皋月娟 董小小 王 菲 向 娟 劉 婭 陳曉琴 劉 政 高文宏

·實驗研究·

不同超聲輻照時間空化作用對降低兔肝血流灌注效應(yīng)影響的實驗研究

皋月娟 董小小 王 菲 向 娟 劉 婭 陳曉琴 劉 政 高文宏

目的 探討不同聲空化輻照激勵時間高聲壓超聲空化作用對兔肝血流灌注降低的影響作用。方法選取健康新西蘭大白兔27只，依據(jù)不同聲空化輻照時間將其隨機(jī)分為1 min空化組（T1組）、5 min空化組（T5組）及10 min空化組（T10組），每組各9只。所有動物均采用高峰值負(fù)壓（P=2.0 MPa）超聲脈沖聯(lián)合經(jīng)靜脈脂質(zhì)微泡注射進(jìn)行肝臟超聲空化輻照處理。于超聲輻照前、輻照后即刻、輻照后30 min、輻照后60 min及輻照后24 h對各組均進(jìn)行肝臟超聲造影，比較輻照區(qū)域造影曲線下面積（AUC）及達(dá)峰時間（Tp）。輻照后24 h造影結(jié)束切取輻照區(qū)域肝臟組織，觀察其病理改變情況。結(jié)果T1、T5及T10組正常兔肝臟在高聲壓超聲空化輻照后均出現(xiàn)血流灌注量下降和達(dá)峰時間延長，AUC分別由（4868.24±1098.47）%s、（4395.27±1784.42）%s、（5522.43±1444.29）%s降低至（1642.71±914.15）%s、（1825.51±874.96）%s、（1097.38±370.24）%s，Tp由（21.62±7.07）s、（22.67±5.21）s、（24.17±5.50）s增加至（42.23±19.12）s、（50.04±11.33）s、（51.98± 12.06）s。隨著時間延長各組AUC逐漸回升，Tp逐漸回落。重復(fù)測量結(jié)果顯示，各造影參數(shù)組間效應(yīng)及交互效應(yīng)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P組間=0.171、0.432、0.724，P時間*組間=0.905、0.472、0.230）；組內(nèi)效應(yīng)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01），其中T1組輻照后即刻及輻照后30 min AUC與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），T5組僅輻照后即刻AUC與輻照前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），而T10組輻照后所有時間點(diǎn)AUC與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；T1組輻照后即刻及輻照后60 min Tp與輻照前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），T5組輻照后即刻、60 min、24 h Tp與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），而T10組輻照后所有時間點(diǎn)Tp與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。病理結(jié)果顯示，三組肝臟組織均出現(xiàn)不同程度的肝臟細(xì)胞變性壞死，T10組目測壞死范圍大于T5組及T1組。結(jié)論高聲壓超聲空化作用可顯著降低正常兔肝組織血流灌注量及灌注速率，但不同聲空化輻照時間對其影響作用無顯著差異。隨著聲空化時間的延長，組織血流灌注恢復(fù)減緩。

超聲空化；微泡；肝臟；止血；兔

肝臟損傷是僅次于脾臟損傷的第二常見腹腔實質(zhì)性臟器損傷，嚴(yán)重的肝臟損傷患者死亡率可達(dá)4．0%～11．7%［1-2］。由于肝臟質(zhì)脆易碎且血管豐富，肝損傷后大出血引起的失血性休克成為其主要危險因素。有效控制損傷部位的出血不僅可以減輕患者失血癥狀，還可降低嚴(yán)重?fù)p傷患者手術(shù)治療的難度，為醫(yī)師和患者提供更好的治療條件。Zhao等［3］研究發(fā)現(xiàn)，在高聲壓低平均聲強(qiáng)超聲脈沖輻照的同時輔以血池內(nèi)脂質(zhì)微泡灌注，其劇烈瞬態(tài)空化效應(yīng)的產(chǎn)生可引起肝細(xì)胞急性水腫，繼發(fā)的肝竇閉塞可顯著降低甚至?xí)簳r性阻斷肝臟局部的血流灌注，使出血量及出血速率顯著下降。本實驗在此基礎(chǔ)上，同樣采用高聲壓低聲強(qiáng)超聲脈沖進(jìn)行不同時間的聲空化輻照，旨在評價不同聲空化輻照時間對兔肝血流灌注及組織損傷的影響，為聲空化作用的相關(guān)影響因素提供更全面的證據(jù)，為其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

