閆慧嬌，王志偉，陳燕平，姜姣姣，崔莉，耿巖玲，王曉*

(1.山東省中藥質(zhì)量控制重點實驗室，山東省分析測試中心，山東 濟(jì)南 250014；2.煙臺出入境檢驗檢疫局，山東 煙臺 264000 3.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014)

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【中藥與天然活性產(chǎn)物】

鳳丹牡丹花瓣化學(xué)成分研究

閆慧嬌1，王志偉1，陳燕平2，姜姣姣3，崔莉1，耿巖玲1，王曉1*

(1.山東省中藥質(zhì)量控制重點實驗室，山東省分析測試中心，山東 濟(jì)南 250014；2.煙臺出入境檢驗檢疫局，山東 煙臺 264000 3.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014)

對鳳丹牡丹花瓣化學(xué)成分進(jìn)行深入研究，運用高效液相色譜方法進(jìn)行分離純化，運用1H NMR、13C NMR和MS波譜學(xué)數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果得到2個沒食子酸鞣質(zhì)類化合物，分別為1-O-galloyl-β-D-glucose(1)和1,2,3,4,6-Trigalloyl-β-D-glucose(2)，以及一個黃酮類化合物kaempferol-3,7-di-O-β-D-glucopyranoside(3)?；衔?～3均首次從鳳丹牡丹花中分離得到，化合物1～2也是首次從鳳丹牡丹花中分離得到鞣質(zhì)類化合物。

牡丹；花瓣；鞣質(zhì)；黃酮

牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr.)屬毛茛科芍藥屬灌木，為傳統(tǒng)名貴觀賞花卉，又有富貴花和“花中之王”的美稱。其根皮，又稱牡丹皮、丹皮，為傳統(tǒng)中藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為中品，具有清熱涼血、活血化瘀之功效[1]。牡丹花作為特色的天然生物資源，在我國有悠久的藥用和食用歷史，《四川中藥志》載牡丹花性平、苦、淡，具有調(diào)經(jīng)活血的功能[2]。牡丹花是較好的天然營養(yǎng)保健資源，鳳丹牡丹(PaeoniasuffruticosaAndr. cv. Fengdan) 花2013年被國家衛(wèi)計委批準(zhǔn)為新食品原料[3]。前期研究中，我們對鳳丹牡丹花的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離，并從中得到7個單萜糖苷類化合物、9個黃酮類化合物和2個沒食子酸類化合物[4-5]。

鞣質(zhì)(tannins)又稱單寧，是存在于植物體內(nèi)一類結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的多元酚類化合物。鞣質(zhì)廣泛存在于植物界，其多元酚類結(jié)構(gòu)賦予它一系列獨特的化學(xué)性質(zhì)，并具有很強(qiáng)的生物和藥理活性，固澀收斂滑脫、遏制氣血津液耗散的藥物都含有豐富的鞣質(zhì)成分。現(xiàn)代研究表明，鞣質(zhì)具有抗氧化[6]、抗腫瘤[7-8]、抑菌[9]、抗病毒[10]以及免疫調(diào)節(jié)[11-12]的藥理活性。我們在前期研究的基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜制備的方法，大大減少了鞣質(zhì)的損失。結(jié)果得到2個沒食子酸鞣質(zhì)類化合物，分別為1-O-galloyl-β-D-glucose(1)和1, 2, 3, 4, 6-trigalloyl-β-D-glucose(2)。同時得到1個黃酮類化合物kaempferol-3,7-di-O-β-D-glucopyranoside(3)?；衔?～3(結(jié)構(gòu)式見圖1)均為首次從鳳丹牡丹花中分離得到，也是首次從鳳丹牡丹花中分離得到鞣質(zhì)類化合物。

圖1 化合物1～3結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structures of compounds 1～3

1 儀器與材料

Varian INOVA-600型核磁共振波譜儀(美國Varian公司，以TMS為內(nèi)標(biāo))；Varian INOVA-400型核磁共振波譜儀(美國Varian公司，以TMS為內(nèi)標(biāo))；Agilent 1120 型高效液相色譜儀(配有DAD檢測器，自動進(jìn)樣器，美國Agilent 公司)；R201 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司)；RIGOL L-3140型高效液相色譜儀(北京普源精電科技有限公司，色譜柱為YMC-PACK ODS-A column，250 mm×10 mm)；Agilent 5973型質(zhì)譜儀(美國Agilent公司)；FA1104 型電子天平(上海精天電子儀器廠)。

