胡明勛 陳 玲 蔣運(yùn)斌 吳 兵 楊 潔 蘭 楊 馬逾英成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院/中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

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雞矢藤的薄層色譜鑒別方法研究及應(yīng)用

胡明勛 陳 玲 蔣運(yùn)斌 吳 兵*楊 潔 蘭 楊 馬逾英*
成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院/中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

目的：建立雞矢藤薄層色譜鑒別方法。 方法：采用硅膠G薄層板，以氯仿-甲醇-冰醋酸-水(10∶4∶1∶1)為展開劑，雞矢藤苷為對(duì)照品，采用薄層色譜法對(duì)不同品種和不同產(chǎn)地雞矢藤藥材進(jìn)行定性鑒別。 結(jié)果：雞矢藤薄層色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。 結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可為雞矢藤藥材的質(zhì)量控制提供參考。

雞矢藤；薄層色譜；雞矢藤苷

雞矢藤為常用民族民間藥物，彝族、苗族、土家族等24個(gè)[1]少數(shù)民族都有使用。雞矢藤為茜草科植物雞矢藤Paederiascandens(Lour.) Merr.或毛雞矢藤P.scandens(Lour.) Merr. var.tomentosa(BI.) Hand.-Mazz.的干燥地上部分[2]，其原植物生長(zhǎng)于海拔200～2000m的山坡、林緣、林中、溝谷邊灌叢中或纏繞在灌木上，分布于我國(guó)的西南、中南至東部[3]；其功效為祛風(fēng)活血、止痛解毒、消食導(dǎo)滯、除濕消腫[2, 4-5]?！吨袊?guó)藥典》1977年版及四川、上海、湖南、福建等地方中藥材標(biāo)準(zhǔn)中均有收載，但記載的雞矢藤質(zhì)量控制方法較為簡(jiǎn)單；2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中含有檢查項(xiàng)和浸出物項(xiàng)，無鑒別項(xiàng)[2]。現(xiàn)代研究表明[6]，雞矢藤主要含有烯醚萜苷類、黃酮類、甾醇類、三萜類、揮發(fā)油類和烷烴、脂肪醇、脂肪酸類化合物等。據(jù)報(bào)道，環(huán)烯醚萜苷類成分為雞矢藤的主要活性成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、影響胃腸道活動(dòng)的作用[7]。筆者以雞矢藤環(huán)烯醚萜苷類成分中的雞矢藤苷為指標(biāo)性成分，建立雞矢藤藥材的薄層色譜鑒別方法，以期為雞矢藤藥材的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

SB-3200DTD超聲波清洗器(寧波新藝超聲有限公司)、101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)、正德牌遠(yuǎn)紅外控調(diào)溫電爐(成都市桑 電器廠)、SQP萬分之一分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)、DEY-500g搖擺式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)、ZF-90型暗箱式紫外透射儀(上海顧村電光儀器廠)、HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海-恒科學(xué)儀器有限公司)。甲醇、無水乙醇、冰乙酸、氯仿、丙酮、乙酸乙酯(成都科龍化工試劑廠)；硫酸、鹽酸(四川西隴化工有限公司)，以上試劑均為分析純，薄層硅膠G(青島海洋化工有限公司)、薄層硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)，水為蒸餾水。雞矢藤苷對(duì)照品(成都曼思特生物科技有限公司，純度HPLC≧98.0%，批號(hào)：MUST-15101422 )；23批雞矢藤藥材樣品，采于四川各地，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)馬逾英教授鑒定，為茜草科雞矢藤屬植物雞矢藤P.scandens(Lour.) Merr.、毛雞矢藤P.scandens(Lour.) Merr.var.tomentosa(BI.)Hand.-Mazz.，詳見表1。

表1 樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 取雞矢藤苷對(duì)照品適量，加甲醇制成1mg/mL的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取樣品粉末1g，加75%乙醇10mL，超聲提取30min，放冷，濾過，濾液揮干，殘?jiān)?5%乙醇2mL使溶解，即得。