材料與方法

一、實驗動物及分組

健康新西蘭大白兔27只，雌性不限，體質(zhì)量2～3kg，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組：T1組、T5組、T10組，各組聲空化輻照時間分別為1min、5min、10min，余聲空化參數(shù)相同。

二、儀器與試劑

1．儀器：使用西門子S 2000彩色多普勒超聲診斷儀，線陣探頭，頻率為7～9 MHz；配有次諧波低機(jī)械指數(shù)超聲造影模式及時間－強(qiáng)度曲線定量分析軟件，用于肝臟超聲造影灌注的動態(tài)成像及造影相關(guān)參數(shù)的定量分析。使用深圳市威爾德醫(yī)療電子有限責(zé)任公司生產(chǎn)的脈沖式超聲空化治療儀，為定制型脈沖式超聲發(fā)射儀器，由主機(jī)及治療探頭組成，工作波形、超聲發(fā)射頻率、峰值聲壓、脈沖重復(fù)頻率、有效脈沖寬度、工作/間歇時間及治療時間等參數(shù)可調(diào)節(jié)，用于激勵脂質(zhì)微泡產(chǎn)生空化效應(yīng)。

2．試劑：“脂氟顯”脂質(zhì)包膜微泡，由第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院超聲科自行研制。核心氣體為全氟丙烷，包膜成分由1，2－棕櫚酰磷脂酰甘油（DPPG）和二硬脂?；字Ｒ掖及罚―SPE）經(jīng)凍干法制成；微泡濃度約4～9×109/ml，平均粒徑2 μm，作為次諧波低機(jī)械指數(shù)成像的超聲造影劑及超聲空化效應(yīng)的空化核，經(jīng)靜脈注入血液循環(huán)。

三、實驗方法

1．輻照前準(zhǔn)備：健康新西蘭大白兔，稱重后以復(fù)合麻醉方法麻醉。肌注鹽酸塞拉嗪注射液（陸眠寧Ⅱ，吉林省華牧動物保健品有限公司）0．3 ml/kg；待動物肌肉松弛后，經(jīng)耳緣靜脈注入2%戊巴比妥鈉（Sigma，P3761）溶液約0．4 ml/kg；待動物角膜反射基本消失后，仰臥位固定于動物手術(shù)臺。腹部備皮，上至胸骨柄水平，下至劍突下10 cm處，兩側(cè)至腋前線處。局部皮膚以醫(yī)用碘伏溶液消毒，鋪一次性無菌手術(shù)巾。于劍突下沿腹中線逐層切開皮膚及腹壁肌肉約4 cm。將肝葉由腹壁切口輕輕拖出，置于腹壁上。

2．超聲造影及超聲空化輻照：選取肝葉長軸切面采集二維影像，隨后固定探頭，經(jīng)靜脈團(tuán)注“脂氟顯”脂質(zhì)微泡造影劑0．1 ml/kg，同時于次諧波低機(jī)械指數(shù)造影成像模式下錄取造影動態(tài)影像90 s。造影結(jié)束后，將空化治療儀治療頭置于肝葉表面，保證充分耦合，按照設(shè)定參數(shù)及分組分別輻照肝臟1 min、5 min或10 min。脈沖超聲參數(shù)設(shè)置為：工作波形采用正弦波，探頭頻率為1．07MHz，脈沖重復(fù)頻率100 Hz，有效脈沖寬度50 μs，峰值負(fù)壓2000 kPa，采用“工作6 s－間歇6 s”模式進(jìn)行輻照。治療頭輻照同時經(jīng)靜脈緩慢推注稀釋的脂質(zhì)微泡0．2 ml/kg（微泡以無菌生理鹽水稀釋至3 ml）。輻照后即刻采用同樣方法再次進(jìn)行超聲造影并錄取動態(tài)影像。以輻照結(jié)束時間點(diǎn)為零點(diǎn)，于30 min及60 min時分別行超聲造影記錄肝葉同一部位造影影像。等待間期以濕潤的無菌紗布塊覆蓋于肝葉表面。60 min造影結(jié)束后，將肝葉輕緩置入腹腔，逐層縫合腹壁肌肉及皮膚，腹腔內(nèi)及切口處局部以40萬單位青霉素鈉溶液（華北制藥股份有限公司）沖淋，同時肌注40萬單位青霉素，待動物蘇醒后繼續(xù)飼養(yǎng)。24 h后以同前方法麻醉動物并沿原腹部切口剪斷縫合線，拖出肝葉。再次于原部位行超聲造影檢查。

