陸繼紅+施曉艷+萬(wàn)金華

【摘要】 目的 探討葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的臨床關(guān)系。方法 80例不良孕產(chǎn)婦女作為不良孕產(chǎn)組， 80例正常生育婦女作為正常組。采集兩組婦女的口腔黏膜上皮細(xì)胞提取基因組DNA， 以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)進(jìn)行基因多態(tài)性檢測(cè)。觀察兩組婦女的基因型分布特點(diǎn)， 并就其與不良孕產(chǎn)之間的關(guān)系展開(kāi)分析。結(jié)果 不良孕產(chǎn)組婦女亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因C677T位點(diǎn)的TT突變純合型、A1298C位點(diǎn)的CC突變純合型， 甲硫氨酸合成酶還原酶（MTRR）基因A66G位點(diǎn)GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點(diǎn)的CC野生純合型、A1298C位點(diǎn)的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點(diǎn)的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的發(fā)生有重要的關(guān)聯(lián)。

【關(guān)鍵詞】 亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態(tài)性；不良孕產(chǎn)；代謝相關(guān)酶

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.16.042

葉酸是一種水溶性維生素， 也是我們常說(shuō)的維生素B9， 可以治療女性貧血， 更是預(yù)防胎兒神經(jīng)管畸形的重要物質(zhì)。葉酸在體內(nèi)需要經(jīng)過(guò)多重酶的催化才具有代謝活性， 其中關(guān)鍵的MTHFR、MTRR等酶的基因位點(diǎn)多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致酶的活性降低， 從而造成葉酸代謝障礙， 引發(fā)一系列的疾病[1]。近年來(lái)， 臨床上針對(duì)葉酸代謝機(jī)制的研究越來(lái)越多， 很多研究指出[2]， 一部分婦女因葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性導(dǎo)致不良孕產(chǎn)情況。本次研究以本院收集的160例婦女為研究對(duì)象， 探討葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的臨床關(guān)系。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2014年12月～2016年12月收治的80例不良孕產(chǎn)婦女作為不良孕產(chǎn)組， 同期在本院檢查的80例正常生育婦女作為正常組。160例婦女年齡20～40歲， 平均年齡（30.4±4.5）歲；既往發(fā)生過(guò)48例習(xí)慣性流產(chǎn)、36例胎停、44例死胎、32例生育神經(jīng)管缺陷患兒；46例生育1次， 114例生育1次以上。排除意識(shí)障礙、外感染、解剖學(xué)因素、福氣雙方染色體異常者， 本次研究由患者及其家屬簽署同意書(shū)。

1. 2 方法

1. 2. 1 設(shè)備與試劑 采用PCR分析儀ABI7500， 采用的PCR試劑、引物均由美國(guó)ABI公司提供， DNA提取試劑盒購(gòu)于德國(guó)Qiagen公司。葉酸代謝障礙相關(guān)的單核苷酸基因多態(tài)性位點(diǎn)包括MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G， 反應(yīng)所用的基因多肽位點(diǎn)引物信息， MTHFR C677T上游引物：5'-GAA AAG CTG CGT GAT GAT G-3'， 下游引物5'-TTG AAG GAG AAG GTA TC-3'；MTHFR A1298C上游引物：5'-AAG AAC GAA GAC TTA AAA-3'， 下游引物：5'-TGG GGG GAG GAG CTG AC-3'； MTRR A66G上游引物：5'-AGG CAA AGG CCA TCG CA-3'， 下游引物：5‘-ATC CAT GTA CCA CAG CTT-3'[3]。

1. 2. 2 DNA提取 采集兩組婦女的口腔黏膜上皮細(xì)胞， 用柱式抽提試劑盒抽提樣本DNA， 采用基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)葉酸代謝相關(guān)酶MTHFR C677T、MTHFR A1298C、MTRR A66G的基因多態(tài)性。每個(gè)反應(yīng)體系包括1 μl 20 ng/μl DNA模板， 5 μl 2×MasterMix， 0.5 μl 20×引物， 3.5 μl去水離子。每個(gè)反應(yīng)體系的總體積為10 μl， 以95℃反應(yīng)10 min， 后以92℃反應(yīng)15 s， 60℃反應(yīng)1 min， 以此進(jìn)行20個(gè)循環(huán)后， 以89℃反應(yīng)15 s， 60℃反應(yīng)90 s再進(jìn)行30個(gè)循環(huán)。結(jié)束后進(jìn)行基因測(cè)序， 確定兩組婦女基因分型[4]。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點(diǎn)的TT突變純合型、A1298C位點(diǎn)的CC突變純合型， MTRR基因A66G位點(diǎn)GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點(diǎn)的CC野生純合型、A1298C位點(diǎn)的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點(diǎn)的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