2.3 展開系統(tǒng)的優(yōu)選 根據(jù)雞矢藤的化學(xué)成分研究，且為了獲得最佳的展開效果，試驗(yàn)了多種展開系統(tǒng)：A氯仿-甲醇-冰醋酸-水(10∶4∶1∶1)，B氯仿-甲醇-水(7∶3∶0.5)，C乙酸乙酯-甲醇-水(10∶1∶0.5)。按照2015版《中國(guó)藥典》四部通則0502薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各4μL，點(diǎn)于3塊硅膠G薄層板上(薄層板點(diǎn)樣前105℃，活化30min)，分別以A、B、C展開系統(tǒng)為展開劑，預(yù)飽和15min，展開15cm，取出晾干。噴以10%硫酸-乙醇溶液，105℃烘烤至斑點(diǎn)清晰，置于日光下檢視。結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果，最終確定展開系統(tǒng)為A氯仿-甲醇-冰醋酸-水(10∶4∶1∶1)，在此條件下色譜圖斑點(diǎn)清晰、分離度較好、Rf重復(fù)性好。詳見圖1。

2.4 薄層色譜鑒別 按照2015版《中國(guó)藥典》四部通則0502薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各4μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上(薄層板點(diǎn)樣前105℃，活化30min)，以氯仿-甲醇-冰醋酸-水(10∶4∶1∶1)為展開劑，預(yù)飽和15min，展開15cm，取出晾干。噴以10%硫酸-乙醇溶液，105℃烘烤至斑點(diǎn)清晰，置于日光下檢視。

2.4.1 不同品種雞矢藤藥材的薄層色譜鑒別 選擇不同品種的雞矢藤藥材樣品進(jìn)行薄層色譜鑒別。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯同樣顏色的斑點(diǎn)，毛雞矢藤和雞矢藤樣品的薄層斑點(diǎn)的顏色、數(shù)量有所差別；雞矢藤較毛雞矢藤在Rf=0.63、0.59、0.53、0.48的薄層斑點(diǎn)顏色較深；斑點(diǎn)數(shù)目方面，雞矢藤較毛雞矢藤在Rf=0.69處斑點(diǎn)清晰，而毛雞矢藤在Rf=0.69處基本無斑點(diǎn)，見圖2。

2.4.2 不同產(chǎn)地雞矢藤P.scandens的薄層色譜鑒別 選擇不同產(chǎn)地雞矢藤P.scandens樣品進(jìn)行薄層色譜鑒別。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯同樣顏色的斑點(diǎn)，其中Rf=0.69的薄層斑點(diǎn)中，顏色差別較大，17、18和23樣品斑點(diǎn)較淺，基本無；Rf=0.63的薄層斑點(diǎn)中，17和18樣品的斑點(diǎn)顏色較淺；Rf=0.59的薄層斑點(diǎn)中，18樣品基本沒有斑點(diǎn)，其他產(chǎn)地均有，顏色偏淺；Rf=0.53的薄層斑點(diǎn)中，17和18樣品的斑點(diǎn)顏色較淺；Rf=0.48的斑點(diǎn)薄層中，18樣品基本沒有斑點(diǎn)，17和23樣品的斑點(diǎn)顏色較淺。不同產(chǎn)地的雞矢藤P.scandens樣品的斑點(diǎn)的顏色深淺有差異。見圖3。

2.4.3 不同產(chǎn)地毛雞矢藤P.scandensvar.tomentosa的薄層色譜鑒別 選擇不同產(chǎn)地毛雞矢藤P.scandensvar.tomentosa樣品進(jìn)行薄層色譜鑒別。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上，顯同樣顏色的斑點(diǎn)，其中Rf=0.63的薄層斑點(diǎn)，顏色深淺不一樣，2、8和9樣品的薄層斑點(diǎn)顏色較淡；Rf=0.59的薄層斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顏色大致一樣；Rf=0.53的薄層斑點(diǎn)中，2、8和9樣品的薄層斑點(diǎn)顏色較淺；Rf=0.48的薄層斑點(diǎn)，斑點(diǎn)顏色大致一樣，普遍較淺。不同產(chǎn)地的毛雞矢藤P.scandensvar.tomentosa樣品的斑點(diǎn)顏色深淺有所差異，但薄層色譜信息基本一致。見圖4。