3.造影圖像分析：使用儀器自帶的造影分析軟件分析各組動物于各造影時間點(diǎn)的時間-強(qiáng)度曲線。勾選輻照區(qū)域為感興趣區(qū)，儀器自動生成時間-強(qiáng)度曲線，采用Gamma變量擬合方式生成擬合曲線，獲得曲線下面積（AUC）及達(dá)峰時間（Tp），見圖1。AUC為動態(tài)造影各時間點(diǎn)造影強(qiáng)度對造影時間的積分值，反映整個造影時間段內(nèi)的累積灌注強(qiáng)度；因該儀器自帶算法所得造影強(qiáng)度單位為%，故以時間積分后AUC單位為%s；Tp為造影劑進(jìn)入到達(dá)峰時刻所經(jīng)歷時間，單位為s。

圖1 超聲造影軟件圖像分析界面

4.病理檢查：輻照后24 h造影結(jié)束后，切取輻照區(qū)域肝臟組織，固定于4%多聚甲醛溶液及2%戊二醛溶液中，常規(guī)制備HE染色石蠟切片及電鏡組織切片，觀察組織病理改變情況。

四、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié)果

一、各組超聲造影表現(xiàn)

圖2 各組不同時間點(diǎn)超聲造影圖

各組二維超聲造影圖像見圖2?？栈椪涨埃⑴菰煊皠┩谱⒑蟾鹘M肝臟血流灌注呈現(xiàn)典型“快進(jìn)慢出”表現(xiàn)，在動脈相肝臟實質(zhì)快速均勻增強(qiáng)（圖2A、F、K），約15～25 s時造影強(qiáng)度達(dá)到峰值，隨后緩慢減弱。空化輻照后即刻，各組輻照區(qū)域均出現(xiàn)不同程度血流灌注受阻現(xiàn)象（圖2B、G、L），表現(xiàn)為造影劑灌注緩慢及充盈缺損；輻照區(qū)域肝臟典型“快進(jìn)”現(xiàn)象消失，代之以與呼吸相關(guān)的緩慢推進(jìn)式灌注，無明顯達(dá)峰現(xiàn)象，至90 s仍可見輻照區(qū)域大血管分支內(nèi)緩慢血流灌注；肝實質(zhì)內(nèi)可見大范圍、不規(guī)則充盈缺損區(qū)。至空化輻照后30 min，各組輻照區(qū)域仍表現(xiàn)為造影劑灌注緩慢及充盈缺損，但灌注速度較輻照后即刻明顯增快，充盈缺損區(qū)范圍較前減?。▓D2C、H、M）?？栈椪蘸?0 min，各組超聲造影可見輻照區(qū)域肝實質(zhì)不均勻增強(qiáng)，造影劑灌注速度仍較緩慢，輻照區(qū)域未見大范圍充盈缺損，但其增強(qiáng)不均質(zhì)，可見肝實質(zhì)內(nèi)小片狀充盈缺損區(qū)域（圖2D、I、N）。24 h后再次行超聲造影，可見各組肝臟基本恢復(fù)正常血流灌注速度，但輻照區(qū)域峰值造影強(qiáng)度較周邊未輻照區(qū)域降低，部分仍可見肝實質(zhì)內(nèi)散在分布小片狀充盈缺損區(qū)域（圖2E、J、O）。

