孫慧娟

摘要[目的]篩選松乳菇菌絲培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基配方。[方法]以松乳菇菌種（編號NZ1）為供試菌株，設(shè)計(jì)2組不同的培養(yǎng)基配方進(jìn)行菌絲培養(yǎng)的比較試驗(yàn)。[結(jié)果]松乳菇菌絲培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方為新西蘭進(jìn)口PDA培養(yǎng)基。[結(jié)論]該研究可為更好地進(jìn)行松乳菇人工培養(yǎng)提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞松乳菇；培養(yǎng)基；菌絲

中圖分類號S646文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2017）14-0020-02

Abstract[Objective]To screen the optimum culture medium for mycelia of Lactarius deliciosa. [Method]Taking L.deliciosa strains（number NZ1）as the tested strains，a comparative experiment was conducted to design mycelia culture with two different culture medium recipes. [Result]The best medium for cultivating mycelia of L. deliciosus was PDA medium which import from New Zealand. [Conclusion]The study provides a scientific basis for better cultivating L.deliciosus.

Key wordsLactarius deliciosus；Medium；Mycelia

松乳菇，拉丁學(xué)名為Lactarius deliciosus（L. ex Fr.）Gray，系紅菇科乳菇屬外生菌根真菌，它是Fries在1921年命名的，俗名有很多，如美味松乳菇、松菌、寒菌等[1-3]。松乳菇是與植物根系共生的菌根食用菌，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)價(jià)值。過度采摘導(dǎo)致野生資源產(chǎn)量不斷下降[4]，然而目前還難以實(shí)現(xiàn)人工栽培[5]。松乳菇菌絲生長緩慢且組織分離過程中極易被污染，篩選合適的培養(yǎng)基配方對組織分離培養(yǎng)菌絲具有重要意義。

目前松乳菇菌種分離采用較多的方法是孢子分離法和組織分離法[6]，前人對松乳菇菌絲培養(yǎng)的最佳條件篩選做了大量的試驗(yàn)[7-11]。筆者研究不同培養(yǎng)基配方及化學(xué)試劑來源不同的PDA培養(yǎng)基對松乳菇菌絲生長的影響，以期篩選出更優(yōu)配方組合，為今后松乳菇的馴化栽培提供借鑒。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料試驗(yàn)用菌株是西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院蔬菜研究所食用菌課題組采集的野生松乳菇菌種（編號NZ1）。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1母種制備。將采集的野生松乳菇帶回實(shí)驗(yàn)室，挑選菌蓋直徑為2～3 cm的無蛆蟲、菇柄實(shí)心的松乳菇，去除附著于松乳菇的泥土，用75%乙醇棉球輕輕擦洗菇體2次。在無菌操作臺取菌柄與菌蓋交界處的組織，接種到供試斜面培養(yǎng)基中，置于23 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。對組織分離得到的菌絲轉(zhuǎn)管純化，再轉(zhuǎn)接到裝有PDA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，觀察菌絲生長特征，再對菌絲進(jìn)行顯微觀察。

1.2.2不同培養(yǎng)基配方及化學(xué)試劑來源不同的PDA培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)。試驗(yàn)共設(shè)計(jì)8種培養(yǎng)基（表1、2），在無菌條件下，用直徑3 mm打孔器在菌種上打孔，在平板培養(yǎng)基上接2個(gè)直徑為3 mm菌種，封口并做標(biāo)記，設(shè)置3個(gè)重復(fù)，置于23 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔7 d觀察并測量菌絲生長指標(biāo)，篩選適宜的培養(yǎng)基。

1.2.3數(shù)據(jù)分析。用Excel對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行基本計(jì)算和制圖，SPSS軟件進(jìn)行方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1不同培養(yǎng)基配方篩選結(jié)果由于松乳菇菌絲萌發(fā)較慢，所以在接種后第11天測量數(shù)據(jù)，之后每隔7 d測量1次，不同培養(yǎng)基配方對菌絲生長的影響見表3。

由表3可以看出，MMN培養(yǎng)基和自制馬鈴薯培養(yǎng)基中菌絲長勢均較好。在不同培養(yǎng)基配方條件下菌絲生長速度的快慢依次為自制馬鈴薯培養(yǎng)基、MMN培養(yǎng)基、松乳菇浸出液培養(yǎng)基、馬鈴薯綜合培養(yǎng)基、松針浸出液培養(yǎng)基。且PDA培養(yǎng)基中菌絲生長速度極顯著高于MMN培養(yǎng)基，試驗(yàn)結(jié)果表明PDA培養(yǎng)基為培養(yǎng)松乳菇菌絲的最佳培養(yǎng)基。

2.2化學(xué)試劑來源不同的PDA培養(yǎng)基篩選結(jié)果雖然利用實(shí)驗(yàn)室自制馬鈴薯浸出液的方法所做出的PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)松乳菇菌絲取得了較好的效果，但是培養(yǎng)基顏色較深不利于觀察松乳菇菌絲。由于松乳菇菌絲生長緩慢且為白色，需要培養(yǎng)基具有較高的純度和投射度，所以又做了進(jìn)一步試驗(yàn)，通過比較化學(xué)試劑來源不同的PDA培養(yǎng)基對菌絲生長的影響來選擇一個(gè)更加適宜培養(yǎng)松乳菇菌絲的培養(yǎng)基配方。 化學(xué)試劑來源不同的PDA培養(yǎng)基對菌絲生長的影響見表4。

由表4可以看出，在化學(xué)試劑來源不同的PDA培養(yǎng)基中菌絲生長速度快慢依次為新西蘭進(jìn)口培養(yǎng)基、自制馬鈴薯培養(yǎng)基、美國進(jìn)口培養(yǎng)基、國產(chǎn)培養(yǎng)基，其中新西蘭進(jìn)口培養(yǎng)基中菌絲生長速度極顯著高于自制馬鈴薯培養(yǎng)基。松乳菇菌絲培養(yǎng)的最佳PDA培養(yǎng)基為新西蘭進(jìn)口培養(yǎng)基。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在新西蘭進(jìn)口PDA培養(yǎng)基中松乳菇菌絲表現(xiàn)出較好的長勢，而松針浸出液培養(yǎng)基配方效果并不好，表現(xiàn)為菌絲長勢很弱，這與前人的研究[12]有所不同。不同培養(yǎng)基配方對松乳菇菌絲生長的影響很大，從試驗(yàn)看無論是哪種配方的培養(yǎng)基，松乳菇菌絲生長速度都比一般腐生性菌類慢很多，這可能與其共生的特殊營養(yǎng)需求有關(guān)，這一觀點(diǎn)與林親雄等[13]的結(jié)論一致。前人實(shí)踐及該研究表明，組織分離獲得松乳菇菌種時(shí)，一定要選取新鮮且無病蟲害的子實(shí)體作為分離材料，保證無菌操作能有效提高組織分離培養(yǎng)菌絲的成功率[12]。

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