趙立軍,崔敏,儲君，宋志元，孫雪峰，梁群超，張要齊*

（1.鄭州市動物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州 450016；2.新鄭市科學技術(shù)局，河南新鄭 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新鄭451162）

復方中藥增免顆粒藥材提取工藝研究

趙立軍1,崔敏2,儲君3，宋志元3，孫雪峰3，梁群超3，張要齊*3

（1.鄭州市動物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州 450016；2.新鄭市科學技術(shù)局，河南新鄭 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新鄭451162）

目的 優(yōu)選復方中藥增免顆粒藥材提取工藝。方法 用水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)為參考因素，總多糖含量和干膏得率為指標，采用正交設(shè)計試驗選擇優(yōu)良水提工藝。結(jié)果 最佳水提工藝組合為A3B3C2，即加水量為12倍，每次3h，煎煮2次。結(jié)合藥材的吸水率試驗，在第一次加水時需要比正常水量多加入2.1倍藥材量的水量。結(jié)論：本試驗優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、可行，為復方中藥增免顆粒藥材提取提供參考。

中藥；增免顆粒；正交設(shè)計；提取工藝

復方中藥增免顆粒方劑是由黃芪、黨參、淫羊藿等幾味藥組成?，F(xiàn)代藥理研究表明：黃芪具有提高免疫功能，增強抗氧化作用，保護細胞活力，抗菌及抑制病毒作用；黨參具有補中益氣，健脾益肺之功效。增強免疫力、擴張血管、降壓、改善微循環(huán)、增強造血功能等作用；淫羊藿具有補腎陰、強筋骨、祛風濕等多種功效。能夠改善心血管系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、改善骨密度、增強免疫力。復方中藥增免顆粒具有提高機體免疫、促進機體生長發(fā)育等功效。為確定其最佳提取工藝，本文采用正交設(shè)計試驗以總多糖含量和干膏得率為控制指標，對其提取工藝進行研究。

1 材料與試藥

1.1 儀器與設(shè)備

FE120型中藥粉碎機 （河北省黃燁市新興電器廠）；D2F-1ASB真空干燥箱 （北京科偉儀器有限公司）；DH-360電熱恒溫培養(yǎng)箱 （北京科偉儀器有限公司）；AB135S電子天平 （帥寧儀器上海有限公司）；DZKW-4型電熱恒溫水浴鍋（江蘇金壇儀器有限公司）；MD-2270MI微波爐（青島海爾微波爐制品有限公司）；UV-5300紫外可見光分光光度計（上海元析儀器有限公司）；KQ-250TDv超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥材與試劑

黃芪、黃精、黨參、淫羊藿等（購于河南禹州中藥材市場）；無水乙醇 （煙臺雙雙化工有限公司）、葡萄糖標準品 （中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）、苯酚、濃硫酸（天津風船化學試劑科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定方法

2.1.1 干膏得率的測定方法

準確稱取處方量的中藥材，提取，濾過，濾液合并，冷藏靜置，過濾，減壓濃縮至每ml含1g生藥，精密量取濃縮后藥液10mL置已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后,于105℃的干燥箱中干燥3小時,再移置干燥器中,冷卻30min后迅速精密稱定重量，計算藥液的總固量，作為每次實驗的干浸膏得率。

2.1.2 總多糖含量測定方法[1]

2.1.2.1 線性關(guān)系考察

精密稱取已于105℃干燥至恒重的葡萄糖標準品100mg于干凈小燒杯中，加水溶解并定量移至100ml的容量瓶中，加水稀釋至容量刻度，混勻，即得1mg/ml的葡萄糖標準品溶液。分別精密吸取該葡萄糖標準品溶液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml置于100ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度。分別吸取以上各種濃度的葡萄糖標準品稀釋標準溶液2ml于具塞試管中，加5%的苯酚試液1ml，混勻，迅速加5ml濃硫酸，劇烈振搖2分鐘，然后置沸水浴加熱15分鐘，取出置冷水中迅速冷卻，備用。以苯酚-硫酸溶液作空白，于491nm處測定吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，建立標準曲線，得回歸方程?；貧w方程為y=13.014x-0.008，r2=0.9911。

圖1 標準曲線圖

2.1.2.2 供試品溶液制備

提取液減壓濃縮至每1ml含1g生藥，精密量取2.5ml提取濃縮液，3600rpm離心5min去除沉淀，上清液加10ml無水乙醇，振搖，離心10分鐘，沉淀水浴蒸干，加水10ml，水浴30分鐘，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加水定容，備用。

