李靜靜，范 菲，楊會(huì)鴿

（西安市食品藥品檢驗(yàn)所,陜西 西安 710054）

高效液相色譜法測(cè)定多維元素片中泛酸鈣的含量

李靜靜，范 菲，楊會(huì)鴿

（西安市食品藥品檢驗(yàn)所,陜西 西安 710054）

建立測(cè)定多維元素片中泛酸鈣含量的高效液相色譜法。采用C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%的磷酸溶液（v/v）（3∶97），流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，柱溫25℃。泛酸鈣進(jìn)樣量線性范圍為0.68～3.38μg（R=0.9999），平均回收率為99.4%，其RSD為1.68%（n=9）。該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可用于泛酸鈣的質(zhì)量控制。

泛酸鈣；高效液相色譜法；含量測(cè)定

前言

泛酸鈣和泛酸沒有本質(zhì)的區(qū)別，泛酸鈣的別名是維生素B5[1]。泛酸的一個(gè)重要功能是參加代謝過程，它既是二碳單位的載體，也是體內(nèi)乙酰化酶的輔酶，是?；膫鬟f者[2]。泛酸鈣作為輔酶A的組成物質(zhì)參與調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)、糖和脂肪的代謝，是人體和動(dòng)物體內(nèi)維持正常生理機(jī)能不可或缺的物質(zhì)[3]。特別是生長(zhǎng)發(fā)育過程中脂肪的合成和分解，泛酸鈣都是不可缺少的[4]。缺乏泛酸鈣會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)遲緩、神經(jīng)系統(tǒng)障礙、生殖機(jī)能發(fā)生障礙、皮膚毛發(fā)異常、消化器官失常、適應(yīng)性降低等疾病[5]。臨床上泛酸鈣主要用于治療維生素B缺乏癥，周圍神經(jīng)炎，手術(shù)后腸絞痛等，在醫(yī)藥和食品飼料行業(yè)也經(jīng)常作為添加劑使用[6]。

泛酸鈣雖然廣泛存在于食物中，但在加工烹飪等過程中經(jīng)常會(huì)損失20%～40%，甚至高達(dá)50%，從而導(dǎo)致我們?cè)谑澄镏械臄z入量有限[7]。為了彌補(bǔ)類似的損失，市面上出現(xiàn)的一些保健品或藥品（如多維元素片）中，通常會(huì)添加泛酸鈣作為其主要成分之一[8]。在本實(shí)驗(yàn)中，我們建立了用高效液相色譜法測(cè)定多維元素片中泛酸鈣含量的方法，用于有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

Ultimate 3000高效液相色譜儀（戴安）；BSA124S-CW電子天平（賽多利斯）；MS105電子天平（梅特勒）；多維元素片（貴州神奇藥業(yè)有限公司）；泛酸鈣對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100370-200301）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為高純水。

1.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18；流動(dòng)相：乙腈-0.1%的磷酸溶液（v/v）（3∶97）；流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm，柱溫為25℃；進(jìn)樣量：10μL。以峰面積外標(biāo)法定量。

1.3 溶液制備

取本品20片，精密稱定質(zhì)量，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于泛酸鈣10mg的量）置50mL容量瓶中，加入0.1%的磷酸溶液約40mL，超聲處理20min，放冷，稀釋至刻度，搖勻，過濾，續(xù)濾液作為供試品溶液。另取泛酸鈣對(duì)照品適量，精密稱定，用0.1%的磷酸溶液溶解，并定量稀釋制成每1mL中約含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

1.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密稱取泛酸鈣對(duì)照品33.78mg，置50mL容量瓶中，加0.1%的磷酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別置10mL容量瓶中，加0.1%的磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，制成5份系列濃度的樣品，按上述擬定色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。

精密度試驗(yàn)：精密量取線性關(guān)系考察項(xiàng)下的第2份溶液，按上述擬定色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，記錄色譜圖。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取本品（批號(hào)為140203）適量，共8份，按1.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：配制供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12、18、24h進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖。

回收率試驗(yàn)：精密稱取9份已知含量的樣品（批號(hào)為140203）適量，分別精密加入泛酸鈣對(duì)照品貯備液0.5mL，1.5mL，2.5mL，按1.3項(xiàng)下的方法處理制成回收率試驗(yàn)溶液，分別精密量取10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.5 樣品含量測(cè)定