二、各組超聲造影定量比較

各組超聲造影定量參數(shù)AUC及Tp見表1。隨時間延長各組AUC逐漸回升，Tp逐漸回落。重復(fù)測量結(jié)果顯示，各造影參數(shù)組間效應(yīng)及交互效應(yīng)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P組間=0.171、0.432、0.724，P時間*組間=0.905、0.472、0.230）；組內(nèi)效應(yīng)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01），其中：①T1、T5、T10組AUC較輻照前分別下降了約66.3%、58.5%、80.1%。各組輻照后30 min、60 min、24 h AUC均較輻照后即刻升高，T1組分別為輻照前的77.0%、88.7%及97.3%，T5組分別為輻照前的77.6%、89.7%及88.7%，T10組分別為輻照前的63.1%、71.0%及56.9%。T1組輻照后即刻及輻照后30 min AUC與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），T5組僅輻照后即刻與輻照前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而T10組輻照后所有時間點(diǎn)與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。②空化輻照后即刻T1、T5、T10組Tp分別延長至輻照前的2.12倍、2.27倍及2倍。至輻照后30 min、60 min及24 h，各組Tp均較輻照后即刻有所降低，但較輻照前仍高，與輻照前比較分別為：T1組1.43倍、1.56倍、0.98倍，T5組1.36倍、1.85倍、1.36倍，T10組1.68倍、1.64倍、1.42倍。T1組輻照后即刻及輻照后60 min Tp與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），T5組輻照后即刻、60 min、24 h與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），而T10組輻照后所有時間點(diǎn)與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

三、病理檢查結(jié)果

輻照后24 h各組肝臟組織均出現(xiàn)局部肝細(xì)胞不可逆性病理損傷，包括散在片狀肝細(xì)胞氣球樣變（圖3A）及嗜酸性壞死（圖3B、C），壞死部位可見白細(xì)胞浸潤。電鏡檢測結(jié)果同樣顯示肝細(xì)胞早期壞死性改變，細(xì)胞及胞核輪廓尚存，但正常細(xì)胞器結(jié)構(gòu)均消失，胞漿呈無結(jié)構(gòu)疏松片狀均質(zhì)，壞死區(qū)域可見較多白細(xì)胞浸潤（圖3D～F）。各組壞死區(qū)域病理改變情況相同，但T10組目測壞死區(qū)域較T5及T1組大。

表1 各組不同時間點(diǎn)AUC及Tp比較（±s）

表1 各組不同時間點(diǎn)AUC及Tp比較（±s）

AUC：曲線下面積；Tp：達(dá)峰時間。

組別 AUC（%s） Tp（s）T1組輻照前 4868.24±1098.47 24.17±5.50輻照后即刻 1642.71±914.15 51.98±12.06輻照后30 min 3747.72±1514.55 32.61±16.49輻照后60 min 4317.88±1442.86 37.63±11.17輻照后24 h 4738.03±1696.96 23.72±12.77 T5組輻照前 4395.27±1784.42 22.67±5.21輻照后即刻 1825.51±874.96 50.04±11.33輻照后30 min 3410.54±1756.43 30.92±13.88輻照后60 min 3944.87±1257.56 41.85±13.30輻照后24 h 3898.98±1710.82 30.80±7.34 T10組輻照前 5522.43±1444.29 21.62±7.07輻照后即刻 1097.38±370.24 42.23±19.12輻照后30 min 3486.44±1984.74 36.26±12.03輻照后60 min 3916.56±1560.56 43.71±13.73輻照后24 h 3140.48±2152.63 37.79±15.83 P時間（F時間） 0.000（20.195） 0.000（17.257）P組間（F組間） 0.432（0.870） 0.724（0.328）P時間*組間（F時間*組間） 0.472（0.960） 0.230（1.347）

