任國香，唐 彪，歐陽路平，周 健，張小剛，何新杰

(深圳市鐵漢生態(tài)環(huán)境股份有限公司，廣東 深圳 518040)

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不同處理方法對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響

任國香，唐 彪*，歐陽路平，周 健，張小剛，何新杰

(深圳市鐵漢生態(tài)環(huán)境股份有限公司，廣東 深圳 518040)

為了提高樟葉越桔種子的萌發(fā)率，以在六盤水采集的樟葉越桔種子為材料，對其進行種子萌發(fā)試驗，研究了不同水浴溫度浸種(常溫、40℃和60℃)、不同濃度赤霉素(GA3)溶液浸種(200、1000、1500 mg/L)、不同濃度硼酸溶液浸種(0.2%和0.5%)和不同培養(yǎng)溫度(15、20、25、30、35℃)等處理對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響。結(jié)果表明：常溫水浴浸種與40℃水浴浸種條件下種子萌發(fā)率差異不顯著，60℃水浴溫度過高，浸種后的種子喪失生命活力；GA3浸種處理能顯著促進種子萌發(fā)，縮短發(fā)芽時間，且萌發(fā)率隨濃度增加而增加，最大萌發(fā)率達68.67%，而硼酸浸種無明顯作用；不同培養(yǎng)溫度條件下的萌發(fā)率差異顯著，在15～30℃條件下，種子都能發(fā)芽，但萌發(fā)適宜溫度為15～25℃，最適溫度為20℃，最大萌發(fā)率達65.33%。

樟葉越桔；萌發(fā)；GA3；硼酸；溫度

樟葉越桔(VacciniumdunalianumWight)為杜鵑花科(Ericaceae)越桔屬(Vaccinium)常綠灌木[1]，生長于山坡灌叢、闊葉林下或石灰山灌叢，稀附生常綠闊葉林中樹上，主產(chǎn)于云南、貴州、四川、西藏等地，錫金、不丹、印度(東北部)、緬甸(東北部)至越南亦有分布[2]，在貴州省境內(nèi)主要分布于黔東南(榕江、從江、施秉)、黔西南(安龍)、六盤水(盤縣、鐘山)[3-5]等地。樟葉越桔高1～4 m，偶成喬木，葉革質(zhì)，頂端尾狀漸尖，花序腋生，長3～6 cm，花冠淡綠帶紫紅色或淡紅色，寬鐘狀，漿果球形，直徑4～12 cm，紫黑色。

樟葉越桔的頂芽或嫩葉經(jīng)過一系列的工藝可制成在滇中地區(qū)廣泛飲用的具有祛風除濕、舒筋活絡等功效的雀嘴茶[6]，研究證明其陰干果實亦具有較高的營養(yǎng)價值和保健價值[7]。樟葉越桔還是一種富含咖啡酰熊果苷類物質(zhì)的特殊資源植物[8]，并已成功從中分離出糖基轉(zhuǎn)移酶基因家族中的VdUGT1基因全長cDNA序列，證明糖基轉(zhuǎn)移酶VdUGT1屬于UGTs家族的一個新成員，而天然熊果苷是植物體內(nèi)的對苯二酚和 UDP葡萄糖在UGTs成員之一熊果苷合成酶的催化下生物合成而來[9]，因此，樟葉越桔有望作為熊果苷天然替代品資源加以應用，具有重要的開發(fā)價值[10]。在我國，樟葉越桔主要分布于西南地區(qū)，其主干直立、枝繁葉茂，嫩葉紫紅色、老葉濃綠、花序精巧美觀、土壤適應性強，且根據(jù)其野外生境，在損害生態(tài)系統(tǒng)恢復中適于巖石邊坡綠化，在城市綠化中適于道路兩旁或中央綠化帶種植，在庭院中適于草坪叢植或配置于山石[11]，作為觀賞植物，樟葉越桔同樣具有廣闊的應用前景。