乙醇(分析純，德州恒業(yè)化工有限公司)；甲醇、石油醚，分析純(天津市化學(xué)試劑廠)；甲酸、乙腈(色譜純，山東禹王試劑有限公司)。

牡丹花采自山東菏澤，經(jīng)山東省分析測試中心劉偉副研究員鑒定為芍藥屬植物鳳丹牡丹的花。

2 提取與分離

取干燥后的鳳丹牡丹花瓣10 g，粉碎后于65%乙醇中60 ℃溫浸3次，每次4 h，合并提取液，減壓濃縮至無醇味。浸膏0.3 g分散于甲醇中(20 mL)成懸濁液，用石油醚萃取3次(3 ×20 mL)，甲醇部分蒸干復(fù)溶后直接采用高效液相色譜制備，得化合物1(1.2 mg)、2(2.0 mg)和3(5.0 mg)。

2.1 制備條件

采用RIGOL L-3140型高效液相色譜儀，色譜柱為YMC-PACK ODS-A(250 mm×10 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相，梯度洗脫：0～5 min，5%乙腈；5～8 min，5%～12%乙腈；8～23 min，12%乙腈；23～24 min，12%～15%乙腈；24～30 min，15%乙腈；30～31 min，15%～21%乙腈；31～48 min，21%乙腈；48～53 min，21%～34%乙腈；53～63 min，34%乙腈；63～64 min，34%～100%乙腈；64～69 min，100%乙腈；體積流量3.0 mL/min；進(jìn)樣量60 μL，檢測波長270 nm。色譜圖見圖2。

圖2 樣品制備高效液相色譜圖Fig.2 Chromatogram of the crude methanol extract by HPLC

2.2 化合物純度檢測

純度檢測梯度條件同上，采用Agilent 1120 型高效液相色譜儀，色譜柱為納微Nano-Micro C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL，檢測波長270 nm，化合物純度均大于95%。色譜圖見圖3。

圖3 單體化合物高效液相色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of compound 1～3

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無色粉末。ESI-MSm/z: 333 [M + H]+。1H NMR (DMSO, 600 MHz): δH7.00 (2H, s, H-2, 6), 5.50 (1H, d,J= 8.0 Hz, Glc-1′), 3.14～3.67 (6H, m, Glc-2′-6′);13C NMR (DMSO, 150 MHz):δC119.18 (C-1), 109.47 (C-2, 6), 146.09 (C-3, 5), 139.48 (C-4), 94.89 (Glc-1), 73.04 (Glc-2), 78.29 (Glc-3), 69.96 (Glc-4), 77.03(Glc-5), 61.02(Glc-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道對照基本一致，故鑒定化合物為1-O-galloyl-β-D-glucose。

化合物2：無色粉末。ESI-MSm/z: 941 [M + H]+。1H NMR (DMSO, 400 MHz):δH6.37 (1H, d,J= 8.2 Hz, Glc-1), 5.95 (1H, t,J= 9.6 Hz, Glc-3), 5.46 (2H, m,Glc-1-2,4), 4.59 (1H, d,J= 9.6 Hz, Glc-5), 4.32 (2H, brs, Glc-6);13C NMR (DMSO, 150MHz): δC92.16 (Glc-1), 71.01 (Glc-2), 72.38 (Glc-3), 68.17 (Glc-4), 72.57 (Glc-5),61.86 (Glc-6), 117.73(G1-1),109.51 (G1-2, 6),146.18 (G1-3, 5),140.25 (G1-4),164.44 (G1-7), 118.52(G3-1),109.19(G3-2, 6), 145.88 (G3-3, 5),139.45 (G3-4), 165.93 (G3-7),118.35(G2-1), 109.37(G2-2, 6), 145.96 (G2-3, 5),139.69 (G2-4), 165.29 (G2-7), 118.50(G4-1),109.27(G4-2, 6),146.00 (G4-3, 5), 139.66 (G4-4),165.07 (G4-7),119.33(G6-1),109.24(G6-2, 6), 146.06 (G6-3, 5), 139.31 (G6-4), 164.94 (G6-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報道對照基本一致，故鑒定化合物為1,2,3,4,6-Trigalloyl-β-D-glucose。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm/z: 611 [M + H]+。1H NMR (DMSO, 400 MHz):δH6.45 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-6), 6.80 (1H, d,J= 1.8 Hz, H-8), 8.07 (2H, d,J= 9.0 Hz, H-2′, 6′), 7.33 (2H, d,J=9.0 Hz, H-3′, 5′), 5.49 (1H, d,J= 7.3 Hz, Glc-1),5.08 (1H, d,J= 7.3 Hz, Glc-1′), 3.08-3.55 (14H, m, Glc-2-6, Glc′-2-6);13C NMR (DMSO, 100MHz):δC157.30 (C-2), 133.95 (C-3), 178.11 (C-4), 161.33 (C-5), 100.22 (C-6), 163.30 (C-7), 94.94 (C-8), 160.62 (C-9), 106.14 (C-10), 121.23 (C-1′), 131.46 (C-2′, 6′), 115.63 (C-3′, 5′), 156.49 (C-4′), 101.20 (Glc-1), 74.69 (Glc-2), 76.91 (Glc-3), 70.39(Glc-4), 78.01(Glc-5), 61.31(Glc-6), 99.83 (C-1?), 73.56 (C-2?), 76.91 (C-3?), 70.07(C-4?), 77.64(C-5?), 61.11(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報道對照基本一致，故鑒定化合物為kaempferol-3,7-di-O-β-D-glucopyranoside。

