張振宇 李 明

（濟(jì)源市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，河南濟(jì)源 459000）

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中的金剛烷胺

張振宇 李 明

（濟(jì)源市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，河南濟(jì)源 459000）

金剛烷胺又叫三環(huán)癸胺，是廣泛用于人類流感治療的抗病毒藥物，但是將它用于畜禽，不僅導(dǎo)致畜禽產(chǎn)品藥物殘留、動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制和耐藥性等問(wèn)題，還可影響人用抗病毒藥物的有效性。2005年我國(guó)農(nóng)業(yè)部第560號(hào)公告規(guī)定金剛烷胺為禁用獸藥。

串聯(lián)質(zhì)譜法；雞肉；金剛烷胺

目前我國(guó)測(cè)定雞肉中金剛烷胺的相關(guān)文獻(xiàn)較少，國(guó)家和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)也是空白，給此類藥物的監(jiān)管帶來(lái)不便。而雞肉組織中殘留的金剛烷胺含量低，基質(zhì)干擾大，急需有效的檢測(cè)技術(shù)，目前，檢測(cè)金剛烷胺有液相色譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。液相色譜法靈敏度較低且無(wú)法測(cè)定結(jié)構(gòu)信息；氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法需衍生后氣化，樣品處理方法復(fù)雜。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法可檢測(cè)待測(cè)物的結(jié)構(gòu)信息，具有較高的靈敏度，是測(cè)定金剛烷胺的理想方法。

本文利用1%乙酸乙腈作提取液，濃縮后用20%乙腈溶液溶解，再用正己烷除脂，高速離心后過(guò)PSA濾膜，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。該方法簡(jiǎn)便快速，可節(jié)省檢測(cè)時(shí)間和成本。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

UPLC-Xevo TQ MS型超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司）；ULUP超純水系統(tǒng)（成都優(yōu)普公司）；PSA微孔濾膜（0.22μm，Agela公司）超聲波清洗器（新苗儀器有限公司）；高速冷凍離心機(jī)（力康公司）。

金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；鹽酸金剛烷胺-D15（加拿大CDN公司）；甲酸（色譜級(jí)，美國(guó)TEDIA公司）；乙腈、甲醇（色譜純，美國(guó)Fisher公司）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取金剛烷胺10 mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得質(zhì)量濃度為1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，準(zhǔn)確稱取金剛烷胺-D151 mg于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，得質(zhì)量濃度為0.1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃下避光存儲(chǔ)。

1.3 色譜質(zhì)譜條件

色譜柱：Acquity UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μ m）。流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1%甲酸溶液。柱溫40 ℃；進(jìn)樣體積10.0 μl。質(zhì)譜采用電噴霧正離子模式電離，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式進(jìn)行檢測(cè)。

梯度洗脫程序

金剛烷胺特征離子參考質(zhì)譜條件

1.4 樣品提取和凈化

稱取試料2.00g，置于50ml離心管內(nèi)，加適量金剛烷胺-D15內(nèi)標(biāo)溶液，再加無(wú)水硫酸鈉3g，再加入1%乙酸乙腈10ml，渦旋1min后，震蕩提取10min。8000r/min離心8min，取5mL上清液于50℃下氮?dú)獯蹈伞?/p>

加入20%乙腈溶液1.0mL，充分渦旋溶解，再加入20%乙腈溶液飽和的正己烷2ml，充分渦旋混合，然后室溫下靜置5min。吸取下層溶液0.5ml，轉(zhuǎn)移至1.5ml塑料離心管內(nèi)，12000r/min離心5min，取下層清液適量，過(guò)0.22μmPSA濾膜后供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取和凈化條件的選擇和優(yōu)化

2·1·1 提取溶劑的選擇

本實(shí)驗(yàn)選用乙腈、1%乙酸乙腈、甲醇、1%乙酸甲醇作為提取溶劑，進(jìn)行了提取效率（回收率和信噪比）的比較，發(fā)現(xiàn)1%乙酸乙腈提取溶劑的提取效率最好，可以達(dá)到本方法的要求。

2·1·2 凈化方法的選擇

為了簡(jiǎn)化樣品凈化操作，本方法使用含有PSA吸附劑的針式過(guò)濾器，該針式過(guò)濾器的引用可以簡(jiǎn)化樣品凈化操作，只需一步操作即可將凈化和濾膜過(guò)濾整合完成，從而可以大幅提高樣品的前處理效率。

2.2 線性范圍、準(zhǔn)確度、精密度及靈敏度

準(zhǔn)確量取適量的金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，用甲醇溶液稀釋成金剛烷胺濃度分別為1、2、5、10、20、50μg/L，上高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。按其所得峰面積的平均值與對(duì)應(yīng)的金剛烷胺溶液濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)為R2= 0.9984。

對(duì)于雞肉樣品，由于基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)，因此采用相應(yīng)的空白基質(zhì)溶液稀釋金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別制成上述系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按同樣的方法進(jìn)樣分析和繪制金剛烷胺在1～50.00 μg/L范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)為R2= 0.9994。

2.3 方法的準(zhǔn)確度及精密度

本標(biāo)準(zhǔn)采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在雞肉中添加金剛烷胺三個(gè)添加濃度分別為0.3、1、2、10μg/kg的回收率測(cè)定，每個(gè)濃度5個(gè)樣品平行，計(jì)算樣品回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

金剛烷胺添加回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 方法的靈敏度

在空白樣品中添加一定量的金剛烷胺。按照提取凈化方法進(jìn)行處理后，經(jīng)過(guò)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)，當(dāng)金剛烷胺添加濃度為0.3 μg/kg時(shí)，其信噪比在6左右，高于檢測(cè)限所需的信噪比為3的要求，因此方法的檢測(cè)限為0.3 μg/kg；當(dāng)金剛烷胺添加濃度為1 μg/kg時(shí)，每種基質(zhì)中其信噪比均大于10，因此方法的定量限為1 μg/kg。

3 結(jié)論

基于超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立了一種快速、有效的雞肉中金剛烷胺的檢測(cè)方法，獲得了滿意的分離效果和檢測(cè)靈敏度。回收率、精密度和定量限均滿足殘留分析的要求。該檢測(cè)方法可節(jié)省人力、時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本，提高了檢測(cè)效率。

[1] 云環(huán)，崔鳳云，嚴(yán)華，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定雞肉中的利巴韋林和金剛烷胺[J].色譜，2013，31（8）：724-728.