汪元元,張 帆

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 病理科，安徽 蕪湖 241001)

蕪湖地區(qū)人乳頭瘤病毒的亞型分布及其與年齡分層的相關(guān)性研究

汪元元,張 帆

(皖南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 弋磯山醫(yī)院 病理科，安徽 蕪湖 241001)

目的：了解蕪湖地區(qū)不同年齡段女性宮頸組織中21種人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況，探討有針對(duì)性的防治策略。方法：對(duì)2015年1～12月在皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院就診的11 779例女性的宮頸分泌物標(biāo)本應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR) 體外擴(kuò)增和DNA膜雜交法進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè)，并對(duì)所得數(shù)據(jù)運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：11 779例受檢者中，陽(yáng)性2284例，感染率為19.39%；其中單一感染最多，為1802例(15.30%)，雙重感染364例(3.09%)，多重感染118例(1.00%)；46～50歲年齡段的檢出陽(yáng)性率最高(29.69%)，且與各年齡組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其他各年齡段感染HPV陽(yáng)性率隨著年齡增長(zhǎng)基本呈緩慢上升趨勢(shì)；研究發(fā)現(xiàn)本地區(qū)患者中，主要感染HPV高危亞型為16、52及58，低危亞型為11。結(jié)論：本地區(qū)HPV感染亞型和年齡段分布具有一定的地域特點(diǎn)。本研究結(jié)果可為本地區(qū)宮頸病變的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療及早預(yù)防和HPV 疫苗的使用等提供重要的參考。

人乳頭瘤病毒;基因分型;年齡分層

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2017.03.019

人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的性傳播感染病毒，與許多良惡性腫瘤相關(guān)，是與癌癥發(fā)生有關(guān)的第二大傳染性病原體，僅次于幽門(mén)螺桿菌[1]。當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的HPV亞型已有上百種，我院臨床上主要檢測(cè)與宮頸癌相關(guān)的高危型13種，低危型5種以及中國(guó)人好發(fā)的高危亞型3種。有研究表明HPV不同亞型感染具有年齡和區(qū)域差異性[2]，因此本研究基于本地區(qū)女性HPV感染的現(xiàn)狀以及年齡進(jìn)行回顧性分層研究，為宮頸癌的防治及HPV疫苗在本地區(qū)的使用提供流行病學(xué)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～12月到本院婦科就診并進(jìn)行HPV分型篩查的女性12 068例，除去年齡未知的女性289例，有效資料為11 779例，年齡18～80歲，平均(49 ±3.15)歲。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 均由婦科醫(yī)生以陰道窺器充分暴露宮頸，再用無(wú)菌生理鹽水棉簽拭去宮頸口分泌物后，用專(zhuān)用的宮頸刷置于宮頸口輕輕順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，慢慢取出后將標(biāo)本置于有細(xì)胞保存液并有編號(hào)的取樣管中并送檢。

1.2.2 試劑及儀器 HPV分型檢測(cè)試劑盒購(gòu)自潮州凱普生物化學(xué)有限公司，可檢測(cè)21種HPV亞型，包括16種高危型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、53、CP8304，5種低危型：6、11、42、43、44；檢測(cè)儀器為Roche生物技術(shù)公司的LightCycler480系統(tǒng)。

1.2.3 操作步驟 DNA分離提取 取含0.5 mL宮頸細(xì)胞的保存液，離心后棄上清液并用細(xì)胞裂解液提取DNA。PCR擴(kuò)增：取1 μL DNA樣本作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。雜交洗膜顯色嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行膜條雜交、洗滌、顯色，最后觀察結(jié)果。

1.2.4 結(jié)果及判讀標(biāo)準(zhǔn) 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性點(diǎn)為清晰可見(jiàn)的藍(lán)紫色圓點(diǎn)。根據(jù)膜條HPV分型分布圖，判斷陽(yáng)性點(diǎn)為何種HPV病毒類(lèi)型。Biotin對(duì)照點(diǎn)反應(yīng)酶與顯色底物反應(yīng)，在檢測(cè)中應(yīng)為陽(yáng)性。內(nèi)對(duì)照(IC)為質(zhì)控模板DNA探針，若擴(kuò)增反應(yīng)體系中沒(méi)有抑制因素，IC點(diǎn)出現(xiàn)。以上兩對(duì)照點(diǎn)為陽(yáng)性，其他點(diǎn)為陰性，則判定本次檢測(cè)結(jié)果為陰性；如果有一個(gè)或一個(gè)以上HPV分型點(diǎn)為陽(yáng)性，代表該次檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性(見(jiàn)圖1～4)。

圖1 膜條HPV分型分布圖

1.2.5 年齡分層依據(jù) 本研究為了更好地統(tǒng)計(jì)不同年齡段女性HPV感染的異質(zhì)性，將年齡區(qū)間為18～80歲的11 779例受檢女性，按組距為5(歲)，分為10個(gè)年齡段。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，其中計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或百分比(%)表示。不同年齡段人群HPV感染率的組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 HPV2陽(yáng)性對(duì)照?qǐng)D1種亞型

