郜李彬 曹征宇 顧韻莉 周亞輝 （上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 201201）

鐵皮石斛增殖培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)初報(bào)

郜李彬 曹征宇 顧韻莉 周亞輝 （上海市浦東新區(qū)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 201201）

為提高鐵皮石斛的增殖系數(shù)，達(dá)到快速繁殖鐵皮石斛的目的，進(jìn)行了鐵皮石斛增殖培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)。結(jié)果表明，適當(dāng)濃度的BA配合一定量的NAA和馬鈴薯汁能夠使鐵皮石斛組培苗的增殖系數(shù)達(dá)到6.4；經(jīng)試驗(yàn)篩選和觀察，最佳增殖培養(yǎng)基配方為MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L。

鐵皮石斛；增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)基；配方篩選

鐵皮石斛為蘭科多年生附生草本植物，屬國(guó)家二級(jí)保護(hù)的貴重瀕危藥材，具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，歷代醫(yī)學(xué)經(jīng)典均奉其為“藥中之上品”。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，鐵皮石斛能顯著提高人體免疫力，可抗衰老、抗疲勞、耐缺氧，且具有輔助抑制腫瘤等功效。由于受到特殊的生物學(xué)及生態(tài)學(xué)特性的限制，鐵皮石斛對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境條件的要求非?？量?，野生鐵皮石斛的自然繁殖能力極低、生長(zhǎng)緩慢，目前已禁止采摘。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)[1]，可快速有效地對(duì)鐵皮石斛進(jìn)行繁殖[2]。為提高鐵皮石斛的增殖系數(shù)，筆者以鐵皮石斛組培苗為試驗(yàn)材料[3]，采用不同種類和不同梯度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素和添加不同種類的植物營(yíng)養(yǎng)液，進(jìn)行了鐵皮石斛增殖培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn)，以期達(dá)到快速繁殖鐵皮石斛的目的[3-5]?，F(xiàn)將相關(guān)試驗(yàn)結(jié)果匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

鐵皮石斛組培苗。

1.2 試驗(yàn)方法

在無菌操作臺(tái)上，先切除鐵皮石斛組培苗基部殘葉、褐化老化部分，后按照2葉1心的標(biāo)準(zhǔn)切割分離成單株，接種入30種增殖培養(yǎng)基中，接種深度為0.5cm，每個(gè)培養(yǎng)基重復(fù)10次，放入無菌培養(yǎng)室培養(yǎng)40d。培養(yǎng)條件：光照時(shí)間為12h，光照強(qiáng)度為2000 Lx，培養(yǎng)溫度為（20±2）℃。

增殖培養(yǎng)基配方分別為：（1）MS（CK），（2）MS+馬鈴薯汁100mg/L，（3）MS+香蕉汁100mg/L，（4）MS+BA 0.5mg/L，（5）MS+BA 0.5mg/L+馬鈴薯汁100mg/ L，（6）MS+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（7）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L，（8）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（9）MS+NAA 0.5mg/L+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（10）MS+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L，（11）MS+ NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（12）MS+NAA 1.0mg/L+BA 0.5mg/L+香蕉汁100mg/L，（13）MS+BA 1.0mg/L，（14）MS+BA 1.0mg/ L+馬鈴薯汁100mg/L，（15）MS+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（16）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L，（17）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（18）MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（19）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/ L，（20）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（21）MS+NAA 1.0mg/L+BA 1.0mg/L+香蕉汁100mg/L，（22）MS+BA 3.0mg/L，（23）MS+BA 3.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（24）MS+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L，（25）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/L，（26）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（27）MS+NAA 0.5mg/L+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L，（28）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/L，（29）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L，（30）MS+NAA 1.0mg/L+BA 3.0mg/ L+香蕉汁100mg/L。30種培養(yǎng)基中均加入3%蔗糖和0.7%瓊脂，pH5.6～5.8。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)過40d的增殖培養(yǎng)后，每個(gè)培養(yǎng)基中隨機(jī)選取5瓶進(jìn)行增殖系數(shù)的統(tǒng)計(jì)。結(jié)果表明（見表1、2），除CK、配方（2）和配方（3）外，其余27種增殖培養(yǎng)基中的鐵皮石斛單株苗均有不同程度的增殖生長(zhǎng)。其中，配方（17）中的鐵皮石斛組培苗增殖系數(shù)最高，達(dá)6.4，增殖效果最好，在5%和1%差異顯著性水平下均顯著高于其他配方；配方（8）的增殖效果也較為理想，增殖系數(shù)達(dá)3.8；配方（20）、（26）、（16）之間的增殖效果差異不大，在3.2～3.4之間；其余培養(yǎng)基配方的增殖效果不太理想，增殖系數(shù)都在2.8以下。

