馮宇 楊明會 竇永起 李紹旦 張印 王瑛 蒲香蓉

?

身痛逐瘀湯對DOMS模型大鼠骨骼肌微損傷和炎癥因子的影響

馮宇 楊明會 竇永起 李紹旦 張印 王瑛 蒲香蓉

目的 探討身痛逐瘀湯治療延遲性肌肉酸痛癥(delayed onset muscle soreness, DOMS)的作用機理。方法 將81只雄性SD大鼠按照隨機原則分為運動模型組、西藥對照組、中藥實驗組，每組27只。各組大鼠均進行力竭游泳訓練，負重為大鼠體質量的3%。西藥對照組給予維生素C片及維生素E軟膠囊，中藥實驗組給予身痛逐瘀湯治療。觀察各組大鼠血清骨骼肌微損傷指標和炎癥因子變化。結果 中藥實驗組DOMS大鼠血清肌酸激酶值在24、72小時顯著低于運動模型組及西藥對照組；乳酸脫氫酶值在24、48、72小時顯著低于運動模型組，其中24、48小時顯著低于西藥對照組；前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)值在24、72小時顯著低于運動模型組。結論 身痛逐瘀湯可以降低DOMS模型大鼠骨骼肌微損傷程度，并抑制炎癥因子的釋放。

身痛逐瘀湯； 延遲性肌肉酸痛癥； 骨骼肌微損傷； 炎癥因子

延遲性肌肉酸痛癥(delayed onset muscular soreness，DOMS)多在運動后24小時出現(xiàn)，主要癥狀有肌肉僵硬、酸痛、腫脹，重者疼痛劇烈，活動受限。上述癥狀在運動后24～72小時達到高峰，5～7天后疼痛基本消失[1]。因對其研究較少，目前尚無完善、有效的預防及治療方法。本實驗通過觀察身痛逐瘀湯對DOMS模型大鼠骨骼肌微損傷和炎癥因子的影響，為治療DOMS提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

實驗采用健康雄性SPF級成年雄性SD大鼠81只，體質量220～250 g。實驗動物分籠飼養(yǎng)，每籠5只，飼料為大鼠生長期維持飼料，自由飲水、飲食；室內溫度控制在(22±3)℃，濕度控制在50%，晝夜節(jié)律用日光燈控制，每天光照時間12小時(08：00～20：00)；每天更換飲水和飼料，每2天更換一次墊料；膳食平衡3天。

1.2 分組及給藥方法

按照隨機原則將動物分為運動模型組(A組)、西藥對照組(B組)、中藥實驗組(C組)，每組27只，共81只。

運動模型組(A組)：運動實驗后不應用藥物治療，運動后25、49、73小時采集血清，標記為A1、A2、A3組。西藥對照組(B組)：膳食平衡3天后行運動實驗，運動實驗后第0、24、48、72小時灌胃對照藥物共2 mL(維生素E和維生素C液體各1 mL)；并于運動后25、49、73小時采集血清，標記為B1、B2、B3組。中藥實驗組(C組)：膳食平衡3天行運動實驗，運動實驗后第0、24、48、72小時灌胃中藥2 mL；并于運動后25、49、73小時采集血清，標記為C1、C2、C3組。

1.3 藥物制備

中藥水煎劑：桃仁9 g、紅花9 g、秦艽3 g、川芎6 g、甘草6 g、羌活3 g、沒藥6 g、當歸9 g、五靈脂6 g、香附3 g、牛膝9 g、地龍6 g，煎煮二次，過濾后將兩次藥液混勻，濃縮至0.964 g/mL藥液，于4℃冰箱內冷藏備用。

對照藥物：維生素C片(太原藥業(yè)制造，0.1 g/片)配制成2.57 mg/mL藥液，混勻后每只大鼠每天灌胃1 mL。維生素E軟膠囊(天津中央藥業(yè)生產(chǎn)，0.1 g/粒)：配制成7.71 mg/mL藥液，混勻后每只大鼠每天灌胃1 mL。

1.4 造模方法

各組大鼠均進行一次力竭訓練。讓實驗動物在100 cm×50 cm×70 cm的玻璃缸中負重游泳，靜水深55 cm，水溫(33±2)℃，負重為大鼠體重的3%；上午9點開始進行1次游泳運動，在游泳過程中，當大鼠運動協(xié)調性明顯下降、出現(xiàn)反復下沉時，或當大鼠浮在水面不運動時用木棒驅趕，使其維持運動狀態(tài)；當下沉超過10秒，連續(xù)下沉3次即將動物取出游泳缸用電吹風吹干入籠[2]。