討論

圖3 輻照后24 h各組肝臟組織病理圖（HE染色，×100）及電鏡圖（D示，×15 000；E、F示，×5000）

超聲輻照對活體組織生物學(xué)行為具有影響作用的觀點(diǎn)早已被業(yè)界公認(rèn)。在診斷超聲成像領(lǐng)域，為了避免潛在副作用的產(chǎn)生，監(jiān)管部門嚴(yán)格規(guī)定超聲輻照能量必須限制在安全閾值之內(nèi)［4-5］。而在治療超聲領(lǐng)域，超聲生物學(xué)效應(yīng)潛在的治療用途則逐漸引起部分學(xué)者［6-7］的重視。隨著超聲造影技術(shù)在臨床應(yīng)用的逐步推廣，超聲造影劑微泡的應(yīng)用亦日漸廣泛。其結(jié)構(gòu)特性使其不僅可作為聲散射微粒用于血池造影成像，同時可作為外源引入的微氣腔大大降低空化效應(yīng)的閾值，使得同樣超聲輻照條件下血管內(nèi)較血管外產(chǎn)生更強(qiáng)烈的空化效應(yīng)，從而引起血管損傷［8］。超聲空化引起的血管損傷效應(yīng)強(qiáng)弱與輻照能量密切相關(guān)，隨著超聲輻照能量的增強(qiáng)可引起不同類型的血管效應(yīng)，包括血管通透性的增加，輕度血管損傷，甚至血管的損傷性閉塞［9-10］。Liu等［11］和Li等［12］采用峰值負(fù)壓2.6 MPa的超聲輻照聯(lián)合靜脈脂質(zhì)微泡注射，有效破壞了大鼠及兔的腫瘤微血管，引起腫瘤溫度及造影灌注強(qiáng)度的降低。在此基礎(chǔ)上采用峰值負(fù)壓4.3 MPa的超聲聯(lián)合血池內(nèi)微泡注射輻照兔肝臟后，實現(xiàn)了其血流的暫時性阻斷，并進(jìn)一步增強(qiáng)了肝臟酒精消融的體積［13］。Zhao等［3］采用的輻照超聲峰值負(fù)壓雖然遠(yuǎn)較診斷超聲高，但由于所使用的脈沖超聲占空比極低（＜1%），時間平均空間聲強(qiáng)遠(yuǎn)低于高強(qiáng)度聚焦超聲，故其熱效應(yīng)不顯著，血流阻斷效應(yīng)主要依靠超聲激勵的微泡空化效應(yīng)所產(chǎn)生。其研究證實，高聲壓低聲強(qiáng)超聲輻照聯(lián)合血管內(nèi)脂質(zhì)微泡注射的血流阻斷效應(yīng)效果確切，在對肝臟進(jìn)行輻照時可引起輻照區(qū)域肝細(xì)胞急性水腫及繼發(fā)性肝竇閉塞，該效應(yīng)用于肝臟的急性止血效果佳。但是，上述研究對超聲空化肝臟損傷效應(yīng)的持續(xù)時間及參數(shù)影響作用未進(jìn)行深入研究探討。肝臟作為人體的“化學(xué)工廠”，承擔(dān)解毒及物質(zhì)合成等重要任務(wù)，如何在實現(xiàn)有效止血效應(yīng)的前提下盡可能降低損傷效應(yīng)，對于肝損傷后功能的恢復(fù)具有重要意義。

本實驗超聲造影觀察及定量分析結(jié)果顯示，在血管內(nèi)脂質(zhì)微泡存在的條件下，高峰值聲壓（2 MPa）脈沖超聲輻照兔正常肝臟后即刻，輻照區(qū)域AUC顯著下降，下降率可達(dá)58.5%～80.1%，同時Tp顯著延長，可達(dá)輻照前2倍；至輻照后30 min、60 min及24 h，AUC呈現(xiàn)逐漸回升趨勢，Tp則逐漸回落，提示空化輻照后輻照區(qū)域組織血流灌注量下降、血流速度減緩，且該效應(yīng)隨時間延長逐漸恢復(fù)。兩因素重復(fù)測量方差分析結(jié)果證實，各組內(nèi)不同時間點(diǎn)AUC及Tp比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），且輻照后即刻肝臟AUC均顯著低于輻照前，Tp均顯著高于輻照前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。本實驗結(jié)果再一次證實高聲壓脈沖超聲激勵微泡產(chǎn)生的空化效應(yīng)可引起肝臟血流灌注量的有效下降及血流速度的有效減緩。而組間與時間交互效應(yīng)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，提示時間點(diǎn)的作用不隨空化輻照時間變化而改變。以上結(jié)果證實，高聲壓低強(qiáng)度脈沖超聲的空化效應(yīng)可造成局部肝臟血流灌注量和灌注速度隨時間的顯著改變，但聲輻照時間的長短對該阻斷效應(yīng)無顯著影響。