3 結(jié)論與討論

3.1 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素對(duì)鐵皮石斛組培苗增殖生長(zhǎng)的影響

本試驗(yàn)采用了BA和NAA 2種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素，各設(shè)定了3個(gè)梯度，試驗(yàn)結(jié)果表明，BA和NAA對(duì)鐵皮石斛組培苗的增殖生長(zhǎng)非常重要，CK、配方（2）和配方（3）中由于不含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素，這3種培養(yǎng)基配方中的鐵皮石斛組培苗均未出現(xiàn)增殖生長(zhǎng)。

試驗(yàn)結(jié)果表明，BA對(duì)鐵皮石斛組培苗的增殖生長(zhǎng)最為重要，在BA濃度為1.0mg/L時(shí)，增殖效果最好，較低的BA濃度（0.5mg/L）促進(jìn)分叉叢生的效果不佳，過高的BA濃度（3.0mg/L）反而抑制了組培苗的增殖生長(zhǎng)。同時(shí)，適量的NAA配合BA能夠更好地促進(jìn)鐵皮石斛組培苗的增殖生長(zhǎng)，在NAA濃度為0.5mg/L時(shí)，增殖效果最好。此外，過高濃度的NAA配合BA會(huì)導(dǎo)致植株生長(zhǎng)膨脹，苗形不佳，不適合下一步生長(zhǎng)。

表1 不同培養(yǎng)基配方中鐵皮石斛增殖系數(shù)統(tǒng)計(jì)

表2 不同培養(yǎng)基配方中鐵皮石斛增殖系數(shù)新復(fù)極差比較

3.2 植物營(yíng)養(yǎng)液對(duì)鐵皮石斛組培苗增殖生長(zhǎng)的影響

本試驗(yàn)采用馬鈴薯汁和香蕉汁作為植物營(yíng)養(yǎng)液，濃度均為100mg/L。試驗(yàn)結(jié)果表明，馬鈴薯汁的增殖效果明顯好于香蕉汁，在其他條件相同的情況下，培養(yǎng)基中添加馬鈴薯汁的鐵皮石斛組培苗增殖系數(shù)顯著高于添加香蕉汁的培養(yǎng)基。

3.3 鐵皮石斛外植體誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基配方

試驗(yàn)結(jié)果表明，鐵皮石斛組培苗增殖培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基配方為MS+NAA 0.5mg/L+BA 1.0mg/L+馬鈴薯汁100mg/L。

[1] 譚文澄,戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)[M].北京:中國(guó)林業(yè)出版社,1991.

[2] 張泉鋒,毛碧增.鐵皮石斛培養(yǎng)的產(chǎn)業(yè)化研究[J].中草藥,2004, 35(4):438-440.

[3] 白美發(fā),黃敏.鐵皮石斛組培技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008, 36(36):15802-15803.

[4] 鄭寬瑜,鄧君浪,趙輝.鐵皮石斛組培快繁技術(shù)體系研究[J].云南農(nóng)業(yè)科技,2009(增刊):57-59.

[5] 謝明娟.鐵皮石斛組培快繁技術(shù)[J].北京農(nóng)業(yè),2013(30): 115-116.

2016-12-07