隨著近年來(lái)臨床上針對(duì)葉酸代謝相關(guān)基因的多態(tài)性與出生缺陷、不良妊娠的關(guān)系的研究擴(kuò)大， 國(guó)內(nèi)外針對(duì)育齡婦女葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性的研究逐漸引起關(guān)注。MTHFR和MTRR是葉酸代謝過(guò)程中關(guān)鍵的酶， 前者能夠起到催化N5、N10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為N5-甲基四氫葉酸的作用， 后者可作為甲基供體， 在MTRR的催化下廣泛參與到體內(nèi)的甲基化反應(yīng)中[5]。有研究指出， 葉酸代謝酶的活性降低， 可能導(dǎo)致同型半胱氨酸不能順利轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸， 從而促使血漿中葉酸水平降低， 同型半胱氨酸濃度升高。這樣一來(lái)， 就容易引起患者血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷和功能異常， 血小板粘附和聚集被激活， 引起胎盤(pán)血栓性病變[6]。

MTHFR位于1號(hào)染色體短臂， 有11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子， 其中最受關(guān)注的C677T和A1298C兩個(gè)基因突變位點(diǎn)是影響葉酸代謝障礙婦女的關(guān)鍵。MTRR位于5號(hào)染色體短臂， 有15個(gè)外顯子和14個(gè)內(nèi)含子， 以A66G基因多態(tài)性突變位點(diǎn)為常見(jiàn)[7]。本次研究結(jié)果顯示， 不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點(diǎn)的TT突變純合型、A1298C位點(diǎn)的CC突變純合型， MTRR基因A66G位點(diǎn)GG突變純合型基因頻率（47.50%、12.50%、18.75%）均高于正常組（21.25%、3.75%、7.50%）， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不良孕產(chǎn)組婦女MTHFR基因C677T位點(diǎn)的CC野生純合型、A1298C位點(diǎn)的AA野生純合型， MTRR基因A66G位點(diǎn)的AA野生純合型基因頻率（21.25%、50.00%、41.25%）均低于正常組（36.25%、66.25%、58.75%）， 差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說(shuō)明， C677T多態(tài)性突變?cè)贛THFR基因第4個(gè)外顯子的第677位核苷酸上細(xì)胞嘧啶突變?yōu)樾叵汆奏ぃ?表現(xiàn)為CC、CT、TT三種基因型。此突變導(dǎo)致基因位點(diǎn)處原本222位密碼子編碼的丙氨酸被纈氨酸替代， 酶熱穩(wěn)定性降低。A1298C多態(tài)性突變?yōu)镸THFR基因第7個(gè)外顯子上的第1298位核苷酸上腺嘌呤被細(xì)胞嘧啶替代， 表現(xiàn)為AA、AC、CC型， 促使該基因位點(diǎn)處429位密碼自編碼的谷氨酸被丙氨酸替代， 酶活性降低。A66G多態(tài)性突變導(dǎo)致甲硫氨酸被異亮氨酸替代， 酶活性降低[8]。

綜上所述， 葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)的發(fā)生有重要的關(guān)聯(lián)。

參考文獻(xiàn)

[1] 李茜西， 伍萍芝， 何琳琳， 等. 葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與不良孕產(chǎn)發(fā)生易感性的關(guān)系. 重慶醫(yī)學(xué)， 2015（10）：1330-1333.

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[6] 陳云霞， 武延雋， 申麗麗. 育齡女性葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性分析. 中國(guó)公共衛(wèi)生， 2010， 26（8）：958-959.

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[8] 謝曉媛. 葉酸代謝酶MTHFR、MTRR基因多態(tài)性與原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性研究. 天津醫(yī)科大學(xué)， 2015.