盡管重復(fù)測量分析結(jié)果顯示各組間無顯著差異，但各組內(nèi)分別進(jìn)行比較顯示，T10組在輻照后各時間點(diǎn)AUC及Tp與輻照前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），而T1及T5組僅個別時間點(diǎn)與輻照前比較有差異，可見長時間輻照的影響作用主要體現(xiàn)在血流灌注的恢復(fù)過程上，而非即刻的灌注阻斷效果上。結(jié)合病理檢查結(jié)果可知，在相同參數(shù)的高聲壓低聲強(qiáng)超聲脈沖空化輻照下，短時間的空化效應(yīng)即可導(dǎo)致輻照區(qū)域肝組織血流灌注量及灌注速度的顯著下降，輻照時間的延長并不會產(chǎn)生更顯著的即刻阻斷效應(yīng)，但會減緩輻照后血流恢復(fù)的速度，同時會增加組織損傷的程度。其原因與空化損傷的作用機(jī)制有關(guān)。在體內(nèi)大量微泡空化核存在的條件下，高達(dá)2 MPa峰值負(fù)壓的脈沖超聲可引起強(qiáng)烈的瞬態(tài)空化，僅若干脈沖產(chǎn)生的強(qiáng)烈空化效應(yīng)即可對肝血竇甚至鄰近肝細(xì)胞造成損傷，而1 min的輻照時間足以引起部分肝細(xì)胞的急性水腫。隨著輻照時間的延長，肝細(xì)胞水腫范圍及程度亦逐步增加，此時由于肝竇閉塞所引起的血流灌注受阻同樣會導(dǎo)致微泡空化核的進(jìn)入受阻，因此輻照后期空化效應(yīng)的效率遠(yuǎn)低于輻照早期，但長時間高聲壓脈沖刺激的累積可能引起細(xì)胞損傷的進(jìn)一步加重，導(dǎo)致壞死范圍的擴(kuò)大。本實驗結(jié)果也證實了盡管T1組及T5組在輻照后24 h血流灌注參數(shù)仍不及輻照前水平，但與輻照前比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，可以認(rèn)為已基本恢復(fù)，而T10組在輻照后24 h的血流灌注水平與輻照前比較差異仍有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，本實驗再次證實了高聲壓低聲強(qiáng)脈沖超聲空化效應(yīng)的血流阻斷效果，并通過對不同超聲輻照時間組的比較，得到了輻照時間的延長對即刻空化效應(yīng)無顯著影響，但會減緩血流灌注恢復(fù)的結(jié)論，對于指導(dǎo)肝臟的空化止血應(yīng)用具有重要意義。但是由于對24 h后的空化病理損傷未進(jìn)行定量比較，因此尚不能明確超聲輻照時間的延長是否會增加組織病理損傷的程度，尚有待進(jìn)一步探索。

［1］Chatoupis K，Papadopoulou G，Kaskarelis I.New technology in the management of liver trauma［J］.Ann Gastroenterol，2013，26（1）：41-44.

［2］Brown TC.Considerations on the management of liver trauma［J］. Paediatr Anaesth，2013，23（1）：94-96.

［3］Zhao X，Li L，Zhao H，et al.Liver haemostasis using microbubbleenhanced ultrasound at a low acoustic intensity［J］.Eur Radiol，2012，22（2）：379-386.

［4］Fowlkes JB，Abramowicz JS，Church CC，et al.American institute of ultrasound in medicine consensus report on potential bioeffects of diagnostic ultrasound［J］.J Ultrasound Med，2008，27（4）：503-515.

［5］Dalecki D.Mechanical bioeffects of ultrasound［J］.Ann Rev Biomed Eng，2004，6（1）：229-248.

［6］David E.Goertz.An overview of the influence of therapeutic ultrasound exposures on the vasculature：high intensity ultrasound and microbubble-mediated bioeffects［J］.Int J Hyperthermia，2015，31（2）：134-144.

［7］Wood AK，Sehgal CM.A review of low-intensity ultrasound forcancer therapy［J］.Ultrasound MedBiol，2015，41（4）：905-928.

