康麗 邱仁杰 王秀麗

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沙苑子不同規(guī)格炮制品中沙苑子苷A的含量比較研究

康麗 邱仁杰 王秀麗

目的 建立沙苑子中沙苑子苷A的含量測(cè)定方法，考察沙苑子不同規(guī)格炮制品中沙苑子苷A的含量及其變化情況。方法 用鹽水、黃酒、米醋三種輔料，按照烘、炒、蒸三種不同工藝，炮制出9種不同規(guī)格沙苑子炮制品，采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定不同規(guī)格沙苑子中沙苑子苷A的含量。結(jié)果 沙苑子苷A在0.0209 μg～0.4180 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.999 9，n=5)；平均加樣回收率為97.91%，RSD為1.48%，準(zhǔn)確度符合要求。沙苑子生品、鹽水悶潤(rùn)炒干品、鹽水悶潤(rùn)烘干品、鹽水悶潤(rùn)蒸后烘干品、黃酒悶潤(rùn)炒干品、黃酒悶潤(rùn)烘干品、黃酒悶潤(rùn)蒸后烘干品、米醋悶潤(rùn)炒干品、米醋悶潤(rùn)烘干品、米醋悶潤(rùn)蒸后烘干品中沙苑子苷A含量分別為0.98、0.89、0.85、1.16、0.88、0.90、1.09、0.85、0.87、1.18 mg/g。結(jié)論 建立的HPLC檢測(cè)方法快速準(zhǔn)確、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)；鹽水、黃酒或米醋三種輔料悶潤(rùn)炒干和悶潤(rùn)烘干可導(dǎo)致沙苑子中沙苑子苷A含量下降，而輔料悶潤(rùn)蒸后烘干則使得沙苑子苷A含量增加，尤以米醋悶潤(rùn)蒸后烘干品中沙苑子苷A含量最高。

沙苑子； 炮制品； 沙苑子苷A； 高效液相色譜法； 含量測(cè)定

沙苑子，別名潼蒺藜、沙苑蒺藜，為豆科植物扁莖黃芪AstragaluscomplanatusR.Br.的干燥成熟種子，秋末冬初果實(shí)成熟尚未開裂時(shí)采割植株，曬干，打下種子，除去雜質(zhì)，曬干，主產(chǎn)于陜西，內(nèi)蒙古、遼寧、河北、甘肅、吉林也有分布。本品始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味甘、性溫，歸肝、腎經(jīng)，具有溫補(bǔ)肝腎、固精、縮尿、明目等功效，用于腎虛腰痛、遺精早泄、白濁帶下、小便余瀝、眩暈?zāi)炕璧炔“Y[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，沙苑子對(duì)血液流變學(xué)、免疫功能、血壓和腦血流量均有影響，同時(shí)還有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜 、耐寒、抗疲勞、抗炎和降脂保肝的作用[2]。

沙苑子主要含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、黃酮類、酚類、鞣質(zhì)、甾醇和三萜類、生物堿及礦質(zhì)元素等[3]。有文獻(xiàn)報(bào)道，包括沙苑子苷A在內(nèi)的沙苑子總黃酮可降低血清膽固醇、甘油三酯，降低外周阻力使血壓尤其是舒張壓下降，降低SGPT并增加模型動(dòng)物肝糖原等以保肝[4-6]，是沙苑子中主要的生物活性部位。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)以沙苑子苷作為沙苑子含量測(cè)定的指標(biāo)成分，其中收載沙苑子炮制方法為凈制法(即除去雜質(zhì)，洗凈，干燥)、鹽炙法[取凈沙苑子，照鹽水炙法(通則0213)炒干)][1]。其中鹽炙法是沙苑子最常用的炮制方法，具有悠久的歷史，但是也有酒炙、醋炙等炮制方法被廣泛應(yīng)用卻并未被藥典收載。目前，沙苑子相關(guān)炮制研究屢有報(bào)道，有關(guān)沙苑子的沙苑子苷含量測(cè)定也多有研究成果出現(xiàn)，但這些相關(guān)炮制品研究大都停留在工藝優(yōu)化階段，且多以鹽炙法為主，炮制前后指標(biāo)成分的含量變化研究少有報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)分別用鹽水、黃酒、米醋三種輔料，按照烘、炒、蒸三種不同工藝，得9種不同規(guī)格沙苑子炮制品，采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定沙苑子苷A的含量，通過(guò)比較沙苑子炮制前后沙苑子苷A含量變化以及不同炮制規(guī)格中的沙苑子苷A含量的差異，為沙苑子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立和進(jìn)一步的炮制研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，色譜柱：Kromasil C185 μm(4.6 mm×250 mm)；試劑：乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。FA1204B分析天平(上海精密儀器儀表有限公司)，101-1AB電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)，KQ-300VDB型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；沙苑子購(gòu)于北京同仁堂望京店，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院鑒定教研室王晶娟副教授鑒定為豆科植物扁莖黃芪AstragaluscomplanatusR. Br.的干燥成熟種子。對(duì)照品：沙苑子A對(duì)照品(批號(hào)：116183-66-5，供含量測(cè)定用，純度98.0%；上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制品制備

