李晉　趙中平　楊勇龍　黃嫻

【摘要】 目的：探討一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素（ET）在顱腦損傷患者腦脊液中的表達(dá)及意義。方法：選取120例在本院住院時(shí)間超過(guò)7 d（含7 d）的顱腦損傷患者，根據(jù)GCS評(píng)分分為輕度組、中度組與重度組。采用Griess比色法和均相競(jìng)爭(zhēng)法分別測(cè)定患者腦脊液中一氧化氮與內(nèi)皮素水平。結(jié)果：120例顱腦損傷患者腦脊液中的內(nèi)皮素水平高于正常參考值（P<0.05），一氧化氮水平低于正常參考值（P<0.05）。中度組患者入院第1天的一氧化氮、內(nèi)皮素水平均高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；重度組的一氧化氮、內(nèi)皮素水平均高于中度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。顱腦損傷患者入院第1天腦脊液中內(nèi)皮素水平達(dá)到最高峰值（195.96±4.38）pg/mL，一氧化氮水平同樣達(dá)到峰值（13.52±6.01）μmol/L，在入院第3天，這兩項(xiàng)指標(biāo)均逐漸下降，與入院時(shí)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：腦脊液中一氧化氮、內(nèi)皮素水平的測(cè)定能較好地評(píng)估患者的顱腦損傷程度。

【關(guān)鍵詞】 顱腦損傷； 腦脊液； 一氧化氮； 內(nèi)皮素

Content and Significance of Nitric Oxide and Endothelin in Cerebrospinal Fluid of Patients with Brain Injury/LI Jin，ZHAO Zhong-ping，YANG Yong-long，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（15）：111-113

【Abstract】 Objective：To study the expression and significance of nitric oxide（NO） and endothelin（ET） in cerebrospinal fluid（CSF） of patients with brain injury.Method：A total of 120 craniocerebral injury patients with hospitalization beyond 7 days（including 7 days） in our hospital were divided into the mild group，the moderate group and the severe group according to GCS scores.Endothelin and nitric oxide levels of 120 cases were respectively detected by the Griess colorimetric method and the homogeneous competition method.Result：The endothelin level in cerebrospinal fluid of 120 patients with craniocerebral injury was higher than that normal reference value（P<0.05），the level of nitric oxide was lower than that normal reference value（P<0.05）.The levels of nitric oxide and endothelin in first day in the moderate group were higher than those in mild group，the differences were statistically significant（P<0.05）；the levels of nitric oxide and endothelin in the severe group were higher than those in the moderate group，the differences were statistically significant（P<0.05）.On the first day after entering the hospital cerebrospinal fluid endothelin level reached the peak （195.96±4.38）pg/mL，and nitric oxide level also reached the peak （13.52±16.01）μmol/L，and after 3 days in the hospital，both of them gradually decreased，compared with admission，the differences were statistically significant （P<0.05）.Conclusion：The level of nitric oxide and endothelin in cerebrospinal fluid can be used to evaluate the degree of brain injury.

【Key words】 Brain injury； Cerebrospinal fluid； Nitric oxide； Endothelin

First-authors address：Guangdong Water and Electricity Hospital，Guangzhou 511340，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.15.032

近年來(lái)，醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)腦脊液中的相關(guān)指標(biāo)與CT圖像結(jié)合能夠更好的診治顱腦損傷患者。一氧化氮（NO）與內(nèi)皮素（ET）是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的新型神經(jīng)遞質(zhì)，對(duì)微循環(huán)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性有很大的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)這兩項(xiàng)指標(biāo)與顱腦損傷程度等一系列的病理及生理變化有緊密的聯(lián)系[1]。針對(duì)不同程度顱腦損傷患者腦脊液中NO與ET指標(biāo)的變化情況，研究?jī)烧咴陲B腦損傷時(shí)的變化過(guò)程，以此為顱腦損傷的臨床治療以及傷情診斷提供理論依據(jù)[2-3]?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取2015年1月-2016年9月在本院住院時(shí)間超過(guò)7 d（含7 d）的顱腦損傷患者120例作為研究對(duì)象，根據(jù)格拉斯哥昏迷（GCS）評(píng)分分為輕度組（3～5分）、中度組（6～10分）與重度組（≥11分），輕度組31例，中度組45例，重度組44例。三組患者的一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 120例顱腦損傷患者分別于入院時(shí)、入院第1天、入院第2天、入院第3天、入院第5天、入院第7天采集腦脊液。利用硅化空針管采集腦脊液2.5 mL，置于30 mL 10%EDTA以及50 mL抑肽酶的塑料離心管中混勻，以此作為檢測(cè)ET的準(zhǔn)備。采集腦脊液2.5 mL，馬上放入預(yù)冷的肝素抗凝試管中混勻，以此作為檢測(cè)NO的準(zhǔn)備[4]。

