金志強(qiáng)，尹澤東，譚艾娟

(1.貴陽(yáng)市農(nóng)委，貴州 貴陽(yáng) 550081 ；2.貴州農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550345；3.貴州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025)

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·研究簡(jiǎn)報(bào)·

貴陽(yáng)市大腸桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)

金志強(qiáng)1，尹澤東2，譚艾娟3*

(1.貴陽(yáng)市農(nóng)委，貴州 貴陽(yáng) 550081 ；2.貴州農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550345；3.貴州大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025)

為了調(diào)查貴陽(yáng)市豬、雞及環(huán)境中的大腸桿菌的耐藥情況，從貴陽(yáng)市花溪區(qū)、烏當(dāng)區(qū)等7個(gè)縣區(qū)采集了豬、雞肛門(mén)拭子及排污口處的糞便，共420份樣品，分離鑒定出300株大腸桿菌，應(yīng)用瓊脂稀釋法測(cè)定其對(duì)10種常用抗菌藥物的MIC值，并統(tǒng)計(jì)抗菌藥物的平均耐藥倍數(shù)、敏感率、耐藥率等。結(jié)果表明：大腸桿菌對(duì)10種藥物的耐藥率整體偏高，除慶大霉素接近50%外，土霉素和氟苯尼考超過(guò)80%，鏈霉素、頭孢噻呋、阿莫西林和磺胺嘧啶超過(guò)70%，恩諾沙星和環(huán)丙沙星超過(guò)60%。300株分離菌均多重耐藥菌株，主要集中在5～10耐之間。結(jié)果表明貴陽(yáng)市豬、雞源大腸桿菌的耐藥較嚴(yán)重。

大腸桿菌；耐藥性；瓊脂稀釋法；多重耐藥

隨著抗菌藥物的廣泛使用，細(xì)菌耐藥水平不斷升高和耐藥譜不斷擴(kuò)大，導(dǎo)致高度耐藥和多重耐藥菌株，甚至超級(jí)細(xì)菌的出現(xiàn)，使動(dòng)物疾病的預(yù)治面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，目前已成為影響?zhàn)B殖業(yè)正常發(fā)展的主要因素之一。同時(shí)，動(dòng)物源耐藥菌可通過(guò)食物、飲水、空氣等途徑將其耐藥性傳遞給人源細(xì)菌，導(dǎo)致臨床治療的失敗，嚴(yán)重威脅人的健康。因此，如何降低和消除細(xì)菌耐藥性的危害已成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)。大腸桿菌由于廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境中，是細(xì)菌耐藥基因儲(chǔ)存庫(kù)和重要傳播中轉(zhuǎn)站，國(guó)內(nèi)外將其確定為耐藥性監(jiān)測(cè)的指示菌株[1]，通過(guò)監(jiān)測(cè)大腸桿菌耐藥性反映該區(qū)域的細(xì)菌的耐藥水平。本研究對(duì)從貴陽(yáng)市7個(gè)縣區(qū)的豬、雞及養(yǎng)殖場(chǎng)總排污口處分離得到300株大腸桿菌進(jìn)行耐藥性監(jiān)測(cè)，旨在為豬、雞養(yǎng)殖業(yè)中科學(xué)、合理選用藥物提供依據(jù)，從而控制或減少本地區(qū)動(dòng)物源細(xì)菌耐藥水平。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 大腸桿菌質(zhì)控菌ATCC25922為華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)藥理實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)，300株大腸桿菌由本實(shí)驗(yàn)室從貴陽(yáng)市的豬、雞及環(huán)境中分離得到，經(jīng)染色鏡檢和腸桿菌科生化編碼鑒定。

1.1.2 培養(yǎng)基 米勒-海頓瓊脂(MHA)、米勒-海頓肉湯(MHB)、麥康凱培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)瓊脂均購(gòu)自上海盛思生化科技有限公司。

1.1.3 藥物 阿莫西林、環(huán)丙沙星、土霉素、鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素和磺胺嘧啶鈉七種原料藥購(gòu)自上海盛思生化科技有限公司，恩諾沙星、氟苯尼考和頭孢噻呋鈉由貴州省獸藥監(jiān)察所提供。