2.1.1 生品 取凈沙苑子50 g，粉碎，過(guò)60目篩，備用。

2.1.2 輔料悶潤(rùn)炒干品 取凈沙苑子50 g，加入20 mL鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋至密閉容器內(nèi)，悶潤(rùn)2小時(shí)，置炒鍋中，鍋底溫度120～130 ℃，炒制60秒，放涼，粉碎，過(guò)60目篩，備用。

2.1.3 輔料悶潤(rùn)烘干品 取凈沙苑子50 g，加入20 mL鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋至密閉容器內(nèi)，悶潤(rùn)2小時(shí)，置于烘箱內(nèi)，溫度為60℃，烘干，4小時(shí)后取出，放涼，粉碎，過(guò)60目篩，備用。

2.1.4 輔料悶潤(rùn)蒸后烘干品 取凈沙苑子50 g，加入20 mL鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋至密閉容器內(nèi)，悶潤(rùn)2小時(shí)，取出，置于蒸鍋中，圓氣后蒸60分鐘后取出，置于烘箱內(nèi)，溫度為60 ℃，烘干，4小時(shí)后取出，放涼，粉碎，過(guò)60目篩，備用[7]。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取沙苑子苷A對(duì)照品0.01045 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，從中精密量取1 mL置于50 mL量瓶中配制成每1 mL含沙苑子苷A 0.0209 mg的對(duì)照品溶液[8]。

2.3 供試品制備

2.3.1 提取溶劑的選擇 試驗(yàn)選用30%乙醇、60%乙醇、甲醇，作為提取溶劑進(jìn)行比較，取本品(沙苑子生品)0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入相應(yīng)溶劑25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用相應(yīng)試劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果60%乙醇提取效率較好，故選擇60%乙醇作為測(cè)定提取溶劑。見表1。

2.3.2 提取時(shí)間及提取方法的選擇 以60%乙醇為溶劑，分別采用超聲提取30、60分鐘、回流提取30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用回流提取效果較好，選用60%乙醇回流提取1小時(shí)即可提取完全。見表2。

表1 不同溶劑提取后測(cè)定結(jié)果

表2 不同提取方法及時(shí)間測(cè)定結(jié)果

因此供試品制備方法為：取本品0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用60%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 色譜條件

色譜柱：Kromasil C185 μm(4.6 mm×250 mm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液 (20∶80)；檢測(cè)波長(zhǎng)為266 nm；流速1.0 mL/min；柱溫：25℃。沙苑子苷A的保留時(shí)間在22分鐘左右，且沙苑子苷A與相鄰成分色譜峰的分離度都在1.5以上，理論板數(shù)按沙苑子苷A峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。分別精密吸取沙苑子苷A對(duì)照品溶液與供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，依上述色譜條件，測(cè)定，即得。對(duì)照品和供試品HPLC見圖1、2。

圖1 沙苑子苷A對(duì)照品HPLC圖

圖2 生沙苑子供試品HPLC圖

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取沙苑子苷A對(duì)照品溶液(濃度：0.0209 mg/mL)1、5、10、15、20 μL，注入高效液相色譜儀，按2.4項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，沙苑子苷A回歸方程為：Y=2.147×106X-3.779×103，相關(guān)系數(shù)r=0.9999(n=5)，結(jié)果表明沙苑子苷A在0.0209 μg～0.4180 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2.5.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批供試品溶液(生沙苑子)，分別于配制后0、4、8、12、24小時(shí)，按2.4項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果沙苑子苷A的RSD為1.64%，表明供試品溶液在配制后24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批沙苑子樣品，按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行制備6份進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果沙苑子苷A的RSD分別為1.41%，表明方法重復(fù)性較好。

2.5.4 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批樣品(生沙苑子)(沙苑子苷A含量0.984 mg/g)0.25 g，精密加入對(duì)照品溶液(沙苑子苷A濃度為0.010 45 mg/mL，純度98.0%)25 mL；按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，各平行制備6份，依法測(cè)定，結(jié)果平均加樣回收率為97.91%，RSD為1.48%，表明本方法具有良好的準(zhǔn)確度。2.6 樣品含量測(cè)定