目前，樟葉越桔仍為野生生長狀態(tài)，羅旭璐等[10]以野生樟葉越桔幼嫩帶芽莖段為外植體，通過對初代啟動培養(yǎng)、增殖及生根培養(yǎng)方案的篩選，建立了樟葉越桔的組織培養(yǎng)和快速繁殖體系。迄今為止，有關樟葉越桔種子萌發(fā)的研究尚未見報道。為此，本研究以野生樟葉越桔種子為實驗材料，通過研究不同水溫浸種、不同濃度硼酸溶液浸種、不同濃度赤霉素(GA3)浸種以及不同萌發(fā)溫度等探究對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響，從而找出最優(yōu)的種子萌發(fā)條件，以期為樟葉越桔的物種資源保護以及進一步的綜合開發(fā)利用鄉(xiāng)土資源植物提供基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

用于試驗的樟葉越桔種子于2015年12月采自貴州省六盤水市鐘山區(qū)。采回后將果實置于陰涼通風處晾干，放入種子柜貯藏備用。樟葉越桔果實為紫黑色球形漿果，直徑6～8 mm。每顆種子3～10粒，種子褐色近圓形，種子千粒重為(0.30±0.01)g。實驗前將種子從果實中分離、清洗并晾干后備用。

1.2 試驗方法

試驗于2016年5～6月和8～9月分兩批進行。

1.2.1 不同浸種處理對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響 試驗共設置3個浸種處理：(1)不同水溫浸種：常溫、40℃和60℃蒸餾水浸種24 h；(2)不同濃度硼酸溶液浸種：0、0.2%和0.5%硼酸溶液常溫下浸種24 h；(3)不同濃度赤霉素(GA3)溶液浸種：0 mg/L、200 mg/L、1000 mg/L和1500 mg/L GA3溶液常溫下浸種24 h。

每個處理挑選籽粒飽滿的樟葉越桔種子50粒，3次重復，用小燒杯進行24 h浸種處理，之后用蒸餾水沖洗干凈，于0.5%的高錳酸鉀溶液中消毒2.5 h，之后用蒸餾水反復沖洗干凈。采用培養(yǎng)皿濾紙法于RXZ-436B-LED人工氣候箱中進行萌發(fā)實驗，并將試驗溫度設為(25±1)℃，光照強度8000 lx，每天光照12 h。每24 h觀察并記錄種子的萌發(fā)情況，以胚根突破種皮0.5 mm作為種子發(fā)芽的標準，以每個重復發(fā)芽末期連續(xù)3天內(nèi)平均發(fā)芽數(shù)不超過1%作為試驗結(jié)束。同時根據(jù)需要適量滴加蒸餾水，保持濾紙濕潤。

1.2.2 不同培養(yǎng)溫度對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響 實驗共設置15、20、25、30、35℃5個溫度梯度，每個梯度下每組50粒種子，3次重復。實驗種子用常溫蒸餾水浸種24 h，于0.5%的高錳酸鉀溶液中消毒2.5 h，之后用蒸餾水反復沖洗干凈。采用培養(yǎng)皿濾紙法在光照強度8000 lx，每天光照12 h的人工氣候箱中進行萌發(fā)實驗。之后每天記錄種子發(fā)芽情況，在此期間，注意補充水分，保持濾紙濕潤。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

數(shù)據(jù)用Excel 2003處理，采用Origin軟件對數(shù)據(jù)進行制圖分析比較，采用spss軟件對數(shù)據(jù)進行顯著性分析。測定指標如下：

(1)萌發(fā)率=n/N×100%

其中，n為萌發(fā)的種子粒數(shù)，N為供試種子；

(2)發(fā)芽勢=發(fā)芽高峰期正常發(fā)芽的種子粒數(shù)/供檢種子總數(shù)×100%[12]

(3)發(fā)芽指數(shù)=(G1/1+G2/2+…Gx/x)[13]

其中，G為每一次測定的發(fā)芽數(shù)，x為連續(xù)測定對應的天數(shù)；

(4)平均發(fā)芽時間=Σ(Dt×Gt)/ΣGt[14]

其中，Dt為測定發(fā)芽的天數(shù)，Gt為Dt當天的發(fā)芽數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同水浴溫度浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響