1.5 血清分離及檢測

在動物麻醉情況下切開腹部，暴露出腹部動脈，用10 mL一次性注射器從腹部動脈取血，取血時間為早上11點；取8 mL血樣以3000 rpm速率離心15分鐘，抽取上清液。

生化檢測：全自動生化分析儀和肌酸激酶(creatine kinase，CK)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)試劑盒測量CK、LDH的活性。ELISA檢測：標準品稀釋與加樣：按說明書要求稀釋標準品，并每孔加入50 μL，空白孔加入50 μL樣品稀釋液，前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)標準品濃度為120 ng/L、60 ng/L、30 ng/L、15 ng/L、7.5 ng/L和0 ng/L。操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行操作。

1.6 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 身痛逐瘀湯可以降低DOMS模型大鼠的骨骼肌微損傷程度

中藥實驗組DOMS大鼠血清CK值在24、72小時顯著低于相同時相的運動模型組(P<0.01)及西藥對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義；LDH值在24、48、72小時顯著低于相同時相的運動模型組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義，24、48小時顯著低于相同時相的西藥對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。以上結果顯示中藥可以降低DOMS模型大鼠的肌酶數(shù)值，降低其骨骼肌微損傷程度。見表1、表2。

表1 三組大鼠CK值的比較

注： 與運動模型組比較，第24小時aP<0.01，第72小時bP<0.01；與西藥對照組比較，第24小時cP<0.01，第72小時dP<0.01。

表2 三組大鼠LDH值的比較

注： 與運動模型組比較，第24小時aP<0.01，第48小時bP<0.01，第72小時cP<0.01。與西藥對照組比較，第24小時dP<0.05，第48小時eP<0.05。

2.2 身痛逐瘀湯可以抑制DOMS模型大鼠炎癥因子的分泌

中藥實驗組DOMS大鼠PGE2值在24、72小時顯著低于運動模型組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義，見表3。以上結果顯示中藥可以降低DOMS模型大鼠的PGE2數(shù)值，說明可以通過抑制炎癥因子的分泌來減輕骨骼肌疼痛程度。

表3 三組大鼠PGE2的比較

注： 與運動模型組比較，第24小時aP<0.05，第72小時bP<0.05。

3 討論

研究認為DOMS主要由直接的機械損害和炎癥因素導致。機械損害主要表現(xiàn)于運動性骨骼肌微損傷。在運動過程中，由于肌細胞膜受到損傷，細胞膜通透性增加，引起血液中肌酶增高和肌紅蛋白含量增加[3]，主要檢測指標有CK和LDH。炎癥因素表現(xiàn)在劇烈運動后PGE2等炎癥因子的大量釋放[2]，刺激外周神經(jīng)等感受器導致疼痛。西醫(yī)療法常用非甾體類抗炎藥物、營養(yǎng)補充劑和抗氧化劑等藥物，但臨床療效不確定，也存在不良反應等問題。

中醫(yī)以其毒副作用小，療效佳在DOMS的治療方面發(fā)揮重要的作用[4-5]。中醫(yī)認為：由大運動量引起的DOMS屬中醫(yī)痛癥范疇，多由“經(jīng)脈不通，氣血瘀滯”引起，這與目前眾多中醫(yī)學者在臨床上對DOMS的認識相吻合[6-8]，治宜行氣活血、通絡止痛。身痛逐瘀湯是清代名醫(yī)王清任創(chuàng)制的活血名方，記錄于《醫(yī)林改錯》中，具有行氣活血、通絡止痛的功效。方中桃仁、紅花、當歸、川芎可活血祛瘀，沒藥、五靈脂、香附可行氣血、止疼痛，牛膝、地龍可疏通經(jīng)絡，秦艽、羌活可祛風除濕，甘草可調和諸藥。諸藥聯(lián)用，共奏行氣活血、通絡止痛之功效。經(jīng)查閱資料，未見活血法治療DOMS的實驗文章報道，所以本團隊開展實驗研究，初步探討并明確活血法(身痛逐瘀湯)治療DOMS的療效機制。