3 討論

3.1 提取方法的考察 對(duì)冷浸法、超聲提取法、加熱回流法3種提取方法進(jìn)行考察，以上提取方法得到的薄層色譜信息相同，故選擇簡(jiǎn)單、方便及快速的超聲提取法。

3.2 提取溶劑的考察 對(duì)水、40%乙醇、75%乙醇、無水乙醇、甲醇、丙酮6種溶劑進(jìn)行考察，75%乙醇、甲醇提取溶劑得到的薄層色譜斑點(diǎn)較多且清晰，考慮到經(jīng)濟(jì)性和毒性，確定75%乙醇為提取溶劑。同時(shí)，考察對(duì)點(diǎn)樣濃度、展開時(shí)間、溫度、濕度、展距進(jìn)行了考察，保證了色譜圖斑點(diǎn)多且清晰。

3.3 顯色劑的選擇 對(duì)比了10%硫酸-乙醇溶液和5%香草醛-硫酸溶液的顯色效果，10%硫酸-乙醇溶液顯色后得到的色譜斑點(diǎn)多且清晰。

對(duì)不同品種和產(chǎn)地雞矢藤藥材進(jìn)行薄層色譜鑒別，結(jié)果表明所建立的方法對(duì)雞矢藤藥材鑒別有較好的適應(yīng)性和重現(xiàn)性。本研究顯示，雞矢藤在Rf=0.69處較毛雞矢藤多1個(gè)斑點(diǎn)，且其他斑點(diǎn)顏色也較深，提示雞矢藤比毛雞矢藤可能含有更豐富的化學(xué)成分。不同產(chǎn)地毛雞矢藤各產(chǎn)地的薄層信息基本一致；雞矢藤各產(chǎn)地中17和18號(hào)樣品較其他產(chǎn)地薄層信息差異較大，體現(xiàn)在斑點(diǎn)數(shù)目較少和斑點(diǎn)顏色較淺，提示不同產(chǎn)地可能對(duì)雞矢藤化學(xué)成分的影響較大，但具體是哪些化學(xué)成分引起薄層色譜的差異，還需進(jìn)一步研究。

[1]賈敏如，李星煒．中國(guó)民族藥志要[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2005：437-438

[2]四川省食品藥品監(jiān)督管理局．四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M]．成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2010：335-338．

[3]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M]．北京：科學(xué)出版社，1999：110-118．

[4]上海市衛(wèi)生局．上海市中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M]．上海：上海市衛(wèi)生局，1994：158．

[5]福建省食品藥品監(jiān)督管理局．福建省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M]．福州：海風(fēng)出版社，2006：133．

[6]徐金龍，劉雷，張巧艷，等．雞屎藤的化學(xué)成分、藥理活性及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]．藥學(xué)實(shí)踐雜志，2011，29(6)：401-404．

[7]王新杰，繆劉萍，周海鳳，等．雞矢藤的研究進(jìn)展[J]．世界臨床藥物，2012，33(5)：303-310．

TLC Identification and Application of National Folk Paederiae Herba

HU Mingxun CHEN Lin JIANG Yunbin WU Bing*YANG Jie LAN Yang MA Yuying*

School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine/State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, China

Objective To establish TLC identification method of Paederiae Herba. Methods Paederiae Herba from different species and growth environment were identified by TLC on Silica-G-CMC-Na plate with developing solventchloroform-methanol-glacial acetic acid-water (10∶4∶1∶1).Paederoside was selected as reference substance. Results Based on the position and color of reference substance paederoside, there were corresponding spots in TLC of Paederiae Herba. Conclusion The developed method is accurate and simple, and can be used for quality control of Paederiae Herba.

Paederiae Herba; TLC; Paederoside

胡明勛(1992-)，男，漢族，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幤贩N、質(zhì)量及資源開發(fā)研究。E-mail：1575130555@qq.com

吳兵(1966-)，男，漢族，實(shí)驗(yàn)師，研究方向?yàn)橹兴幤贩N、質(zhì)量及資源開發(fā)研究。E-mail：466945108@qq.com

馬逾英(1985-)，女，漢族，學(xué)士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幤贩N、質(zhì)量及資源開發(fā)研究。E-mail：ma-yuying@126.com

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1007-8517(2017)12-0024-04

2017-04-12 編輯：穆麗華)