1.1.4 主要儀器 恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、電子天平和多點(diǎn)接種器等。

1.2 方法

采用瓊脂稀釋法測(cè)定300株大腸桿菌對(duì)鏈霉素、卡拉霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、頭孢噻呋、阿莫西林、氟苯尼考、土霉素和磺胺嘧啶等10種抗菌藥物的MIC值。MIC值測(cè)定試驗(yàn)中所用的抗菌藥物按照美國(guó)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)2013年版標(biāo)準(zhǔn)配置并根據(jù)其標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀(見(jiàn)表1)。

2 結(jié)果與分析

2.1 大腸桿菌對(duì)10種抗菌藥的耐藥性

由圖1可知，大腸桿菌對(duì)10種藥物的耐藥率整體偏高，除慶大霉素接近50%外，土霉素和氟苯尼考超過(guò)80%，鏈霉素、頭孢噻呋、阿莫西林和磺胺嘧啶超過(guò)70%，恩諾沙星和環(huán)丙沙星超過(guò)60%。從大類(lèi)上看，耐藥率四環(huán)素類(lèi)>酰胺醇類(lèi)>發(fā)喹諾酮類(lèi)>磺胺類(lèi)>氨基糖苷類(lèi)。

2.2 各縣區(qū)大腸桿菌對(duì)抗菌藥MIC值統(tǒng)計(jì)結(jié)果

由表2和圖2可知，各縣區(qū)對(duì)10種藥物耐藥水平均較高，但也有自己的特點(diǎn)。各區(qū)縣對(duì)土霉素耐藥水平最高，其MIC50耐藥倍數(shù)均超過(guò)10倍，其次是阿莫西林和氟苯尼考，其MIC50耐藥倍數(shù)均超過(guò)6倍，各區(qū)縣對(duì)慶大霉素和磺胺嘧啶的耐藥水平較其他藥物抵；花溪區(qū)對(duì)鏈霉素、卡那霉素和頭孢噻呋耐藥水平高于其他區(qū)縣，白云區(qū)對(duì)環(huán)丙沙星和恩諾沙星的耐藥水平最高，因此，本地區(qū)細(xì)菌耐藥水平較高。

表1 抗菌藥物敏感性試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)

圖1 300株大腸桿菌的耐藥性統(tǒng)計(jì)結(jié)果

2.3 不同來(lái)源的大腸桿菌耐藥性統(tǒng)計(jì)

由表3可知，豬、雞源大腸桿菌對(duì)各種抗菌藥物的耐藥率和耐藥水平(平均耐藥倍數(shù))基本相同，對(duì)慶大霉素(豬、雞1.9倍)和恩諾沙星(豬、雞3.5倍)的較低；對(duì)阿莫西林(豬9.5倍，雞9.7倍)、土霉素(豬11.7倍，雞11.7倍)的平均耐藥倍數(shù)較高；環(huán)境中的大腸桿菌，即來(lái)源于規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)的總排污口，其耐藥水平除阿莫西林、磺胺嘧啶鈉外，均比豬、雞源的要高少許；由于耐藥基因可在環(huán)境中長(zhǎng)期存在，因此，環(huán)境是細(xì)菌耐藥性的儲(chǔ)藏和傳播的重要環(huán)節(jié)。

表2 各縣區(qū)大腸桿菌對(duì)抗菌藥的MIC值(ug/ml)

表3(續(xù)) 各縣區(qū)大腸桿菌對(duì)抗菌藥的MIC值

注：平均耐藥倍數(shù)=平均MIC值/耐藥標(biāo)準(zhǔn)值。

圖2 各區(qū)縣對(duì)不同藥物的平均MIC耐藥倍數(shù)

圖2(續(xù)) 各區(qū)縣對(duì)不同藥物的平均MIC耐藥倍數(shù)