2.1.2.3 總多糖含量測定方法

取供試品5ml至100ml容量瓶中，加水定容至刻度，取10ml稀釋定容至100ml，得待測溶液。精密量取待測溶液2ml于具塞試管中，加5%的苯酚試液1ml，混勻，迅速加5ml濃硫酸，劇烈振搖2分鐘，然后置沸水浴加熱15分鐘，取出至冷水中迅速冷卻，以苯酚-硫酸溶液作空白，于491nm處測定吸光度。根據(jù)吸光度結(jié)果代入回歸方程，計算出總多糖濃度。

2.2 藥材吸水率考察

取1/5處方量黃芪、黨參、黃精、淫羊藿四味藥材三份,每份加10倍量水浸泡過夜,直至藥材全部被浸透,將未被吸收的水液全部濾出,通過吸水率的公式計算藥材吸水率。四味藥材的藥材吸水率結(jié)果如表1所示。

吸水率=(藥材濕重-藥材干重)/藥材干重×100%

表1 藥材吸水率考察結(jié)果

結(jié)果顯示，吸水率為211.4%。由于第一次加入時，藥材會吸收水分，在第一次加水時需要比正常水量多加入2.1倍藥材量的水量。

2.3 水提工藝正交設(shè)計

2.3.1 水提工藝L9(34)水平設(shè)計

水提工藝的因素水平見表2。

表2 水提因素水平表

2.3.2 水提工藝正交結(jié)果及分析

表3 水提工藝正交試驗設(shè)計及結(jié)果

表4 綜合評分方差分析

由表3中的直觀分析可知，按綜合評分標準進行評判時，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞b1，C2＞C3＞C1。由表4可知，各因素影響主次關(guān)系C＞A＞B，并且可知A和C因素對提取工藝有顯著影響(P＜0. 10)，其中C因素（P＜0.05）,所以從生產(chǎn)實際和經(jīng)濟因素綜合考慮，我們選用最佳提取工藝為A3B3C2，即用12倍量水提取兩次，每次3h。

2.4 水提工藝驗證試驗

取1/5處方量的黃芪、淫羊藿、黃精、黨參三份，按最佳提取工藝進行提取，測定干膏得率和總多糖含量，所得結(jié)果如表5。

表5 水提工藝驗證試驗表

結(jié)果表明，RSD干膏得率及總糖含量均小于3%，該工藝穩(wěn)定、可行。

3 小結(jié)與討論

評價指標選擇：復方中藥增免顆粒藥材均含多糖，查閱文獻資料[2]，淫羊藿多糖、黃芪多糖、黨參多糖等都有增強免疫力的作用，故總多糖含量測定作為的評價指標。由于為水提液,干膏得率也是重要的一個評價提取工藝的指標。根據(jù)文獻[3],并結(jié)合本工藝,最終選擇總多糖含量和干膏得率作為優(yōu)選工藝的評價指標。

通過L9（34）正交試驗，設(shè)置了三個因素即加水量、煎煮時間和煎煮次數(shù)，每個因素設(shè)置三個水平。以干膏得率和總多糖含量為評價指標，并結(jié)合生產(chǎn)實際，確定了最佳的水提工藝。最佳水提工藝組合為A3B3C2，即加水量為12倍，每次煎煮3h，總共煎煮2次。且由藥材的吸水率試驗可知，在第一次加水時需要比正常水量多加入

2.1 倍藥材量的水量。

通過對最佳水提工藝的驗證試驗，表明所得最佳的水提工藝穩(wěn)定可行，為復方中藥增免顆粒藥材提取提供參考。

[1]王宏潔、李鵬躍、劉婷等.苯酚-硫酸法測定清開靈注射液中總多糖的含量[J].中國實驗方劑學雜志, 2009,15(11):3-5

[2]李龍.黃芪多糖、淫羊藿多糖免疫增強作用研究[D].新疆農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文.2013.12.

[3]蘇玉順、李艷君、趙方振等.紫外-可見分光光度法在植物多糖含量測定中的應(yīng)用[J].光譜實驗室, 2011,28(3):1102-1105.

S853.73

B

1003-8655（2017）03-0010-03

2017-01-06

趙立軍:1981-,獸醫(yī)師，從事畜牧獸醫(yī)工作,

郵箱：798697489@qq.com

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張要齊（1978-），高級經(jīng)濟師，碩士，從事農(nóng)業(yè)推廣工作，httx0371@126.com