［8］Skyba DM，Price RJ，Linka AZ，et al.Direct in vivo visualization of intravascular destruction of microbubbles by ultrasound and its local effects on tissue［J］.Circulation，1998，98（4）：290-293.

［9］Miller DL，Quddus J.Diagnostic ultrasound activation of contrast agent gas bodies induces capillary rupture in mice［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2000，97（18）：10179-10184.

［10］Hwang JH，Brayman AA，Reidy MA，et al.Vascular effects induced by combined 1-MHz ultrasound and microbubble contrast agent treatments in vivo［J］.Ultrasound Med Biol，2005，31（4）：553-564.

［11］Liu Z，Gao S，Zhao Y，et al.Disruption of tumor neovasculature by microbubble enhanced ultrasound：a potential new physical therapy of anti-angiogenesis［J］.Ultrasound Med Biol，2012，38（2）：253-261.

［12］Li P，Zhu M，Xu Y，et al.Impact of microbubble enhanced，pulsed，focused ultrasound on tumor circulation of subcutaneous VX2 cancer［J］.Chin Med J（Engl），2014，127（14）：2605-2611.

［13］Liu Q，Zhao H，Wu S，et al.Impact of microbubble-enhanced ultrasound on liver ethanol ablation［J］.Ultrasound Med Biol，2013，39（6）：1039-1046.

Effects of different acoustic irradiation time on cavitation-induced blood flow reduction of rabbit liver

GAO Yuejuan，DONG Xiaoxiao，WANG Fei，XIANG Juan，LIU Ya，CHEN Xiaoqin，LIU Zheng，GAO Wenhong Department of Ultrasound，302 Hospital of PLA，Beijing 100039，China

ObjectiveTo investigate the effects of different acoustical irradiation time on the reduction of rabbits hepatic blood perfusion under high-pressure ultrasonic cavitation.MethodsTwenty-seven healthy New Zealand rabbits were randomly divided into three groups according to the acoustic irradiation duration adopted-1 min（T1 group），5 min（T5 group），and 10 min（T10 group），withninemiceineachgroup.Ultrasoniccavitationprocedurewascarriedoutonallanimalsbyhighnegativepressure（P=2.0 MPa）pulsed ultrasonic irradiation combined with intravenous lipid microbubbles injection.Before，right after，30 min after，60 min after，and 24 h after the cavitation procedure，contrast-enhanced ultrasonography was performed to obtain timeintensity curve from which quantity parameters including area under curve and time to peak could be analyzed.After ultrasonography at 24 h，the treated liver tissues were harvested for pathological observation.ResultsAll three groups showeddecreased blood perfusion and prolonged time to peak right after high－pressure ultrasonic cavitation irradiation．Area under curve of T1，T5，and T10 groups decreased from（4868．24±1098．47）%s，（4395．27±1784．42）%s，（5522．43±1444．29）%s to（1642．71± 914．15）%s，（1825．51±874．96）%s，（1097．38±370．24）%s，respectively，while time to peak value prolonged from（21．62±7．07）s，（22．67±5．21）s，（24．17±5．50）s to（42．23±19．12）s，（50．04±11．33）s，（51．98±12．06）s，respectively．Both parameters showed gradual recovery over a long time．Statistical analysis showed no significant differences in cavitation duration effect（P＝0．171，0．432，0．724）and cavitation duration×time interaction effect（P＝0．905，0．472，0．230），but time effect showed statistical significant differences among three groups（all P＜0．01）．Pathological results showed that cell degeneration and necrosis were observed in all three groups，and the area T10 group was larger than that of T5 group and T1 group．Conclusion High negative pressure ultrasound induced microbubble cavitation can significantly reduce the perfusion volume and perfusion rate of liver tissue in normal rabbits，but the effect of different acoustic irradiation time has no significant difference．With the elongation of ultrasonic cavitation time，recovery of tissue blood perfusion slow down．

Cavitation；Microbubble；Liver；Hemostasis；Rabbit

R-332；R445.1

A

2016-11-21）

100039 北京市，解放軍第三○二醫(yī)院超聲科（皋月娟）；第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院超聲科（董小小、向娟、劉婭、陳曉琴、劉政、高文宏）；昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院超聲科（王菲）

高文宏，Email：10471048gwh＠163.com