1.2.2 檢測(cè)方法 （1）NO檢測(cè)：采用Griess比色法間接測(cè)定NO含量，依據(jù)硝酸鹽與磺酸及萘乙烯二胺鹽酸鹽反應(yīng)產(chǎn)生粉紅色偶氮化合物原理，代謝產(chǎn)物NO2以及NO3則是NO的含量，從而間接檢測(cè)腦脊液NO中的含量[5]。一氧化氮正常參考值為（3.99±1.99）μmol/L。（2）ET檢測(cè)：采取均相競(jìng)爭(zhēng)法直接測(cè)定腦脊液內(nèi)皮素含量，內(nèi)皮素-1與標(biāo)準(zhǔn)物或樣品同時(shí)競(jìng)爭(zhēng)性與內(nèi)皮素抗體結(jié)合，最后依據(jù)樣品中放射性含量直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出相應(yīng)內(nèi)皮素含量[6-9]。內(nèi)皮素的正常參考值為（83.90±13.80）pg/mL。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 入院第1天一氧化氮、內(nèi)皮素水平與正常參考值比較 顱腦損傷患者入院第1天的一氧化氮水平為（13.52±6.01）μmol/L，高于正常參考值（3.99±1.99）μmol/L，內(nèi)皮素水平為（195.96±4.38）pg/mL，低于正常參考值（83.90±13.80）pg/mL，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 三組患者入院第1天的一氧化氮、內(nèi)皮素水平比較 中度組的一氧化氮、內(nèi)皮素水平均高于輕度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.0773，P<0.05；t=195.6269，P<0.05）；重度組的一氧化氮、內(nèi)皮素水平均高于中度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.6381，P<0.05；t=10.6900，P<0.05）

*與輕度組比較，P<0.05；#與中度組比較， P<0.05

2.3 顱腦損傷患者入院不同時(shí)期腦脊液一氧化氮、內(nèi)皮素水平比較 顱腦損傷患者入院第1天腦脊液中的一氧化氮、內(nèi)皮素水平達(dá)到頂點(diǎn)，自入院第3天開始，兩者均逐漸下降，與入院時(shí)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）

3 討論

Yanagisawa等[2]在1988年從豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中分離并純化出內(nèi)皮素，其是由21個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的小分子生物活性肽。當(dāng)顱腦損傷發(fā)生時(shí)，尤其是重度腦損傷患者，其應(yīng)激反應(yīng)致使腎上腺素增加，致使血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放出ET[9]，又由于顱腦損傷后顱內(nèi)壓增高，致使這些ET擴(kuò)散到腦脊液中，引起腦灌注壓降低，腦缺血、缺氧等都易刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生ET，其水平的增加將會(huì)刺激電壓依賴性鈣通道，使血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣超載，致使腦血管收縮痙攣，更容易加重腦損傷病情[10-13]。

在本研究中，顱腦損傷患者腦脊液內(nèi)皮素水平明顯高于正常參考范圍，充分體現(xiàn)其水平與機(jī)體損傷有緊密聯(lián)系，可以作為診斷顱腦是否損傷的參考依據(jù)。隨著顱腦損傷病情的加重，腦脊液中內(nèi)皮素水平呈上升趨勢(shì)。輕度組、中度組、重度組腦脊液內(nèi)皮素水平分別（50.97±0.79）、（134.13±2.27）、（140.88±3.56）pg/mL，輕度組與中度組比較、中度組與中度組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。顱腦損傷患者入院第1天腦脊液中內(nèi)皮素水平達(dá)到峰值（195.96±4.38）μmol/L，自入院第3天開始逐漸下降，與入院時(shí)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這同樣也可以作為診斷顱腦損傷患者在入院之后的病情程度的依據(jù)。