4 結(jié)果與討論

為了全面了解鳳丹牡丹花化學(xué)成分，前期我們對其進(jìn)行了系統(tǒng)的成分分離，采用方法為硅膠、聚酰胺等進(jìn)行粗分，再以Sephadex LH-20、中壓制備、高效液相色譜等分離得到單體化合物的常規(guī)方法[3-4]，但是在分離中并未得到鞣質(zhì)類化合物。說明由于鞣質(zhì)在硅膠和聚酰胺等分離材料中不易洗脫，損失極大，常規(guī)分離方法不適合于鞣質(zhì)的分離。在前期研究的基礎(chǔ)上，我們采用直接高效液相色譜制備的方法，有針對性地對鞣質(zhì)類成分進(jìn)行了分離，大大減少了鞣質(zhì)的損失，并首次從鳳丹牡丹花中分離得到鞣質(zhì)類化合物。

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Research on tannins and flavonoid from the flower petals ofPaeoniasuffruticosaAndr. cv. Fengdan

YAN Hui-jiao1, WANG Zhi-wei1, CHEN Yan-ping2,JIANG Jiao-Jiao3, CUI Li1, GENG Yan-ling1, WANG Xiao1*

(1.Shandong Analysis and Test Center,Shandong Key Laboratory Breeding Base of TCM Quality Control Technology,Jinan 250014,China; 2.School of Pharmaceutical Sciences, 3.Yantai Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Yantai 264000,China；Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250014,China)

∶In this paper, the chemical constituents from the flower petals ofPaeoniasuffruticosaAndr. cv. Fengdan were thoroughly studied, which were isolated and purified by HPLC, and identified by1H NMR、13C NMR and MS. Two gallotannins both 1-O-galloyl- β-D-glucose (1) and 1, 2, 3, 4, 6-Trigalloyl- β-D-glucose (2), as well as a flavonoid kaempferol-3,7-di-O- β-D-glucopyranoside (3) were isolated from the flower petals ofPaeoniasuffruticosaAndr. cv. Fengdan by HPLC methods. Compounds 1～3 were all obtained from the flowers ofPaeoniasuffruticosaAndr. cv. Fengdan for the first time, and Compounds 1～2 were also the tannins obtained from this genus for the first time.

∶PaeoniasuffruticosaAndr. cv. Fengdan; flower petals; gallotannins; flavonoid

10.3976/j.issn.1002-4026.2017.03.003

2016-08-01

山東省科學(xué)院青年基金(青基合字2015第2號)；山東省自然科學(xué)基金三院聯(lián)合基金(ZR2015YL012)

閆慧嬌(1984-)，博士，助理研究員，研究方向為天然產(chǎn)物分離純化及活性。E-mail: yanhuijiao01@163.com

*通信作者，王曉，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向為天然產(chǎn)物化學(xué)及中藥資源。E-mail: wangx@sdas.org

R284.1

A

1002-4026(2017)03-0012-05