馮亞靜，田 寅，陳高輝，曹玉杰，周 昱

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007)

聯(lián)合檢測EZH2、Ki67在乳腺癌中的表達及相關(guān)性①

馮亞靜，田 寅，陳高輝，曹玉杰，周 昱

(佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：研究果蠅zeste基因增強子同源物 2(Enhancerofzestehomolog2，EZH2)和增殖細胞核抗原(Ki-67)在人乳腺癌中的表達及二者表達的相關(guān)性。方法：對50例乳腺癌石蠟包埋的組織標本，采用免疫組化法檢測EZH2、Ki-67的表達情況，分析其與臨床病理因素的關(guān)系及兩者的相關(guān)性。結(jié)果：①乳腺癌EZH2、Ki-67陽性表達率分別為78%、62%，明顯高于癌旁正常組織的表達，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；②二者的表達與患者發(fā)病年齡、絕經(jīng)情況無關(guān)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及組織學分級有關(guān)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；③乳腺癌中二者呈正相關(guān)表達(P<0.05)。結(jié)論 ：乳腺癌中EZH2、Ki-67的異常表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、組織學分級相關(guān)，二者表達呈正相關(guān)。

乳腺癌;EZH2;Ki-67;聯(lián)合監(jiān)測;相關(guān)性

隨著時代的發(fā)展，乳腺癌儼然已成為一種嚴重威脅女性健康,隨著飲食習慣及環(huán)境變化和人們生活水平的提高發(fā)病率逐年升高的惡性腫瘤之一[1]。EZH2是在PCG基因家族中起著核心作用的一個成員，它被研究發(fā)現(xiàn)歸屬轉(zhuǎn)錄抑制因子的一種，高表達于各種癌組織中[2]，密切相關(guān)于增殖腫瘤細胞。Ki-67是一種核抗原，高表達于增殖期細胞中，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其可作為細胞增殖活性的反映。國內(nèi)外研究顯示，許多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預后均與EZH2 和Ki67 的異常表達息息相關(guān)。但聯(lián)合檢測EZH2與Ki67 在乳腺癌中的相關(guān)研究鮮有論述。

1 材料與方法

1.1 材料

選取50例2014～2016年佳木斯大學附屬第一醫(yī)院腫瘤科的乳腺癌手術(shù)患者的包埋石蠟標本及50例乳腺癌旁組織包埋的蠟塊標本。選取標準：選取患者術(shù)前均沒有行內(nèi)分泌口服治療、卵巢去勢治療、靶向治療、放化療及其他治療方法。選取標本均經(jīng)本院病理組織學檢查證實。

標本處理:福爾馬林緩沖溶液固定標本，常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋，石蠟切片(3μm)，后貼于載玻片上，烘片，行免疫組織化學染色。

1.2 主要試劑

濃縮型鼠抗人EZH2單克隆抗體(CellSignalingTech-nology，USA)、濃縮型鼠抗人Ki-67單克隆抗體(CellSignalingTech-nology，USA),免疫組織化學試劑盒、顯色試劑盒(北京中山生物技術(shù)有限公司)。

1.3 方法

采用Envision免疫組織化學染色法檢測EZH2和Ki-67的表達，操作嚴格依照購置試劑盒說明書，用PBS緩沖液代替一抗做陰性對照。脫蠟至水，陽性對照組為已知陽性乳腺癌組織。抗原修復，滴加一抗4℃過夜，二抗孵育，顯色、復染、脫水、透明、封片。

1.4 結(jié)果判定

結(jié)果判定:EZH2和Ki-67二者均主要表達于細胞核，陽性染色為顯微鏡下胞核見黃色顆粒沉淀，陰性即不染色。染色結(jié)果采取雙盲法觀察，每個標本隨機觀察高倍視野(×400)5個，對各個視野中陽性細胞個數(shù)、細胞總個數(shù)行計數(shù)。最后結(jié)果采取半定量積分法來分析。按文獻參照染色強度評分[3]：0分、1分、2分、3分分別為不顯色、淡黃色、棕黃色、棕褐色。百分比評分(陽性細胞占細胞總數(shù)的比例)：0分、1分、2分、3分、4分，分別為陰性、陽性細胞<25%、25%～50%、50%～75%、>75%?？傮w評分值=評分(染色強度)×評分(陽性細胞比例)，判定：陰性(-)、弱陽性(+)、陽性(++)、強陽性(+++)分別為總分≤3 分、>3分且≤5分、>5分且≤7分、>7 分。

坐落在揚州的江蘇虎豹集團，創(chuàng)建于1989年。集團擁有15家分公司，涉及服裝、商貿(mào)、旅游、房地產(chǎn)、金融等行業(yè)，現(xiàn)有職工12000多人，實現(xiàn)年銷售40億元人民幣，其中內(nèi)外銷服裝銷售25億元以上，主導產(chǎn)品“虎豹”牌襯衫、西服、休閑服等，憑借其卓越的品質(zhì)，遠銷全國及歐美、日韓等國家。先后榮獲中國十大名牌、中國服裝行業(yè)首批“中國馳名商標”、“中國最具市場競爭力品牌”和“中國500最具價值品牌”等國家大獎，為創(chuàng)立享譽世界的“虎豹”品牌奠定了堅實的基礎(chǔ)。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS16.0 ，樣本陽性率用χ2檢驗，P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1EZH2表達