圖3 單一感染(16型)

圖4 雙重感染(52、58型)

2 結(jié)果

2.1 各年齡組人群HPV感染年齡分布情況 11 779例受檢女性中有2284例感染者，總陽(yáng)性率為19.39%。41～45 歲年齡段的感染者最多，為504例(24.55%)；但46～50歲年齡段的檢出陽(yáng)性率最高(29.69%)。其他各組隨著年齡的增加，感染率有逐漸增長(zhǎng)趨勢(shì)，且各年齡段感染率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.68，P=0.03)。見(jiàn)表1。

2.2 各年齡組人群HPV單一及多重感染情況 各年齡組均以單一感染為主，多重感染較少。在所有感染者中，單一感染占78.90%，其中≥60歲組比率最高(86.96%)；雙重感染占15.94%，21～25歲組構(gòu)成比較其他組高(22.68%)；多重感染占5.16%，且以56～60歲組最多(10.00%)。多重感染中以三重為主，三重以上感染則少見(jiàn)。見(jiàn)表2。

表1 HPV感染年齡分布情況

年齡/歲陽(yáng)性陰性總例數(shù)陽(yáng)性率/%≤205354012．5021～259762972613．3626～302671257152417．5231～352701365163516．5136～403651730209517．4241～455041549205324．5546～504761127160329．6951～551911266145713．1156～604021525515．69≥616932239117．65合計(jì)228494951177919．39

表2 各年齡組HPV單一及多重感染構(gòu)成情況

年齡/歲單一感染/n(%)雙重感染/n(%)多重感染/n(%)感染總例數(shù)≤204(80．00)1(20．00)0(0．00)521～2571(73．20)22(22．68)4(4．12)9726～30214(80．15)41(15．36)12(4．49)26731～35213(78．89)45(16．67)12(4．44)27036～40298(81．64)51(13．97)16(4．39)36541～45402(79．76)76(15．08)26(5．16)50446～50361(75．84)87(18．28)28(5．88)47651～55146(76．44)32(16．75)13(6．81)19156～6033(82．50)3(7．50)4(10．00)40≥6160(86．96)6(8．70)3(4．34)69合計(jì)1802(78．90)364(15．94)118(5．16)2284

2.3 HPV各基因亞型結(jié)果分析 在2284例感染者中，主要感染HPV高危亞型依次為16、52及58，低危亞型為11。由于檢測(cè)標(biāo)本存在單重和多重感染，故2284例實(shí)際檢出亞型頻數(shù)為2937。因此16、52、58亞型的檢出率分別為16.75%、15.80%、11.17%；亞型11的檢出率為1.19%。受檢人群中以感染高危型為主，頻數(shù)為2855，低危型少見(jiàn)，頻數(shù)為82。見(jiàn)表3。

3 討論

HPV感染致病性廣泛，是宮頸病變的重要因素。有研究顯示HPV檢測(cè)與細(xì)胞學(xué)檢測(cè)相比，能更早期地發(fā)現(xiàn)持續(xù)性HPV感染的相關(guān)病變[3]。在2015年美國(guó)陰道鏡和宮頸病理學(xué)會(huì)(ASCCP)臨時(shí)指南推薦將HPV基因分型用于原發(fā)性宮頸癌的篩查，并建議女性篩查年齡≥25歲[4]。HPV疫苗(16型和18型)2016年獲得中國(guó)食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)的上市許可，并在9～25歲女性中接種，這成為國(guó)內(nèi)第一個(gè)獲批用于預(yù)防宮頸癌的HPV疫苗。研究表明，HPV疫苗不僅對(duì)宮頸病變有預(yù)防和保護(hù)作用，還可能會(huì)改變宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生的自然史[5]。國(guó)內(nèi)外研究顯示，HPV感染存在地區(qū)、種族以及亞型的差異，本研究針對(duì)此進(jìn)行探討，使HPV疫苗研制及使用更精準(zhǔn)，能覆蓋更多人群，以減少宮頸疾病的發(fā)生率。

表3 HPV各基因亞型檢測(cè)結(jié)果

年齡/歲HPV高危型HPV低危型161831333539455152565859685366Cp8304611424344≤2010010100111000000000021～25218663523206162412550211126～30531519239155184854231821111731001031～355013172382362662739510238165402036～4074212134433338721657613249193301641～45111333335629845115225314246015313501246～501202629441342104782147616113117356812251～5540131210416214391027711174181311156～60822121122282381500001≥6114442131523391263110000合計(jì)49213514317950168381984648632856962027314722353913

