郝文杰　黎剛剛　周亞瓊　楊俊蘭　姚健　張繼

摘要 [目的]優(yōu)化野山杏仁油提取工藝并對其成分進(jìn)行分析。[方法]利用有機(jī)溶劑乙醇作為破乳劑輔助水酶法提取野山杏仁油，在單因素試驗的基礎(chǔ)上選擇總酶添加量、乙醇濃度、料液比、酶解時間為主要因素，野山杏仁油的提油率為響應(yīng)值，通過響應(yīng)面法優(yōu)化提取條件。[結(jié)果]野山杏仁油最佳提取條件：總酶的添加量為2.00%，乙醇濃度為20.00%，時間為130 min，料液比（g/mL）為1 ∶7，野山杏仁油的提取率為49.86%；并分析了提取的油脂成分，不飽和脂肪酸高達(dá)90%以上，其中油酸、亞油酸含量分別為65.68%、24.78%。[結(jié)論]乙醇在提取過程中起到了很好的破乳作用，提高了油脂提取率，并且乙醇可回收，解決了水污染問題，可為油脂提取提供參考。

關(guān)鍵詞 野山杏；乙醇；水酶法；破乳劑；破乳作用

中圖分類號 S789.5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）01-0108-04

Optimization of Enzymatic Extraction of Almond Oil by BoxBehnken Method and Analysis of Fatty Acids

HAO Wenjie， LI Ganggang， ZHOU Yaqiong， ZHANG Ji* et al

（College of Life Science， Northwest Normal University， Lanzhou， Gansu 730070）

Abstract [Objective] To optimize extraction condition of wild almond oil and analyze its components. [Method] By using aqueous ethanol as demulsifier， on the basis of the single factor experiment， the total amount of enzyme， the concentration of ethanol， the ratio of material to liquid and the time of enzymolysis were selected as the factors. The extraction rate of wild almond oil was the response value， and the extraction condition was optimized by response surface method. [Result] The best extraction condition of the wild almond oil was as follows： total enzyme was 2.00%， ethanol concentration was 20.00%， time was 130 min， the ratio of material to liquid（g/mL） was 1 ∶7， the extraction rate of the wild almond oil was 49.86%；The contents of oleic acid and linoleic acid were 65.68% and 24.78%， respectively， and the content of unsaturated fatty acid was more than 90%. [Conclusion] Ethanol played a good demulsification in the extraction process and improved the extraction rate of oil. And ethanol could be recovered to solve the problem of water pollution， which can provide reference for oil extraction.

Key words Wild apricot；Ethanol；Water enzymatic method；Demulsifier；Demulsification effect

苦杏仁是薔薇科杏屬植物山杏成熟果實帶苦味的種子或種仁，在我國主要產(chǎn)于遼寧、內(nèi)蒙古、北京、河北、山西、陜西、新疆等北方干旱和半干旱地區(qū)，資源十分豐富[1-2]。在植物油的提取過程時，形成乳狀液造成乳化現(xiàn)象的原因是由于油料中蛋白質(zhì)存在，使提油率降低。水酶法是一種新興的油脂提取工藝，具有無溶劑殘留、油的提取率高、能耗低等優(yōu)點[3-4]。一般提取溫度在70 ℃以下，可以得到高品質(zhì)的油脂和蛋白，但是會形成不同程度的乳狀液。為了提高油脂提取率，目前已有的破乳方法有離心破乳、加熱破乳、冷凍解凍破乳、微波輔助破乳、超聲輔助破乳等[5-8]。但是大部分的破乳工藝都增加了更加繁瑣的工藝步驟，不利于普遍應(yīng)用。殷振雄等[9]采用無機(jī)鹽破乳，取得了很好的破乳效果，但無機(jī)鹽無法回收從而造成水資源的浪費(fèi)。李強(qiáng)等[10]用乙醇作為破乳劑首次在油茶籽油水相提取中應(yīng)用，目前在提油方面尚鮮有其他報道。筆者將破乳劑乙醇和復(fù)合酶聯(lián)用，以此得到一種新型綠色無污染的提油工藝，并對所提取油的成分進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 材料

原料：野山杏，產(chǎn)自遼寧省葫蘆島市。

主要試劑：石油醚（沸程60～90 ℃），天津市富宇精細(xì)化工有限公司；異辛烷（色譜純），天津市化學(xué)試劑廠；甲醇（分析純）、乙醇（分析純），天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司；纖維素酶，濟(jì)寧和美生物工程有限公司；木瓜蛋白酶，北京索萊寶科技有限公司。