抗菌藥物豬源(N=154)雞源(N=125)環(huán)境(N=21)平均MIC值平均耐藥倍數(shù)耐藥率(%)平均MIC值平均耐藥倍數(shù)耐藥率(%)平均MIC值平均耐藥倍數(shù)耐藥率(%)鏈霉素1544．874．71464．676．01534．890．5卡那霉素3225．065．62874．562．43054．876．2慶大霉素311．950．6311．948．0322．052．9環(huán)丙沙星153．867．5153．866．4164．076．2恩諾沙星143．573．4143．575．2143．577．1頭孢噻呋鈉1695．372．11916．083．22357．390．5阿莫西林3059．572．73099．777．62588．176．7氟苯尼考2738．585．72558．083．23079．681．0土霉素18811．785．718711．788．822013．895．2磺胺嘧啶鈉15263．874．715203．876．012383．173．8

2.4 多重耐藥情況統(tǒng)計(jì)(見(jiàn)圖2)

由圖3可知，300株大腸桿菌均為多重耐藥菌，至少耐二種藥，以耐8種與9種藥的百分率最高，分別占20.7%、20.3%，耐藥譜主要集中在耐5～10種之間，5耐及5耐以上的菌株所占百分比達(dá)91%，因此，多重耐藥嚴(yán)重。

圖3 多重耐藥情況

3 結(jié)論與討論

3.1 貴陽(yáng)市大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀

圖1表明耐藥率明顯高于敏感率，其中耐藥率超過(guò)80%的有土霉素(87.7%)和氟苯尼考(84.4%)；而敏感率(包括中度敏感率)除慶大霉素超過(guò)50%外，可作為臨床首選藥物。表1表明各區(qū)縣對(duì)土霉素耐藥水平最高，其MIC50耐藥倍數(shù)均超過(guò)10倍，其次是阿莫西林和氟苯尼考，其MIC50耐藥倍數(shù)均超過(guò)6倍，如果按照規(guī)定劑量用藥難以取得治療效果，因此耐藥形勢(shì)嚴(yán)峻。雞源和豬源大腸桿菌的耐藥情況相似，其中豬源耐藥率：對(duì)鏈霉素、慶大霉素和環(huán)丙沙星比韓偉[3]報(bào)道的低10%左右；對(duì)阿莫西林、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、卡那霉素和氟苯尼考比林居純[4]等報(bào)道的要高；對(duì)鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星和氟苯尼考比杜向黨[5]報(bào)道的要低許多，但頭孢噻呋卻要高11.2%。雞源耐藥率：對(duì)鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星和恩諾沙星比杜向黨[5]的要低許多，但氟苯尼考、頭孢噻呋卻高許多。對(duì)阿莫西林、環(huán)丙沙星和恩諾沙星比林居純[4]報(bào)道的低，但卡那霉素，氟苯尼考卻要高許多。由此可以看出，豬、雞及環(huán)境耐藥性在地區(qū)上的差異可能是不同地區(qū)在養(yǎng)殖模式和用藥習(xí)慣上的差異引起。

3.2 排污口樣品的意義

表2表明環(huán)境中的大腸桿菌總體耐藥水平略高于豬、雞的，但差異不大，而韓偉等[3]報(bào)道的環(huán)境中的大腸桿菌耐藥水平略低于豬。因此采樣時(shí)采集總排污口處的糞便可能更有代表性，更能代表該養(yǎng)殖場(chǎng)的耐藥水平，這可能與養(yǎng)殖場(chǎng)所有的豬、雞糞便排往總排污口及耐藥性能在環(huán)境中傳播有關(guān)。

本研究的總體結(jié)果與國(guó)內(nèi)外報(bào)道的健康人群及動(dòng)物腸道大腸桿菌的耐藥率均高于50%相符。耐藥性的各項(xiàng)指標(biāo)均比金凌艷等[6]報(bào)道的高，這可能與上海地區(qū)的養(yǎng)殖業(yè)比較發(fā)達(dá)、養(yǎng)殖技術(shù)水平高有關(guān)。