在本研究中本地區(qū)HPV感染總陽(yáng)性率為19.39%，較國(guó)內(nèi)其他地區(qū)均不同，這可能是由于我國(guó)氣候環(huán)境、生活習(xí)慣以及生活水平的差異等造成的地區(qū)差異性。HPV感染可發(fā)生于各年齡段，與年齡具有相關(guān)性[6]。本研究中HPV感染主要發(fā)生在26～55歲，其中46～50歲年齡段的檢出陽(yáng)性率最高(29.69%)，與其他大部分學(xué)者研究結(jié)果的“U”字型分布不同。原因可能為存在選擇偏倚，加之本研究中青年女性總頻數(shù)較少，以及檢測(cè)儀器、試劑靈敏度、研究組距的選定等不同對(duì)研究結(jié)果有一定影響，使得≤20歲組以及21～25歲組感染率均較低。由于50歲以后本身抵抗力和激素水平的變化，雖然陽(yáng)性率有所下降但仍偏高。

本研究中，單一感染為優(yōu)勢(shì)感染(1802例)，陽(yáng)性率達(dá)15.30%，占總感染數(shù)的78.90%，雙重感染364例，占15.94%，多重感染118例，占5.16%。其中≥61歲組單一感染構(gòu)成比最高，達(dá)86.96%；21～25歲組雙重感染構(gòu)成比較其他組高，為22.68%；多重感染構(gòu)成比則以56～60歲組(10.00%)最多。單一感染中高危型與低危型感染比例為39.95∶1(1758∶44)；雙重感染中純高危與純低危感染的比例為104.67∶1(341∶3)；多重感染中純高危與高危-低?；旌霞凹兊臀８腥颈壤秊?08∶9∶1。表明雙重和多重感染中以純高危型感染為主，高危型和低危型混合及純低危型感染少見(jiàn)。李涅等[7]認(rèn)為，多重HPV感染使宮頸癌患病風(fēng)險(xiǎn)增加31.8倍，單一感染使其患病風(fēng)險(xiǎn)增加19.9倍。因此，針對(duì)多重感染的防治顯得尤為重要，特別是多重感染較高的年齡組。

在HPV亞型分布的研究中，21種亞型均出現(xiàn)，其中高危型頻數(shù)由高到低為16(16.75%)、52(15.80%)、58(11.17%)、53(6.88%)、51(6.74%)、33(6.09%)等，低危型中以11型頻數(shù)最高，6型次之。這與魏琦等[8]關(guān)于安徽省HPV主要感染亞型研究一致，但與李旭艷[9]研究的惠州地區(qū)常見(jiàn)的HPV亞型主要為52、58、16 和11(低危)以及聶雙雙等[10]報(bào)道的成都地區(qū)常見(jiàn)的HPV亞型以16、18、58和6(低危)為主不同。表明HPV感染亞型具有明顯地域特點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，雖然HPV16型是最多見(jiàn)的亞型，但在中年組中52型卻高于16型。所以，對(duì)于中年組HPV感染要加強(qiáng)52型的篩查。而西方國(guó)家較常見(jiàn)的18型則排在第十位，頻數(shù)為135(5.90%)，屬于較少見(jiàn)型別。因此，研究針對(duì)HPV16+52+58型的三價(jià)疫苗，對(duì)減少本地區(qū)女性HPV感染率有重要價(jià)值，而不能盲目照搬西方國(guó)家的研究。

綜上所述，本研究結(jié)果可為本地區(qū)宮頸病變預(yù)防、監(jiān)測(cè)和HPV 疫苗的使用等提供重要的參考。掌握HPV不同亞型與各年齡段的感染關(guān)系及特點(diǎn)，了解HPV感染的區(qū)域差異性，對(duì)每個(gè)年齡段給予適用的防治方法，對(duì)女性的健康尤為重要。

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Distribution of and age-related human papillomavirus subtypes in women in Wuhu area

WANG Yuanyuan,ZHANG Fan

Department of Clinical Pathology,The First Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241001，China

Objective：To investigate the cervical prevalence of 21 types of human papillomavirus(HPV) in women at different ages in Wuhu area for planning effective preventive strategies.Methods:Cervical secretions were obtained from 11 779 women undergone diagnosis in our hospital between January and December of 2015,and detected with polymerase chain reaction(PCR) for HPV genotyping via in vitro amplification and DNA hybridization.The results were analyzed with statistics.Results:In 11 779 cases,positive findings were seen in 2284(19.39%).Infection with single HPV subtype was found in 1802 cases(15.30%),double subtypes in 364(3.09%) and multiple infections in 118(1.00%).Women aged from 41 to 45 years had the highest positive findings(29.69%),and the infection was statistically correlated with age groups(P<0.05).Infection rate in remaining age groups was increased with years of age.Higher risk HPV subtypes in women in Wuhu area included 16,52 and 58,and low-risk subtype was associated with 11.Conclusion:HPV infection in women in Wuhu area has age-related distribution trends.Our findings may supply the evidence for early screening,diagnosis and treatment of HPV infection as well as use of HPV vaccine for prevention purpose in women in the local area.

human papillomavirus;genotype;age stratification

1002-0217(2017)03-0262-04

2016-11-08

汪元元(1990-)，女，2015級(jí)碩士研究生，(電話)18255386960，(電子信箱)18255386960@163.com； 張 帆，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，(電子信箱)zhangfan401401@aliyuncom，通信作者。

R 737.33

A