劉 莉，張維娜，馬永娟，寧楠楠，周 迪，劉 丹

（佳木斯市疾病預(yù)防控制中心，黑龍江 佳木斯 154007）

手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是由一組腸道病毒引起的常見傳染病，引起手足口病的病毒屬于小RNA病毒科，其中柯薩奇病毒A16型和腸道病毒EV71型最常見。臨床表現(xiàn)以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹為主要臨床特征的一種急性傳染病。手足口病全年均可發(fā)病，有明顯的季節(jié)特點(diǎn)，以夏秋季多見，病毒在4℃可存活1年，在-20℃可長期保存，在外環(huán)境中病毒可長期存活[1]?，F(xiàn)將2013-2014年佳木斯市手足口病實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果分析如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

選取佳木斯市市區(qū)及周邊外市縣的疑似手足口病的患者，用于病毒分離的標(biāo)本包括糞便、咽拭子、皰疹液或腦脊液標(biāo)本，樣本在運(yùn)輸過程中要避免反復(fù)凍融，采集樣本后應(yīng)該在0～4℃條件下保存，運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室后如果不能立即檢測，則應(yīng)存放到-20℃或-70℃冰箱保存樣本，樣本編號、發(fā)病日期和采集日期要標(biāo)記好并作好原始記錄。

1.2 方法

手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷一般是通過采集適當(dāng)?shù)呐R床標(biāo)本后進(jìn)行病毒分離和病毒鑒定，用于腸道病毒分離的細(xì)胞系為RD細(xì)胞（對CA16和EV71敏感），CPE陽性的標(biāo)本在進(jìn)行熒光定量PCR檢測進(jìn)行型別鑒定。

1.3 病毒分離培養(yǎng)

運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室的樣本，10 000 rpm離心30min，充分混勻后，每份標(biāo)本接種RD細(xì)胞前，均用濾器過濾除菌。每份標(biāo)本同時(shí)接種兩瓶細(xì)胞，接種后放在33～35℃二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。每天觀察CPE的變化，每份標(biāo)本盲傳兩代，盲傳2代后，仍然沒有出現(xiàn)CPE的，則判定為陰性，CPE陽性標(biāo)本放置-20℃的冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2003和SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2013-2014年佳木斯市共采集疑似手足口病例133份，熒光定量PCR檢測陽性68份，RD細(xì)胞培養(yǎng)法分離陽性毒株24份。病毒分離陽性率為18.05%。其中EV71毒株9株，CA16毒株13株，其他HEV毒株2株。

2.1 年齡分布

2013-2014年，佳木斯市手足口病病毒分離陽性率各年齡組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.026，P＞0.05）。見表1。

表1 2013-2014年佳木斯市手足口病年齡分布

2.2 不同年份毒株分型情況

2013年手足口病病毒分離毒株分型以CA16為主，2014年毒株分型以EV71為主，兩年病毒分離陽性率無顯著差異（χ2=0.032，P ＞ 0.05)。見表2。

表2 2013-2014年佳木斯市手足口病病毒分離情況

2.3 性別分布

2013年手足口病PCR檢測和病毒分離檢測男性陽性人數(shù)高于女性陽性人數(shù)，2014年女性陽性人數(shù)高于男性陽性人數(shù)。見表3。

表3 2013-2014年佳木斯市手足口病性別分布情況 例

2.4 各地區(qū)分布情況

2013年手足口病病毒分離中，佳木斯市傳染病醫(yī)院10人，富錦CDC2人。2014年手足口病病毒分離中，富錦CDC4人，向陽區(qū)CDC3人，撫遠(yuǎn)CDC1人，郊區(qū)CDC2人，東風(fēng)區(qū)CDC2人。

2.5 手足口病病毒感染RD細(xì)胞情況

圖1為生長24h健康的單層RD細(xì)胞，形態(tài)呈梭型和大的多核細(xì)胞，貼壁生長。圖2為感染病毒72h的RD細(xì)胞，圖2中CPE變化明顯，細(xì)胞圓縮聚集，折光度增強(qiáng)，胞漿顆粒化，核圓縮、最后細(xì)胞皺縮破裂，由局部變化到出現(xiàn)80%CPE時(shí)進(jìn)行收毒。CA16和EV71在RD細(xì)胞中的生長速度不同，EV71的生長速度要快于CA16，表現(xiàn)為EV71感染RD細(xì)胞后出現(xiàn)CPE的時(shí)間比CA16早。

圖1 未染毒的RD細(xì)胞

圖2 感染EV71病毒的RD細(xì)胞

3 討論

手足口病是嬰幼兒中流行的急性腸道病毒 (Enterovirus,EV)感染，主要病因?yàn)榭滤_奇病毒 (Coxsackievirus)A組16型 (Cox.A16)[2]或EV71型[3]。我國于1981年上海首次報(bào)道本病，此后，北京、河北、天津、福建、吉林、山東、湖北、青海和廣東等十幾個(gè)省份均有本病報(bào)道[4]。

佳木斯市手足口病發(fā)病呈現(xiàn)波浪式趨勢。一般表現(xiàn)為每隔1～2年出現(xiàn)一次高發(fā)或連續(xù)兩年存在高發(fā)的情況，2013年發(fā)病率為7.37/10萬[4]。從這兩年的病毒分離結(jié)果來看，每年的手足口病病毒毒株的型別不同，2013年手足口病病毒分離毒株分型以CA16為主，2014年毒株分型以EV71為主。從患者的年齡上看，各年齡組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)，從兩年的病毒分離陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)，可以推測佳木斯市這兩年手足口病疫情比較穩(wěn)定。佳木斯市各地區(qū)均有手足口病的發(fā)病病例，并且沒有明顯的地域性差別，這與此前報(bào)道一致[4]。RD細(xì)胞支持HFMD的主要病原體——CA16和EV71的復(fù)制，CA16和EV71均能在RD細(xì)胞培養(yǎng)中引起特殊的腸道病毒致細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），表現(xiàn)為細(xì)胞圓縮、分散、胞漿內(nèi)顆粒增加，最后細(xì)胞自管壁脫落[1]。從本次的試驗(yàn)分析中可以看出，佳木斯市手足口病的防控工作還是應(yīng)該以預(yù)防為主，因?yàn)槭肿憧诓鞑ネ緩蕉?，嬰幼兒和兒童普遍易感，所以做好兒童個(gè)人、家庭和托幼機(jī)構(gòu)的衛(wèi)生是預(yù)防本病感染的關(guān)鍵。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.手足口病實(shí)驗(yàn)室檢測方案 (試行).手足口病預(yù)防控制指南（2008年）[S].

[2]于長水，肖明華，張之倫，等.天津市由COX.A16腸道病毒引起的手足口病[J].中華流行病學(xué)雜志，1985,6（2）:66-69.

[3]何雅青，楊帆，李良成，等.我國深圳地區(qū)手足口病患者腸道病毒71型的分離與鑒定[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，1999，13（1）:83-84.

[4]趙繼民，路子春.2008-2013年佳木斯地區(qū)手足口病發(fā)病調(diào)查[J].黑龍江科學(xué)，2015（6）:136-137.