周光中 杜榮增 廖德寧

(江蘇大學醫(yī)學院，鎮(zhèn)江212000)

CD64的表達水平在川崎病診療中的作用①

周光中 杜榮增②廖德寧③

(江蘇大學醫(yī)學院，鎮(zhèn)江212000)

川崎病( Kawasaki disease， KD)又稱皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，是一種原因不明的急性發(fā)熱出疹性疾病，其主要危害為其心血管并發(fā)癥，特別是冠狀動脈損害[1]。川崎病如果不能及時治療，20%～25%的患兒會發(fā)生心血管損害，導致冠脈擴張、冠脈瘤、冠狀動脈狹窄甚至閉塞(心肌梗死)。 如果及時確診，并使用靜脈注射免疫球蛋白(Intravenous immune globulin,IVIG)治療后，可以有效降低動脈異常的風險[2]。當前川崎病的診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)，沒有一個明確的生物標志物可以明確標識川崎病的發(fā)生，而且由于川崎病早期的臨床癥狀不典型，尤其是在出現(xiàn)指(趾)端脫皮之前，給早期治療帶來困難。本實驗采用流式細胞儀定量分析了川崎病患兒和其他非川崎病發(fā)熱患兒發(fā)熱階段以及正常兒童的中性粒細胞和單核細胞中CD64的表達水平差異，并記錄在使用IVIG治療實施前后該指標的變化情況，目的是探討CD64能否作為川崎病的診斷指標，是否可以作為一個衡量川崎病治療效果的一個生物標識物。

1 資料與方法

本實驗選取了2013年9月至2016年8月在我院兒科收治的31名具有發(fā)熱癥狀并具有某些川崎病臨床表現(xiàn)的患兒，其中16名最終被診斷為川崎病，命名為川崎病組，未被診斷為川崎病的命名為發(fā)熱對照組(15例)，同時選取健康兒童10名，作為健康對照組。

抽取了所有兒童送診時的血液樣本，對川崎病患兒進行IVIG治療，治療1～2 d后以及治療20 d后，抽取其血液用以分析。

所有的血液樣品均使用流式細胞儀定量分析其中性粒細胞及單核細胞中CD64的表達水平，所用的流式細胞儀(FASCalibur)及試劑(熒光抗體及標準熒光微球)均來自于BD Biosciences 公司，方法參考文獻[3]。

對于川崎病確診患兒，我們測量其送診時及治療之后血液血清中G-CSF的表達，G-CSF的測量使用的是武漢華美的ELISA試劑盒，酶標儀采用美國biotek ELx800。

2 結(jié)果

2.1 CD64在各組樣本的中性粒細胞及單核細胞中的表達 我們首先檢測了CD64在各組兒童在送診時血液中的中性粒細胞及單核細胞中的表達情況，結(jié)果顯示，在中性粒細胞中，川崎病患者的CD64的表達水平為(13 276±6 531)個/中性粒細胞，在單核細胞中，川崎病患者CD64的表達水平為(46 358±14 589)個/單核細胞， 而在正常對照組中，其表達水平分別為(1 197±392)個/中性粒細胞和(15 072±6 035)個/單核細胞。在發(fā)熱對照組(非川崎病發(fā)熱組)中，CD64的表達水平為(3 029±1 080)個/中性粒細胞和(22 035±9 960)個/單核細胞。這表明川崎病患者在發(fā)熱階段，在中性粒細胞以及單核細胞中CD64的表達水平相對于非川崎病發(fā)熱組以及正常對照組明顯上升，并且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 CD64在川崎病患兒IVIG治療前后的表達 在IVIG治療1～2 d后，川崎病患兒的CD64表達水平下降為(6 214±2 073)個/中性粒細胞和(39 629±8 814)個/單核細胞；在治療20 d后，川崎病患兒的CD64表達水平下降為(1 884±472)個/中性粒細胞和(18 216±5 083)個/單核細胞，相比于治療前，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。這表明IVIG治療會迅速降低患兒CD64在中性粒細胞中的表達水平，但對于單核細胞，CD64降低的速度相對緩慢， 需要較長時間才有顯著的下降。

2.3 G-CSF在川崎病患兒中的表達以及治療前后的表達差異 有研究表明， G-CSF可以提高CD64的表達水平，并且G-CSF與冠狀動脈損傷有關(guān)聯(lián)。 檢測了患兒在發(fā)熱送診時血清中G-CSF的表達，結(jié)果表明，G-GSF在確診為川崎病患兒中的表達要高于對照組并且在IVIG治療后，該水平會隨著治療時間從(38.0±25.1)pg/ml下降到(10.2±6.1)pg/ml(治療2 d后)，再下降至(3.3±1.0)pg/ml(治療20 d 后)，與CD64在中性粒細胞中的表現(xiàn)情況類似。