圖1表明，不同水浴溫度浸種的樟葉越桔種子均在處理23 d后萌發(fā)率不再變化，常溫水浴浸種的種子在播種后的第8 d開始發(fā)芽，40℃水浴浸種的種子在播種后的第10 d開始發(fā)芽，兩者的日萌發(fā)率都在種子發(fā)芽后的第6 d達到最高，常溫水浴浸種種子的最終萌發(fā)率為46.67%，40℃水浴浸種種子的最終萌發(fā)率較高，為51.33%，說明40℃水浴浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)有促進作用。而60℃水浴浸種后，種子萌發(fā)率為0，推測是由于水浴溫度過高，導致種子喪失活力。

圖1 不同水浴溫度浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)率的影響

2.2 不同濃度GA3溶液浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響

圖2表明，不同濃度GA3溶液浸種的樟葉越桔種子均在處理23 d后萌發(fā)率不再變化，對照處理種子在播種后第11天開始發(fā)芽，不同濃度GA3溶液浸種的種子發(fā)芽時間較早，開始于播種后第8天，且日萌發(fā)率都在種子發(fā)芽后的第3～5天內(nèi)達到最高，為5.33%～6.67%。在不同濃度的GA3溶液處理條件下，以1500 mg/L GA3溶液浸種的萌發(fā)率最高，達68.67%，1000 mg/L GA3溶液處理的萌發(fā)率次之，為53.33%，而對照和200 mg/L GA3溶液處理的種子萌發(fā)率分別為50.67%和44.67%。由此可見，GA3處理可使發(fā)芽時間提前，且隨著浸種溶液中GA3濃度的增加，種子的最終萌發(fā)率也顯著增加，說明GA3有助于促進樟葉越桔種子的萌發(fā)。

圖2 不同濃度GA3溶液浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)率的影響

2.3 不同濃度硼酸溶液浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響

不同濃度硼酸溶液浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響如圖3所示，各處理的萌發(fā)率均在處理23天后不再變化，通過硼酸浸種種子萌發(fā)時間較晚，在播種后的第10～11 d才開始發(fā)芽，三者的日萌發(fā)率都在種子發(fā)芽后的第6 d達到最高，對照處理的最終萌發(fā)率為50.67%，硼酸溶液處理的最終萌發(fā)率略高于對照，分別為51.33%、53.67%，說明硼酸溶液浸種對于樟葉越桔種子的萌發(fā)促進作用不明顯。

圖3 不同濃度硼酸溶液浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)率的影響

2.4 不同培養(yǎng)溫度對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響

由圖4可知，不同培養(yǎng)溫度培養(yǎng)的樟葉越桔種子均在處理23 d后萌發(fā)率不再變化，20℃和25℃條件下種子在播種后的第8天開始發(fā)芽，兩者日萌發(fā)率都在種子發(fā)芽后的第6 d達到最高，30℃條件下種子在播種后的第10 d開始發(fā)芽，其日萌發(fā)率在種子發(fā)芽后的第7 d達到最高，而15℃條件下種子萌發(fā)較遲，始于播種后的第16 d，其日萌發(fā)率在種子發(fā)芽后的第5 d達到最高。從萌發(fā)率來看，20℃條件下種子萌發(fā)率高于其他處理，為65.33%，15℃和25℃條件下萌發(fā)率分別為42.67%和49.33%，30℃條件下種子萌發(fā)率較低，僅為32.67%，35℃條件下種子喪失生活力，萌發(fā)率為0。說明樟葉越桔種子培養(yǎng)溫度不宜超過30℃，且20℃是樟葉越桔種子萌發(fā)的最適溫度。

圖4 不同培養(yǎng)溫度對樟葉越桔種子萌發(fā)率的影響

2.5 不同處理對樟葉越桔種子的萌發(fā)率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)以及平均發(fā)芽時間的影響