主要儀器設(shè)備：

蘭工牌香油磨漿機(jī)，河南省蘭考縣孟寨鑄造廠；TDL5M臺式大容量冷凍離心機(jī)，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；HH-S8型電熱恒溫水浴鍋，金壇市杰瑞爾電器有限公司；D2010W攪拌器，上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司；氣質(zhì)聯(lián)用儀，美國Thermo公司。

1.2 方法

1.2.1 野山杏仁中粗脂肪含量的測定。

粗脂肪含量根據(jù)GB/T14772—2008中方法進(jìn)行測定。

1.2.2 乙醇水酶法提取工藝。

去皮野山杏仁→粉碎→乙醇溶液浸泡→升溫滅酶→冷卻→加入復(fù)合酶→酶提→升溫滅酶→冷卻→高速離心→游離油、乳狀液、水提液、渣。

粉碎：將去皮野山杏仁用高速粉碎機(jī)粉碎，粉碎時間為40 s。

乙醇溶液浸泡：將粉碎后的野山杏仁漿料以一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液溶解浸泡。

升溫滅酶：為了防止杏仁中的內(nèi)源脂肪酶在酶解過程中發(fā)生反應(yīng)，需要進(jìn)行滅酶（升溫到85 ℃，保持10 min），使得物料中的內(nèi)源脂肪酶失活。

高速離心：將野山杏仁漿料醇溶液以一定轉(zhuǎn)速離心30 min。

取油：離心后用膠頭滴管吸出上層游離油，加入無水硫酸鈉去水，稱重。計算野山杏仁油的提取率（%）。

提取率（%）= 提取野山杏仁油的質(zhì)量 野山杏仁漿料的質(zhì)量×漿料含油量 ×100%

1.2.3 單因素試驗。

分別對果膠酶、木瓜蛋白酶、纖維素酶、淀粉酶進(jìn)行試驗，選取效果較理想的酶，對選取的酶進(jìn)行復(fù)合酶的配比，然后分別對總酶添加量、酶解pH、溫度、乙醇濃度、料液比、提取時間進(jìn)行單因素試驗。

1.2.4 提取條件的優(yōu)化設(shè)計。

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，依據(jù)響應(yīng)面設(shè)計原理，對影響野山杏仁油提取率的因素進(jìn)行選擇，即總酶添加量、乙醇濃度、料液比（g ∶mL）、酶解時間，進(jìn)行4因素3水平的響應(yīng)面試驗，利用響應(yīng)值確定最佳提取條件。試驗因素與水平設(shè)計見表1。

1.3 野山杏仁油的脂肪酸分析

采用GB/T17376—2008中的酯交換法分析野山杏仁油的脂肪酸，其GCMS條件：RTX-5MS型彈性石英毛細(xì)管（30 m×0.25 mm×0.25 μm），載氣He，流速1.0 mL/min：分流比為50 ∶1，傳輸線溫度為250 ℃，進(jìn)樣口溫度為250 ℃。程序升溫：初始溫度150 ℃保持3 min；以5 ℃/min從150 ℃升高到220 ℃，保持1 min；以1 ℃/min從220 ℃升高到230 ℃，保持1 min；以5 ℃/min從230 ℃升高至250 ℃，電子能量70 eV，掃描范圍50～650 amu。

2 結(jié)果與分析

2.1 野山杏仁的粗脂肪含量

經(jīng)試驗測得，供試野山杏仁的含油量為50.67%。

2.2 單因素試驗

2.2.1 不同酶種類對野山杏仁油提取率的影響。從圖1可以看出，對野山杏仁油提取率效果較好的酶是木瓜蛋白酶和纖維素酶，是因為油滴被包裹在蛋白質(zhì)及其纖維結(jié)構(gòu)中，蛋白酶和纖維素酶可以分解蛋白和纖維，使油滴釋放，從而提高了出油率。

2.2.2 不同酶配比對野山杏仁油提取率的影響。

從圖2可以看出，隨著木瓜蛋白酶比例的增加，野山杏仁油提取率增加，當(dāng)比例達(dá)到3 ∶1時，提取率增加不明顯，考慮到成本問題，選擇酶配比（木瓜蛋白酶 ∶纖維素酶）3 ∶1較為合適。

2.2.3 總酶添加量對野山杏仁油提取率的影響。

從圖3可知，總酶添加量達(dá)到2.0%后，野山杏仁油提取率趨于平緩，再增加總酶添加量，提取率增加不明顯，故總酶添加量選擇2.0%。

2.2.4 不同pH對野山杏仁油提取率的影響。從圖4可知，當(dāng)體系pH在7.0時對野山杏仁油的提取效果最好，是由于在此pH下，木瓜蛋白酶和纖維素酶的活性極好，當(dāng)pH升高或降低，提取率均下降，是由于其酶的活性下降，故選擇pH為7.0。