精密稱取3份不同批次的樣品，以及泛酸鈣對(duì)照品，按溶液制備方法制備供試品溶液與對(duì)照品溶液。分別取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

圖1高效液相色譜圖Fig.1 The HPLC

泛酸鈣主峰保留時(shí)間為15.59min，與相鄰雜質(zhì)峰分離度r=5.27，峰形良好。理論板數(shù)按泛酸鈣峰計(jì)算為18232。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：以進(jìn)樣量（X）與峰面積（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程Y=6000000X+4491.2，R=0.9999。結(jié)果表明，泛酸鈣進(jìn)樣量在0.68～3.38μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：6次峰面積的RSD為0.23%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：8份測(cè)定結(jié)果的RSD為0.62%，表明方法的重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：8次峰面積的RSD為0.24%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

回收率試驗(yàn)：平均回收率為99.4%，RSD為1.68%（n=9），結(jié)果詳見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Table 1 The result of recovery tests（n=9）

1.8 樣品含量測(cè)定

批號(hào)為140201、140202、140203樣品的含量分別為7.88、8.09、8.07mg/g。

3 結(jié)論

由于泛酸鈣在水中的溶解度較大，因此我們選擇水作為樣品提取溶劑[9]，在超聲提取方面，為避免超聲時(shí)間不同對(duì)泛酸提取所造成的誤差影響，我們前期進(jìn)行了大量的文獻(xiàn)搜集及臨床預(yù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)表明，20min可充分提取樣品中的泛酸。

在流動(dòng)相的選擇方面，我們對(duì)目前應(yīng)用較為廣泛的磷酸水溶液－乙腈體系及磷酸鹽緩沖溶液－乙腈體系進(jìn)行了對(duì)比，并就這兩種流動(dòng)相的泛酸出峰時(shí)間、分離度等進(jìn)行了客觀評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)兩種體系在泛酸含量的測(cè)定方面無明顯差異。另有部分文獻(xiàn)證實(shí)[10～15]，磷酸水溶液－乙腈體系簡(jiǎn)便，快速并且峰形良好。因此，我們?cè)诒敬蔚膶?shí)驗(yàn)中，從簡(jiǎn)單實(shí)際、便捷高效的角度，選擇磷酸水溶液－乙腈體系為流動(dòng)相，在精簡(jiǎn)實(shí)驗(yàn)、節(jié)約成本方面更具優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也更利于色譜柱的清洗和保護(hù)。按照該藥品處方配制除該成分外的輔料空白樣品，測(cè)試結(jié)果表明，輔料以及該制劑中其他成分在本試驗(yàn)條件下對(duì)泛酸鈣含量測(cè)定無干擾。由此可見本方法精密度高、重現(xiàn)性及線性關(guān)系良好，回收率達(dá)標(biāo)，結(jié)果準(zhǔn)確、快速，可為該制劑的質(zhì)量控制提供可靠依據(jù)。

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Determination of Calcium Pantothenate Content in Multivitamins and Elements Tablets by HPLC

LI Jing-jing,FAN Fei and YANG Hui-ge
（Xi’an Institute for Food and Drug Control,Xi’an 710054,China）

A HPLC method for the determination of calcium pantothenate in multivitamins and elements tablets is established.The HPLC method is applied with a C18 column（250mm×4.6mm,5μm）,and the acetonitrile-0.1%phosphate solution（v/v）（3∶97）is used as mobile phase,the flow rate is 1.0mL/min,the detection wave length is 205nm and the column temperature is set at 25℃.The linear range of calcium pantothenate sample amount is 0.68～3.38μg（R=0.9999）.The average recovery is 99.4%with an RSD of 1.68%（n=9）.This method is accurate,simple and feasible for quality control of calcium pantothenate.

Calcium pantothenate;HPLC;determination of content

R 927.2

B

1001-0017（2017）03-0234-03

2017-00-00

李靜靜（1984-）女，陜西西安人，碩士，主管藥師，主要研究方向?yàn)樗幬锓治觥?/p>