取上述沙苑子生品及炮制品粉末各0.5 g，精密稱定，按照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依據(jù)2.4項(xiàng)下色譜條件測(cè)定沙苑子苷A的含量，每個(gè)樣品皆平行測(cè)定3次，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量，其平均值和RSD，結(jié)果見表3。

表3 樣品中沙苑子苷A含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

研究表明，沙苑子總黃酮是沙苑子中主要的生物活性部位，而沙苑子苷A則是含量較高的黃酮類成分，且有研究發(fā)現(xiàn)，沙苑子苷A有較明顯的抗血小板聚集作用，表明其為沙苑子活性成分之一，故選擇黃酮類成分中含量較高的沙苑子苷A作為沙苑子的指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定。沙苑子炮制品色譜圖與生沙苑子基本相同，在沙苑子苷A峰的前后均無(wú)新的干擾峰出現(xiàn)，不影響測(cè)定。

試驗(yàn)所用炮制品均由沙苑子原藥材加工制成。測(cè)定比較后發(fā)現(xiàn)，輔料[鹽水(含2%鹽)、黃酒或米醋]悶潤(rùn)炒干品和輔料悶潤(rùn)烘干品中沙苑子苷A的含量較沙苑子生品有所下降，可能因?yàn)槌粗七^(guò)程中溫度較高，沙苑子苷A(熔點(diǎn)278℃)受到破壞。而輔料悶潤(rùn)蒸后烘干品中沙苑子苷A的含量較沙苑子生品有所增加，可能是因?yàn)樵谂谥萍訜徇^(guò)程中酶解沙苑子苷A的自生酶被破壞，即“殺酶保苷”原理。而此酶在何種條件下完全失效以保苷以及何種條件下此酶活性最強(qiáng)而使沙苑子苷A受到破壞，尚有待進(jìn)一步的研究。本次試驗(yàn)成功建立沙苑子中沙苑子苷A的含量測(cè)定方法，該方法快速準(zhǔn)確、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)，可用于沙苑子的質(zhì)量控制，并為其進(jìn)一步的炮制研究奠定了基礎(chǔ)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：183-184.

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(本文編輯： 董歷華)

Comparative study on the content of complanatuside A in different specifications of astragali complanati semen

KANGLi，QIURenjie，WANGXiuli.

YulinHospitaloftraditionalChinesemedicine,Yulin719000，China

WANGXiuli，E-mail：Lnwangxiuli@163.com

Objective To establish a method of content determination of complanatuside A in astragali complanati semen, and study the contents and changes of different specifications. Methods Saline water, rice-vinegar, rice-wine was used as excipients, according to the three different processes of baking, frying and steaming, the astragali complanati semen was made up of 9 kinds of products with different specifications, then the content of complanatuside A was determined by HPLC. Results Complanatuside A showed a good linearity relationship in the range of 0.0209 μg～0.4180 μg (r=0.999 9,n=5). The average recovery was 97.91%, RSD was 1.48%, the accuracy met the requirements. The contents of complanatuside A in not-processed product, roasting product after saline water moistening, drying product after saline water moistening, roasting product after saline water moistening and steaming, roasting product after rice-wine moistening, drying product after rice-wine moistening, roasting product after rice-wine moistening and steaming product, roasting product after rice-vinegar moistening, drying product after rice-vinegar moistening and drying product after rice-vinegar moistening and steaming, the content of complanatuside A was 0.98, 0.89, 0.85, 1.16, 0.88, 0.90, 1.09, 0.85, 0.87, 1.18 mg/g respectively. Conclusion The established HPLC detection method is fast, accurate, repeatable and strong specificity; roasting or drying after moistening with saline water, rice-vinegar or rice-wine can reduce the content of complanatuside A in astragali complanati semen, however the drying after moistening and steaming with excipients can increase the content of complanatoside A, the content of drying product after rice-vinegar moistening and steaming is highest.

astragali complanati semen; Processed products; Complanatoside A; HPLC; Content determination

陜西省中醫(yī)管理局中醫(yī)藥科研課題(15-ZY041)；國(guó)家中醫(yī)藥管理局全國(guó)中藥特色技術(shù)傳承人才培訓(xùn)項(xiàng)目

719000 陜西省榆林市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部(康麗)；北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院(邱仁杰、王秀麗)

康麗(1972- )，女，本科，副主任，中藥師。研究方向：中藥鑒定。E-mail：1186825832@qq.com

王秀麗(1978- )，女，博士，副研究員。研究方向：中藥復(fù)方及新藥研發(fā)。E-mail：Lnwangxiuli@163.com

R284

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10.3969/j.issn.1674-1749.2017.06.009

2017-02-22)