在不同處理條件下，種子的萌發(fā)率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)以及平均發(fā)芽時間情況見表1。從萌發(fā)率來看，在不同溫度浸種下，樟葉越桔種子在60℃浸種處理條件下萌發(fā)率為0，40℃浸種的萌發(fā)率為51.33%，與對照無顯著差異，說明此條件對提高樟葉越桔種子萌發(fā)率無顯著影響。赤霉素浸種處理中，在GA3(1500 mg/L)浸種條件下萌發(fā)率達到最高，達68.67%，顯著高于對照；而GA3(1000 mg/L)浸種條件下萌發(fā)率為53.33%，與對照無顯著差異，說明一定濃度的GA3浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)有促進作用。不同濃度硼酸浸種處理的種子萌發(fā)率均與對照無顯著差異，說明硼酸處理不能提高樟葉越桔種子萌發(fā)率。在不同培養(yǎng)溫度條件下，20℃培養(yǎng)溫度樟葉越桔種子萌發(fā)率高達65.33%，15℃和25℃條件下萌發(fā)率分別為42.67%和49.33%，與對照無顯著差異；35℃條件下種子發(fā)芽率為0。由此可見，用1500 mg/L GA3浸種和20℃培養(yǎng)條件對提高樟葉越桔種子萌發(fā)率有顯著作用，低濃度的GA3(200 mg/L)浸種以及高培養(yǎng)溫度(30℃)對種子萌發(fā)有顯著抑制作用，過高的水浴溫度(60℃)以及培養(yǎng)溫度(35℃)則會使種子喪失生活力。

從發(fā)芽勢來看，除60℃水浴以及35℃培養(yǎng)溫度致種子喪失活力外，其余不同處理對提高樟葉越桔種子發(fā)芽勢無顯著差異。由表1可知，樟葉越桔種子在GA3濃度處理條件下平均發(fā)芽時間最低，發(fā)芽指數(shù)最大，其中以1000～1500 mg/L濃度GA3處理條件效果最好；而未經(jīng)過藥劑浸種處理，直接放置于不同溫度培養(yǎng)條件下的種子平均發(fā)芽時間最大，發(fā)芽指數(shù)較小?？梢姡?000～1500 mg/L 濃度GA3浸種有利于提高雜交種子的萌發(fā)能力，縮短發(fā)芽時間。

表1 不同處理對樟葉越桔種子萌發(fā)的影響

注：表中發(fā)芽勢為種子萌發(fā)高峰期(即處理13～16 d)的萌發(fā)率，即總萌發(fā)率、發(fā)芽指靈敏和平均發(fā)芽時間均為處理23 d后的統(tǒng)計數(shù)據(jù)；不同小寫字母表示在0.05水平上差異顯著。

3 討論與結(jié)論

浸種具有改變種皮的透水性，加速種子吸水，促進種子萌發(fā)的作用[15]。溫水和激素處理是種子促萌常用的有效方法，能夠改善種皮透水透氣性，增強種子的抗氧化酶活性，誘導產(chǎn)生水解酶，催化種子內(nèi)貯藏物質(zhì)的分解，從而促進種子萌發(fā)[16]。蔡靜如等[17]的研究表明40℃浸種和GA3浸種處理均能顯著提高杜鵑花雜交種子的萌發(fā)率和發(fā)芽勢，而硼酸浸種無明顯作用。申瑞雪等[18]認為GA3溶液對打破烏飯樹(V.bracteatum)和短尾越橘(V.carlesii)種子休眠、提高萌發(fā)率、縮短發(fā)芽時間有顯著的效果，處理后的烏飯樹和短尾越橘種子對溫度有很高的敏感度，25℃是最佳發(fā)芽溫度，溫度升高萌發(fā)率則降低。楊洪濤等[19]研究了不同處理溫度以及GA3不同處理時間及濃度對云南越桔(V.duclouxii)種子萌發(fā)的影響，發(fā)現(xiàn)在不同溫度條件下的萌芽率差異極顯著，萌發(fā)適宜溫度為15～30℃，最適溫度為25℃；GA3不同處理濃度間的萌發(fā)率差異極顯著，不同處理時間的萌芽率差異不顯著，隨著濃度升高，萌發(fā)率降低，濃度為100 μl/L時，隨著處理時間加長，萌發(fā)率隨之升高，濃度為1000 μL/L時，隨著處理時間加長，萌發(fā)率降低。丁亦男等[20]的研究表明，GA3在50 mg/L條件下，藍莓(V.corymbosum)種子的萌發(fā)率和發(fā)芽勢最高。肖偉鳴等[21]認為，800 mg/L GA3浸種處理24 h對促進烏飯樹(V.bracteatum)種子發(fā)芽的效果最顯著。