3 討論

川崎病是一種常見的兒童心血管炎癥性疾病，目前還沒有一個可靠的病理學生化指標來診斷川崎病的發(fā)生及跟蹤治療效果。本實驗檢測了川崎病患者中性粒細胞和單核細胞中CD64水平的表達，來探討CD64在川崎病診斷和治療中的表達水平是否有顯著的變化。

實驗結(jié)果表明，川崎病患兒中性粒細胞和單核細胞中CD64表達水平在川崎病早期發(fā)熱階段，會有顯著的上升，并且在使用IVIG治療后，CD64的水平會逐漸下降，這表明，CD64在中性粒細胞和單核細胞中的表達水平可以作為川崎病診斷以及評價治療效果的一個標記物。數(shù)據(jù)還表明，在所有發(fā)熱送診兒童中，CD64的表達水平相對于正常兒童均有上升，但是川崎病患兒的中性粒細胞及單核細胞中，CD64的表達水平上升程度遠遠高于非川崎病發(fā)熱患兒中CD64的表達升高水平，這種升高水平的差異可能以作為川崎病診斷的一個參考指標。

大劑量的IVIG聯(lián)合使用阿司匹林是一個常用的川崎病標準治療方案，能夠極大降低冠狀動脈病變的發(fā)生，并降低全身的炎癥程度。本研究結(jié)果表明， 使用IVIG治療處理后，川崎病患兒的CD64水平會有顯著的下降，這與Abe等[4]的研究之相一致。有研究表明，CD64下降原因可能是IVIG抑制了免疫細胞的活化相關(guān)[5]。中性粒細胞等效應細胞可以通過其表面的FcgR與含有IgG的免疫復合物接合后被激活，從而使其對血管的內(nèi)皮細胞產(chǎn)生損傷[6]。綜上所述，CD64可能參與了這些炎癥反應，并且在KD的發(fā)病過程中發(fā)揮一定作用。粒細胞集落刺激因子G-CSF是由免疫細胞產(chǎn)生的，引導細胞增殖分化為成熟的粒細胞。川崎病患者血清中G-CSF水平會升高，與冠狀動脈病變相關(guān)[7，8]。在川崎病患者中，有冠狀動脈擴張的患者血清中G-CSF的水平遠遠高于沒有冠狀動脈擴張癥狀的患者血清中G-CSF的表達水平。在惡性腫瘤患者中，使用G-CSF治療后，中性粒細胞會大量表達與IgG(CD64)具有高度親和力的受體[9]。本研究表明，在川崎病患兒中，G-CSF水平會上升，在免疫球蛋白治療后，G-CSF水平會下降，這與CD64在這些患兒中的表現(xiàn)類似。這個結(jié)果表明，在川崎病患兒中，CD64表達水平的上升與血清中G-CSF濃度的升高具有很強的相關(guān)性，CD64水平的上升可能受到G-CSF因子的調(diào)控。

綜上所述，CD64的表達水平可以作為一個川崎病診斷及治療效果的參考指標， CD64水平的變化可能與G-CSF因子有一定的相關(guān)性。

[1] Kawasaki T.Acute febrile mucocutaneous syndrome with lymphoid involvement with specific desquamation of the fingers and toes in children [J].Arerugi，1967，16:178-222.

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[3] Yamazaki T,Hokibara S,Shigemura T,etal.Markedly elevated CD64 expressions on neutrophils and monocytes are useful for diagnosis of periodic fever,aphthous stomatitis,pharyngitis,and cervical adenitis (PFAPA) syndrome during flares [J].Clin Rheumatol，2014，33:677-683.

[4] Abe J，Jibiki T，Noma s，etal.Gene expression profiling ofthe effect of highdose intravenous Ig in patients with Kawasaki disease [J].J Immunol，2005，174(9)：5837-5845.

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[收稿2016-09-07 修回2016-11-18]

(編輯 張曉舟)

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.07.026

周光中(1974年-)，男，醫(yī)學碩士，副主任醫(yī)師，主要從事兒童川崎病、性早熟及矮小癥的診斷和治療方面的研究，現(xiàn)工作于揚州市江都人民醫(yī)院兒科。

及指導教師：杜榮增(1962年-)，男，醫(yī)學博士，主任醫(yī)師，教授，碩士生導師，主要從事兒童先心病的介入治療、心律失常的射頻消融、心臟病的起搏治療、心臟電生理檢查等方面的研究。

R725.4

A

1000-484X(2017)07-1082-02

①本文為鎮(zhèn)江市科技計劃(社會發(fā)展)項目(SH2015036)。

②江蘇大學附屬江濱醫(yī)院心內(nèi)科，鎮(zhèn)江212000。

③上海第二軍醫(yī)大學附屬長征醫(yī)院心內(nèi)科,上海200001。