3. 3 應(yīng)對(duì)措施

廣大獸醫(yī)工作者在養(yǎng)殖業(yè)的管理及臨床用藥中，要規(guī)范使用抗菌藥，相關(guān)職能部門(mén)應(yīng)針對(duì)性的組織培訓(xùn)，增加用藥常識(shí)，合理用藥。實(shí)踐中有條件的可先對(duì)菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇 敏感的藥物，嚴(yán)格按說(shuō)明足量足療程使用或根據(jù)藥物的配伍禁忌聯(lián)合用藥；一方面可以充分發(fā)揮抗菌藥物之間的協(xié)同作用，增加療效；另一方面可以避免細(xì)菌長(zhǎng)期與某一種藥物接觸，增加產(chǎn)生耐藥性機(jī)率[7]。同時(shí)可推廣應(yīng)用中草藥和微生態(tài)制劑進(jìn)行治療[8]。再配合科學(xué)的飼養(yǎng)管理和加強(qiáng)環(huán)境消毒等措施，以達(dá)到最佳的治療效果，減少耐藥性的發(fā)生，保障養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

[1] Patrick Butaye， Engeline van Duijkeren， John F，etal. Antimicrobial resistance in bacteria from animals and the environment [J].VeterinaryMicrobiology， 2014， 171(3) ： 269 -272.

[2] Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standerds For antimicrobial susceptibility testing： twenty-third informational supplements： M100-$23 [s].WaynePA：CLSI， 2014： 80 - 84.

[3] 韓 偉，肖云民，顧 鳴. 供港豬飼養(yǎng)場(chǎng)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)情況分析[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2008，(4)：41-43.

[4] 林居純，卓家珍. 不同地區(qū)豬源和禽源大腸桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30(01)：86-88.

[5] 杜向黨，焦顯芹，陳玉霞，等. 河南地區(qū)雞豬源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測(cè)[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，30(6)：956-959.

[6] 金凌艷，顧 欣，蔡金華，等.上海市動(dòng)物源大腸桿菌耐藥性監(jiān)測(cè)[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2009(3)：31-32.

[7] 張廣群，王春光，張國(guó)磊，等. 55株豬源大腸桿菌的耐藥性監(jiān)測(cè)[J]. 中國(guó)動(dòng)物檢疫，2006，23(2)：34-35.

[8] 石錦良，劉學(xué)賢，龔建森. 微生態(tài)制劑與雞病防制[J].中國(guó)禽業(yè)導(dǎo)刊，2006(06)：32.

A Surveillance on the Antibiotic Resistance ofE.Coliin Guiyang City

JINZhi-qiang1，YINZe-dong2，TANAi-juan3

(1.AgricultureCommitteeofGuiyangCity,Guiyang,Guizhou550081,China; 2.GuizhouVocationalCollegeofAgriculture,Guiyang,Guizhou550345,China; 3 .CollegeofLifeSciences,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China.)

To investigate the antibiotic resistance ofE.Coliisolated from swine, chicken and environment in Guiyang City, 420 feces samples were collected and 300E.Colistrains were isolated and identified. The MIC values of the 300E.Colistrains to 10 antibiotics were measured with the method of solid agar dilution. The Mean drug resistance multiple, antibiotic sensitive rate, antibiotic resistance rate of the 300E.Colistrains were also analyzed. The results showed that the resistance levels of all strains to 10 antibiotics were quite high. Except the resistance rates to gentamicin, which was about 50%, the resistance rates of the 300 isolated strains to oxytetracycline and florfenicol were over 80%, to streptomycin, ceftiofur, amoxicillin and sulfadiazine were over 70%, toenrofloxacin and ciprofloxacin were over 60%,. All of the 300E.Colistrains were multiple-antibiotic-resistant, which mainly concentrated in 5-10 resistance. The resistance situation of E. Coli isolated from swine, chicken and environment in Guiyang City was considerable serious.

E.Coli； antibiotic resistance； solid agar dilution； multidrug resistant

2017-04-11；

2017-06-07

貴陽(yáng)市農(nóng)委科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目“貴陽(yáng)市屠宰場(chǎng)豬肉致病菌污染調(diào)查及防控措施研究” (筑科合(2010第12-1號(hào))。

S852.61

A

1008-0457(2017)04-0064-04 國(guó)際

10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2017.04.011

*通訊作者：譚艾娟(1963-)，女，白族，教授，主要研究方向：微生物與生化藥學(xué)；E-mail：ajtan@gzu.edu.cn。