本試驗采用不同溫度水浴、不同濃度GA3溶液、不同濃度硼酸溶液浸種和不同培養(yǎng)溫度等對樟葉越桔種子進行萌發(fā)處理，結(jié)果表明60℃浸種會導致種子死亡，喪失生活力，40℃浸種能夠提高種子的萌發(fā)率，但與常溫浸種沒有顯著差異，說明樟葉越桔種子浸種溫度不適宜超過40℃，當室溫較高時，可直接采用室溫浸種；不同濃度GA3溶液浸種對樟葉越桔種子萌發(fā)有顯著影響，用1500 mg/L GA3溶液浸種的樟葉越桔種子萌發(fā)率顯著高于其余處理，且在200～1500 mg/L范圍內(nèi)，隨著GA3濃度的增加，種子的最終萌發(fā)率也顯著增加，說明赤霉素有助于促進樟葉越桔種子的萌發(fā)；而0.2%和0.5%硼酸溶液浸種對種子萌發(fā)并無明顯的促進作用；不同培養(yǎng)溫度對樟葉越桔種子萌發(fā)影響較大，培養(yǎng)溫度為20℃時，樟葉越桔種子的萌發(fā)率達到最高，顯著高于其余處理，推測溫度可能是影響樟葉越桔資源分布的重要生態(tài)因子，從試驗結(jié)果看，說明樟葉越桔具有一定的抗寒性，種子萌發(fā)的適宜溫度在15～25℃之間。由于本研究的不同浸種試驗都是在25℃下開展的，而試驗表明樟葉越桔種子萌發(fā)的最適溫度為20℃，據(jù)此我們推測在GA3濃度1500 mg/L、培養(yǎng)溫度20℃條件下，樟葉越桔種子的萌發(fā)率可能還會提高，這一點有待進一步的研究。

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Effect of Different Treatments on the Seed Germination ofVacciniumDunalianum

RENGuo-xiang，TANGBiao*，OU-YANGLu-ping，ZHOUJian，ZHANGXiao-gang，HEXin-jie

(ShenzhenTechandEcology&EnvironmentCO.,LTD.,Shenzhen,Guangdong518040,China)

Seeds ofVacciniumdunalianumcollected from Liupanshui, Guizhou province were chosen as the germination test materials. Seeds were treated in different soaks such as different temperature (room temperature, 40 ℃ and 60 ℃), different concentrations of GA3(200, 1000 and 1500 mg/L), different concentrations of H3BO3(0.2% and 0.5%) and different constant culture temperatures (15、20、25、30、35℃). The results showed that germination percentage was not significant different in the room temperature and 40 ℃ water bath soaking conditions. However, the temperature of the water bath at 60 ℃ was too high, and the seed after soaking had lost its vitality. The seeds treated with GA3had significantly higher final germination percentage and shortened germination time; and their germination percentage increased along with the increase of concentrations, reaching a maximum of 68.67%. H3BO3treatments did not have effect on seed germination. The difference of germination percentage at different culture temperatures was significant. Seeds ofV.dunalianumcould germinate in a wide range of temperature from 15℃ to 30℃. The suitable temperatures for their germination were 15℃ to 25℃, and the optimum temperature was 20℃ with the maximum germination percentage of 65.33%.

Vacciniumdunalianum； Germination； GA3； H3BO3； temperature

2017-03-05；

2017-04-12

廣東省生態(tài)修復技術(shù)工程實驗室(粵發(fā)改高技術(shù)[2015]162號)；深圳立體綠人輕型基質(zhì)研究工程實驗室(深發(fā)改[2016]1023號)。

Q958.1；S443.3(273)

A

1008-0457(2017)04-0049-06 國際

10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2017.04.009

*通訊作者：唐彪(1987-)，男，碩士，主要研究方向：抗逆植物選育；E-mail：tangbiao@sztechand.com.cn。