘇 營， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米花粉漂移擴散頻率與距離[J]. 生態(tài)學雜志， 2013， 32（11）： 3 004-3 009.

[19] 李 凡， 孫紅煒， 楊淑珂， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米對田間主要害蟲和天敵種群動態(tài)的影響[J]. 中國農(nóng)學通報， 2013， 29（36）： 362-366.

[20] 李 凡， 孫紅煒， 楊淑珂， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米對田間節(jié)肢動物群落多樣性的影響[J]. 生物安全學報， 2014， 23（4）： 265-270.

[21] Zhang Y， Liu C， Li Y. Phytase transgenic maize does not affect the development and nutrition utilization of ostrinia furnacalis and helicoverpa armigera[J]. Environ Entomol， 2010， 39（3）： 1 051-1 057.

[22] 趙彩云， 肖能文， 柳曉燕， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米對步甲群落動態(tài)的影響[J]. 昆蟲學報， 2013， 56（6）： 680-688.

[23] 郭維維， 趙宗潮， 蘇 營， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米種植對土壤線蟲群落的影響[J]. 應用生態(tài)學報， 2014， 25（4）： 1 107-1 114.

[24] 張林森， 楊正友， 孫紅煒， 等. 大田環(huán)境下轉(zhuǎn)植酸酶玉米對土壤酶活性的影響[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學， 2013， 45（4）： 75-78.

[25] 張林森， 楊正友， 孫紅煒， 等. 轉(zhuǎn)植酸酶玉米生育期及秸稈還田期根際微生物數(shù)量和細菌菌群多樣性[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學， 2013， 45（3）： 71-75.

[26] Ioset J R， Urbaniak B， Ndjoko K. et al. Flavonoid comparative analysis of GM/wt wheat[J]. Planta Med， 2006（11）： 72， 1 066-1 066.

[27] Kuiper H A， Kleter G A， Noteborn H P J M， et al. Assessment of the food safety issues related to genetically modified foods[J]. Plant Journal， 2001， 27（6）： 503-528.

[28] Ruebelt MC， Lipp M， Reynolds T L， et al. Application of two-dimensional gel electrophoresis to interrogate alterations in the proteome of gentically modified crops. 3， Assessing unintended effects[J]. J Agric Food Chem， 2006， 54（6）： 2 169-2 177.

[29] Salekdeh G， Komatsu S. Crop proteomics： Aim at sustainable agriculture of tomorrow[J]. Proteomics， 2007， 7（16）： 2 976-2 996.

[30] Gong C Y， Wang T. Proteomic evaluation of genetically modified crops： current status and challenges[J]. Front Plant Sci， 2013， 4（2）： 41.

[31] Coll A， Nadal A， Collado R， et al. Natural variation explains most transcriptomic changes among maize plants of mon810 and comparable non-gm varieties subjected to two n-fertilization farming practices[J]. Plant Mol Biol， 2010， 73（3）： 349-362.

[32] Coll A， Nadal A， Collado R， et al. Gene expression profiles of mon810 and comparable non-gm maize varieties cultured in the field are more similar than are those of conventional lines[J]. Transgenic Res， 2009， 18（5）： 801-808.

[33] Coll A， Nadal A， Palaudelmas M， et al. Lack of repeatable differential expression patterns between mon810 and comparable commercial varieties of maize[J]. Plant Mol Biol， 2008， 68（1）： 105-117.

[34] La Paz J L， Pla M， Centeno E， et al. The use of massive sequencing to detect differences between immature embryos of mon810 and a comparable non-gm maize variety[J]. PLoS One， 2014， 9（6）： e100 895.

[35] Manetti C， Bianchetti C， Casciani L， et al. A metabonomic study of transgenic maize （zea mays） seeds revealed variations in osmolytes and branched amino acids[J]. J Exp Bot， 2006， 57（11）： 2 613-2 625.

[36] Piccioni F， Capitani D， Zolla L， et al. Nmr metabolic profiling of transgenic maize with the cry1ab gene[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry， 2009， 57（14）： 6 041-6 049.

[37] Leon C， Rodriguez-Meizoso I， Lucio M， et al. Metabolomics of transgenic maize combining fourier transform-ion cyclotron resonance-mass spectrometry， capillary electrophoresis-mass spectrometry and pressurized liquid extraction[J]. Journal of Chromatography A， 2009， 1216（43）： 7 314-7 323.

[38] Frank T， Rohlig R M， Davies H V， et al. Metabolite profiling of maize kernels--genetic modification versus environmental influence[J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry， 2012， 60（60）： 3 005-3 012.

[39] Albo A G， Mila S， Digilio G， et al. Proteomic analysis of a genetically modified maize flour carrying cry1ab gene and comparison to the corresponding wild-type[J]. Maydica， 2007， 52（4）： 443-455.

[40] Zolla L， Rinalducci S， Antonioli P， et al. Proteomics as a complementary tool for identifying unintended side effects occurring in transgenic maize seeds as a result of genetic modifications[J]. J Proteome Res， 2008， 7（5）： 1 850-1 861.

[41] Balsamo G M， Cangahuala-Inocente G C， Bertoldo J B， et al. Proteomic analysis of four brazilian mon810 maize varieties and their four non-genetically-modified isogenic varieties[J]. J Agric Food Chem， 2011， 59（21）： 11 553-11 559.

[42] Coll A， Nadal A， Rossignol M， et al. Proteomic analysis of mon810 and comparable non-gm maize varieties grown in agricultural fields[J]. Transgenic Res， 2011， 20（4）： 939-949.

[43] TanY， Yi X， Wang L， et al. Comparative proteomics of leaves from phytase-transgenic maize and its non-transgenic isogenic variety[J]. Front Plant Sci， 2016， 7： 1 211.

[44] Tan Y， Tong Z， Yang Q， et al. Proteomics analysis of phytase transgenic and non-transgenic maize seeds[J]. Scientific Reports， 2017（7）： 9 246.