2.2.5 不同提取溫度對野山杏仁油提取率的影響。

從圖5可知，當(dāng)提取溫度在40 ℃之前，野山杏仁油提取率隨提取溫度的升高而增加，在40 ℃之后提取率隨提取溫度的升高而開始緩慢下降。因為酶在最適溫度下活性能達(dá)到較好的狀態(tài)，當(dāng)溫度升高會使酶活性下降，提取率下降。

2.2.6 不同乙醇濃度對野山杏仁油提取率的影響。

從圖6可知，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到20%時，對野山杏仁油的提取效果最好，隨后出現(xiàn)下降趨勢?？赡苁怯捎谝掖际潜砻婊钚詣?，可以降低表面張力，使乳化效果減弱，當(dāng)濃度持續(xù)增大后，游離的蛋白又與油滴結(jié)合成乳狀液，使得提取率下降。

2.2.7 不同料液比對野山杏仁油提取率的影響。

從圖7可知，隨著料液比中溶劑用量的增加，野山杏仁油提取率隨之增加，當(dāng)料液比達(dá)到1 ∶7之后，提取率下降。因此，料液比選擇1 ∶7效果較好。

2.2.8 不同酶解時間對野山杏仁油提取率的影響。

從圖8可知，隨著提取時間的增加，野山杏仁油提取率增加，當(dāng)提取時間過長后，其提取的油脂又與其蛋白結(jié)合成乳狀液，故選擇120 min為最佳提取時間。

2.3 醇酶法提取野山杏仁油的條件優(yōu)化

在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選取酶的添加量（X1）、乙醇濃度（X2）、料液比（X3）、酶解時間（X4）為主要因素，以野山杏仁油提取率為響應(yīng)值，進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化分析。試驗方案及結(jié)果見表2。

從此看出，回歸方程模型F值為13.75，P<0.000 1， 說明回歸方程模型極顯著；方程失擬項P值（0.107 8） 遠(yuǎn)大于0.05，表現(xiàn)為不顯著，說明該方程與試驗數(shù)據(jù)擬合度良好。其中X1、X21、X22、X23、X24對野山杏仁油的提取率極顯著；在4個單因素試驗中，顯著性大小為X1>X4>X2>X3，即對野山杏仁油提取率的影響程度大小依次為總酶添加量、酶解時間、乙醇濃度、料液比。

二維空間的等高線圖是橢圓形，說明這2個因素對提取率的相互作用明顯，如果是圓形，則說明這2個因素對提取率的相互作用不明顯[11]。從圖9可以看出，乙醇濃度和時間對野山杏仁油的提取率有顯著的交互作用。

2.4 驗證試驗

通過分析建立以提取率為目標(biāo)值，以酶的添加量、乙醇濃度、酶解時間、料液比為因素的模型。通過對回歸方程的優(yōu)化計算得到了最佳的提取條件：酶的添加量為2.17%，乙醇濃度19.96%，時間129.85 min，料液比為1 ∶7，提取率可以達(dá)到52.29%?？紤]實際試驗的操作性，將條件優(yōu)化為酶的添加量2.00%，乙醇濃度20.00%，酶解時間130 min，料液比為1 ∶7進(jìn)行試驗，結(jié)果表明，此優(yōu)化條件下野山杏仁油的提取率為49.86%，與預(yù)測值接近，模型精準(zhǔn)度為95.35%。

2.5 野山杏仁油的脂肪酸組成及其含量

從圖10和表3中可以看出，乙醇破乳輔助復(fù)合酶提取的野山杏仁油的不飽和脂肪酸含量高達(dá)90%以上，其中油酸65.68%，亞油酸2478%，其成分與索氏提取法得到的相近，具有良好的應(yīng)用價值。

3 結(jié)論與討論

該試驗通過響應(yīng)面對醇酶法提取野山杏仁油的工藝進(jìn)行了優(yōu)化，確定了最優(yōu)提取條件下的提取率可達(dá)49.86%；同時分析了提取的油脂成分，不飽和脂肪酸高達(dá)90%以上，營養(yǎng)成分未被破壞，具有較好的營養(yǎng)價值。

乙醇在提取過程中起到了很好的破乳作用，提高了油脂提取率；并且乙醇可以回收，解決了水污染問題。說明低濃

度的乙醇提取油脂性植物油質(zhì)中起到很好的破乳效果，為今后油脂的安全高效提取提供了參考依據(jù)。

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