本實驗結果證實身痛逐瘀湯治療DOMS的主要機理有以下兩方面：(1)降低DOMS模型大鼠的骨骼肌微損傷程度。實驗結果顯示中藥實驗組DOMS大鼠血清CK值在24、72小時顯著低于運動模型組及西藥對照組；LDH值在24、48、72小時顯著低于運動模型組，其中24、48小時顯著低于西藥對照組，證明身痛逐瘀湯可以明顯降低DOMS模型大鼠CK、LDH值，有效保護骨骼肌的微損傷，而且療效優(yōu)于維生素C、維生素E等抗氧化劑。(2)抑制炎癥因子的釋放。中藥實驗組DOMS大鼠PGE2值在24、72小時顯著低于運動模型組，證明身痛逐瘀湯可以有效抑制DOMS大鼠炎癥因子的釋放，減輕DOMS疼痛癥狀。本實驗首次明確了活血法(身痛逐瘀湯)治療DOMS的部分作用機理，為中藥復方治療DOMS提供科學依據(jù)。但限于實驗中難以評價受損骨骼肌的疼痛程度，無法明確活血法(身痛逐瘀湯)治療DOMS的臨床療效，本研究團隊擬進一步開展臨床試驗，通過測定身痛逐瘀湯降低DOMS患者骨骼肌疼痛程度和收縮功能的恢復程度來綜合評價其療效，并進一步在臨床上推廣應用。

[1] 郝春麗，楊雋，張曉軍.延遲性肌肉酸痛的發(fā)生機制和防治措施[J].黑龍江醫(yī)藥科學，2013，36(1)：100-101.

[2] 吳云川，孫永，李怡，等.推拿對一次性力竭運動DOMS大鼠模型血清PGE2的影響[J].南京中醫(yī)藥大學學報，2014，30(4)：386-388.

[3] 周越，李揚，王瑞元，等.運動性骨骼肌損傷評價指標血清CK、LDH、Mb的比較[J].中國運動醫(yī)學雜志，2008，27(2)：206-208.[4] 張慧，時震宇，趙廣高，等.大蒜素與聯(lián)合抗氧化劑干預對運動員DOMS和CK-MM、CK等的影響[J].武漢體育學院學報，2011，45(3)：59-62.

[5] 趙廣高，蘇全生，李新建，等.大蒜素與聯(lián)合抗氧化劑對一次大強度離心運動后運動員血清T-AOC等水平的影響[J].首都體育學院學報，2012，24(2)：189-192.

[6] 李晟，李小剛.延遲性肌肉酸痛產(chǎn)生的機制及中醫(yī)治療[J].赤峰學院學報(自然科學版)，2009，25(7)：69-70.

[7] 張海平，劉建軍，董敏輝.延遲性肌肉酸痛的研究進展[J].沈陽體育學院學報，2007，26(3)：52-55.

[8] 馬建，張鑫，劉波，等.中藥消除運動性疲勞臨床研究之四—外用中藥“疲王霜”對女子重競技運動員肌肉酸痛的臨床療效觀察[J].中國運動醫(yī)學雜志，2011，30(1)：67-69.

(本文編輯： 禹佳)

Effect ofShentongZhuyudecoction on skeletal muscle micro-injury and inflammatory factors of DOMS rats model

FENGYu，YANGMinghui，DOUYongqi，etal.

DepartmentofTraditionalChineseMedicine,PLAGeneralHospital，Beijing100853，China

Correspongdingauthor:YANGMinghui，E-mail：ymh9651@sina.com

Objective To explore the therapy mechanism ofShentongZhuyudecoction on DOMS. Methods 81 male SD rats were randomly divided into control group, western medicine control group and Chinese medicine treatment group. All rats were given exhausting swimming train with a load of 3% body weight. The western medicine control group was treated with vitamin C tablets and vitamin E soft capsules, the Chinese medicine treatment group was treated withShentongZhuyudecoction. The changes of CK, LDH, PGE2were observed. Results The level of CK in Chinese medicine treatment group was obviously lower than that of control group, western medicine control group in 24 hours and 72 hours. The level of LDH in Chinese medicine treatment group was obviously lower than that of control group, western medicine control group in 24 hours and 48 hours. The level of PGE2in Chinese medicine treatment group was obviously lower than that of control group in 24 hours and 72 hours. ConclusionShentongZhuyudecoction can lower the level of skeletal muscle micro-injury and inhibit the release of inflammatory factors.

ShentongZhuyudecoction; Delayed onset muscular soreness； Delayed onset muscle soreness; Inflammatory factors

100853 北京，中國人民解放軍總醫(yī)院中醫(yī)內科(馮宇、楊明會、竇永起、李紹旦、張印、王瑛、蒲香蓉)；中國人民解放軍93424部隊(王瑛)

馮宇(1978- )，碩士，主治醫(yī)師。研究方向：中西醫(yī)結合臨床。E-mail：fengwengang5097@sina.com

楊明會(1962- )，教授，主任醫(yī)師。研究方向：中醫(yī)及中西醫(yī)結合臨床及基礎研究。E-mail：ymh9651@sina.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2017.04.008

2016-07-27)