顱腦損傷患者入院第1天，腦脊液中NO含量即達(dá)到高峰，后期則有所下降，其原因可能是NO在基礎(chǔ)釋放量時(shí)具有維持腦血管張力、調(diào)節(jié)腦血流量的作用，所以在創(chuàng)傷早期，機(jī)體通過(guò)自身反饋增加NO的含量，以加強(qiáng)擴(kuò)血管作用，改善局部腦血流，使病灶邊緣區(qū)可逆性神經(jīng)細(xì)胞損傷得以恢復(fù)，因而創(chuàng)傷早期NO含量的代償性升高并非全部具有病理意義[14-15]。顱腦損傷患者常在創(chuàng)傷早期發(fā)生腦缺血、缺氧等應(yīng)激性顱腦損傷，甚至下丘腦-垂體等系統(tǒng)損傷，機(jī)體此階段的一氧化氮水平上升，實(shí)質(zhì)上對(duì)顱腦損傷患者腦部血管損傷起到了一定的保護(hù)作用。輕度組、中度組、重度組腦脊液一氧化氮水平分別為（5.23±4.38）、（13.86±3.85）、（18.86±2.03）μmol/L，輕度組與中度組比較、中度組與中度組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明隨著顱腦損傷程度的加重，其腦脊液一氧化氮水平逐漸上升，由此可以看出顱腦損傷患者腦脊液一氧化氮水平在一定程度上反應(yīng)病情程度。顱腦損傷患者入院第1天腦脊液中一氧化氮水平達(dá)到峰值（13.52±6.01）μmol/L，在入院第3天后逐漸下降，與入院時(shí)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），腦脊液中一氧化氮可以作為顱腦損傷患者病情程度的診斷指標(biāo)。

綜上所述，顱腦損傷患者腦脊液一氧化氮、內(nèi)皮素水平測(cè)定有助于診斷顱腦損傷患者病情。

參考文獻(xiàn)

[1]王曉，陶志宇，肖龍坡，等.顱腦損傷后血、腦脊液一氧化氮、內(nèi)皮素含量變化及其臨床意義[J].創(chuàng)傷外科雜志，2001，3（4）：258-260.

[2] Yanagisawa M，Kurihara H，Kimura S，et al.A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endotheline cells[J].Nature，1988，332（6163）：441-447.

[3]許民輝，鄒詠文.急性顱腦外傷后血漿、腦脊液內(nèi)皮素含量變化的初步報(bào)告[J].中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志，1995，21（3）：172-173.

[4] Noiri E.Permissive role of nitric oxide in endothel in induced migyation of endothelial cells[J].J Biol Chem，1997，272（3）：1747.

[5]張文娟，李娜，程晉成，等.急性顱腦損傷患者體液內(nèi)皮素-1表達(dá)的意義[J].白求恩醫(yī)學(xué)雜志，2014，12（1）：6-8.

[6] Laurence A，Amarnath S，Mariotti J，et al.STAT3 transcription factor promotes instability of nTreg cells and limits generation of iTreg cells during acute murine graft-versus-host disease[J].Immunity，2012，37（2）：209-222.

[7]張圣恭，白玉，王良榮，等.參麥注射液對(duì)外傷性腦損傷大鼠血清神經(jīng)烯醇化酶、一氧化氮、內(nèi)皮素水平的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（3）：583-585.

[8] Alvarez D，Briassouli P，Clancy R M，et al.A novel role of endothelin-1 in linking Toll-like receptor 7-mediated inflammation to fibrosis in congenital heart block[J].J Biol Chem，2011，286（35）：30 444-30 454.

[9] Büyükcam F，Kaya U，Karak?l?? M E，et al.Predicting the outcome in children with head trauma：comparison of FOUR score and Glasgow Coma Scale[J].Ulus Travma Acil Cerrahi Derg，2012，18（6）：469-473.

[10]張衛(wèi)，何文干，潘云，等.急性顱腦損傷后腦脊液內(nèi)皮素和一氧化氮的濃度變化及意義[J].右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，26（5）：639-641.

[11]周任，呂健，黃衛(wèi)東，等.創(chuàng)傷性腦血管痙攣與內(nèi)皮素水平變化的關(guān)系[J].西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，23（2）：164-166.

[12]王顏宏.重度顱腦損傷后腦血管痙攣與NO及內(nèi)皮素水平的研究[D].長(zhǎng)沙：中南大學(xué)，2013.

[13] Miller R C，Pelton J T，Huggins J P.Endothelin--from receprors to medicine[J].Tips，1993，14（2）：54-60.

[14] Suzuki M，Asahara H，Endo S，et al.Increased levels of nitrite/nitrate in the cerebrospinal fluid of patients with subarachnoid hemorrhage[J].Neurosurgical Review，1999，22（2）：96-98.

[15]王曉， 陶志宇， 肖龍坡，等. 顱腦損傷后一氧化氮、內(nèi)皮素活性變化及其意義[J]. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2002，12（4）：94-95.

（收稿日期：2017-02-20） （本文編輯：程旭然）