EZH2陽性表達主要位于胞核。EZH2在乳腺癌中、癌旁正常組織中的陽性表達率分別為78%、30%，在乳腺癌及癌旁正常組織中比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2= 23.19，P<0.05),見表 1。

表1 乳腺癌及乳腺癌旁正常組織中EZH2的表達(例數(shù))

2.2Ki-67表達

Ki-67陽性表達主要位于胞核。Ki-67在乳腺癌中、癌旁正常組織中的陽性表達率分別為62%、34%，Ki-67在乳腺癌及癌旁正常組織中比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.85，P<0.05)，見表2。

表2 乳腺癌及乳腺癌旁正常組織中Ki-67的表達

2.3EZH2與臨床病理因素的關(guān)系

見表3。經(jīng)統(tǒng)計學分析，EZH2的表達與組織分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與年齡、絕經(jīng)情況無相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表3 EZH2與臨床病理因素的關(guān)系

2.4Ki-67與臨床病理因素的關(guān)系

經(jīng)統(tǒng)計學分析，Ki-67的表達與組織分化、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與年齡、絕經(jīng)情況無相關(guān)性，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 Ki-67與臨床病理因素的關(guān)系

2.5EZH2與Ki-67二者的關(guān)系

經(jīng)統(tǒng)計學分析，EZH2與Ki-67表達成正相關(guān)(χ2=3.93，P<0.05) ，見表 5。

表5 乳腺癌中EZH2 與 Ki-67的相關(guān)性

3 討論

EZH2在PCG基因家族中扮演著重要角色,細胞的生長及調(diào)節(jié)與其相關(guān),研究發(fā)現(xiàn)，機制調(diào)節(jié)細胞增殖主要是抑制染色質(zhì)中的靶點基因,增殖細胞進入S期與其高表達相關(guān)。原代細胞的生長能力增強,EZH2在多種原發(fā)腫瘤中表達,密切相關(guān)于腫瘤的形成和生長[4]。作為轉(zhuǎn)錄抑制因子之一的EZH2蛋白，多種基因的活性可被其抑制,尤其是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,即EZH2一定程度上能夠促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。姚凡等[6]采用免疫組化法檢測EZH2在乳腺癌(共105例)中的表達，發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中EZH2陽性表達率為 69.5%，并分析淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤惡性程度與其表達水平有正相關(guān)性，ER表達和乳腺癌預后與其表達有負相關(guān)性，由此發(fā)現(xiàn)乳腺癌惡性細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移與EZH2的表達密切相關(guān)。

作為位于細胞核內(nèi)[7]的一種大分子蛋白質(zhì)，細胞增殖相關(guān)核抗原Ki67蛋白簡稱Ki67。Gerdes[8]等發(fā)現(xiàn)Ki67 除外G0期不表達，其他G1、G2、S、M期均表達。后又有發(fā)現(xiàn)Ki67[9]在活躍增值組織高度表達，低表達于靜止細胞中，二者研究均吻合，其他國內(nèi)外研究亦驗證了這一結(jié)論，有許多學者已將其作為細胞增殖度的標志之一[10]。隨著生物醫(yī)學發(fā)展，另有證明存在Ki67 對乳腺癌預后判斷也有參考意義的依據(jù)。

目前,EZH2和Ki67蛋白聯(lián)合監(jiān)測的表達在膀胱癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、胃癌中的表達研究較多。EZH2、Ki67在轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌、胃癌中的表達明顯增高,而且和未轉(zhuǎn)移者相比預后較差。二者可作為腫瘤標志物監(jiān)測結(jié)腸癌、胃癌的演變。目前在國外關(guān)于兩種蛋白EZH2和Ki67聯(lián)合檢測在乳腺癌中的研究鮮見報道,而在國內(nèi)尚未見報道。

本研究試圖采用免疫組化方法,通過對EZH2和Ki67兩種蛋白在癌旁正常組織及乳腺癌組織中表達的聯(lián)合檢測,在探討其與乳腺癌各臨床病理參數(shù)的基礎(chǔ)上，更進一步探討二者表達的相關(guān)性及此種相關(guān)性可能蘊含的臨床意義，即與診斷、治療以及預后的關(guān)系。

[1]王新，韓麗麗，趙海豐，等．PDCD4、mTOR在乳腺癌中的表達及意義[J]． 黑龍江醫(yī)藥科學，2016，39(1):82-86

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佳木斯大學研究生創(chuàng)新項目，編號：YM2016-061。

馮亞靜(1989～)女，河南新鄭人，在讀碩士研究生。

周昱(1969～)男，黑龍江雙鴨山人，學士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導師。E-mail：zhouyu731@126.com。

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1008-0104(2017)03-0080-02

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