李 琳 丁云錄 成光宇 李曉兵 李馳坤 歐喜燕 陳聲武

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130103)

清肝降濁顆粒對(duì)大鼠酒精性脂肪肝的保護(hù)作用

李 琳 丁云錄 成光宇 李曉兵 李馳坤 歐喜燕 陳聲武

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130103)

目的 探討清肝降濁顆粒在所用給藥劑量及給藥周期范圍內(nèi)對(duì)Wistar大鼠酒精性脂肪肝是否具有保護(hù)作用。方法 采用灌服56%乙醇+0.5 ml魚(yú)油的方法，誘導(dǎo)建立酒精性脂肪肝大鼠動(dòng)物模型。預(yù)防性給藥4 w后，檢測(cè)與酒精性脂肪肝密切相關(guān)的各項(xiàng)指標(biāo)。包括肝臟病理組織學(xué)檢查；血液生化學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)活性，乳酸脫氫酶(LDH)活性,總膽固醇(TC)含量,甘油三酯(TG)含量；肝臟組織中過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)含量，超氧化物歧化酶(SOD)活性，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH- PX)活性。結(jié)果 清肝降濁顆粒對(duì)酒精性脂肪肝動(dòng)物血清AST、ALT、LDH、TC和TG水平的異常升高均具有明顯的降低作用，與模型組比較差異顯著(P<0.01或P<0.05)；可以升高酒精性脂肪肝動(dòng)物肝組織中SOD和GSH- PX活性，降低LPO含量，與模型組比較差異顯著(P<0.01或P<0.05)；明顯改善肝臟病理變化。結(jié)論 清肝降濁顆粒具有保肝降酶、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、降低血脂含量、改善肝臟病理變化，從而達(dá)到防治酒精性脂肪肝的作用。

清肝降濁顆粒；酒精性脂肪肝

清肝降濁方是我院臨床應(yīng)用的驗(yàn)方，以長(zhǎng)白山代表藥材刺五加、五味子等6味藥材為基源，對(duì)痰證、虛損、胸痹等均有較好療效。降濁顆粒是新型中藥制劑，是降濁方經(jīng)過(guò)現(xiàn)代炮制技術(shù)制作成的顆粒劑。本研究旨在證實(shí)降濁顆粒對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠的保肝作用。

1 材料與方法

1.1 材料 清肝降濁顆粒，批號(hào)：20140310，由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)制劑中心提供。動(dòng)物：雄性清潔級(jí)Wistar大白鼠，體重(210±10)g，合格證SCXK- (吉)2011- 0004，購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。試劑與儀器：無(wú)水乙醇，規(guī)格：分析純，500 ml/瓶，批號(hào)：20131225，北京化工廠產(chǎn)品；奧帝利深海魚(yú)油膠囊，規(guī)格：1 000 mg/粒，批號(hào)：ADL20140105，澳大利亞澳力Australly- health藥業(yè)有限公司；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：140226；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：140303；乳酸脫氨酸(LDH)檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：140323；總膽固醇(TC)檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：140225；甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：140430，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品；Pr測(cè)試盒，批號(hào)：20140427、過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)測(cè)試盒，批號(hào)：20140321、超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒，批號(hào)：20140330、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH- PX)測(cè)試盒，批號(hào)：20140403，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

Junior全自動(dòng)分析儀，荷蘭威圖公司；BIO680酶標(biāo)儀，Japan BIO RAD公司；Biofuge Stratos臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)賀利氏公司產(chǎn)品；FSH- 2可調(diào)高速勻漿器，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司。

1.2 方法〔1～5〕

1.2.1 造模與給藥 大鼠60只隨機(jī)分為正常組、模型組、清肝降濁顆粒200、400、800 mg/kg 3個(gè)給藥劑量組，每組12只。除正常組外，其余各組大鼠每日上午8∶30灌胃給予56%乙醇+0.5 ml魚(yú)油1次，乙醇劑量開(kāi)始為7 g/kg，隨后每周遞增0.2 g/kg，共4 w。每天13∶00灌胃給予受試藥物1次，灌胃體積為10 ml·kg-1·d-1，每周稱(chēng)量體重1次。

1.2.2 指標(biāo)測(cè)定 ①實(shí)驗(yàn)結(jié)束，取血，分離血清，檢測(cè)血清中LDH、ALT、AST活性和TC、TG含量；②定量剪取肝組織制備組織勻漿，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定出10%肝組織勻漿中組織蛋白含量，檢測(cè)肝組織中LPO含量和SOD、GSH- PX活性；③肝臟病理組織學(xué)檢測(cè)：給藥周期結(jié)束，取試驗(yàn)動(dòng)物肝臟左側(cè)葉前1/3，10%甲醛固定，蘇木素- 伊紅(HE)染色切片，做病理組織學(xué)檢查。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組ALT、AST、LDH水平比較 清肝降濁顆粒800、400、200 mg/kg 3個(gè)給藥組動(dòng)物血清ALT、AST和LDH活性均非常明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 清肝降濁顆粒對(duì)酒精性脂肪肝大鼠血清ALT、AST和LDH活性的影響

與模型組比較:1)P<0.05；2)P<0.01，下表同

2.2 各組血清TC和TG水平比較 模型組TC、TG含量較正常組顯著升高(均P<0.01)，清肝降濁顆粒800、400 mg/kg兩個(gè)給藥組TC、TG含量顯著低于模型組(P<0.01或P<0.05)；200 mg/kg給藥組TG含量顯著低于模型組(為P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 清肝降濁顆粒對(duì)酒精性脂肪肝大鼠血清TC、TG含量的影響

2.3 對(duì)肝組織中SOD、GSH- PX活性和LPO含量的影響 清肝降濁顆粒800、400、200 mg/kg 3個(gè)不同給藥劑量組動(dòng)物肝組織中SOD活性均明顯高于模型組(P<0.01或P<0.05)；清肝降濁顆粒800、400 mg/kg劑量組GSH- PX活力明顯高于模型組(P<0.01和P<0.05)。模型組LPO含量明顯高于正常組(P<0.01)，而清肝降濁顆粒800、400、200 mg/kg 3個(gè)不同給藥劑量組動(dòng)物肝組織中的LPO含量均明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4 對(duì)肝臟病理組織學(xué)改變的影響 光鏡下觀察，脂肪肝模型組：肝索較紊亂，肝細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)呈網(wǎng)狀，疏松，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大小不一、數(shù)量不等的脂肪空泡，肝竇受壓，肝內(nèi)出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死，門(mén)管區(qū)有較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)。少數(shù)中央靜脈壁增厚，肝小葉內(nèi)纖維結(jié)締組織成分增多。清肝降濁顆粒800 mg/kg給藥組：肝索較規(guī)整，肝細(xì)胞腫脹和胞質(zhì)疏松程度明顯減輕，少數(shù)肝細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)脂肪空泡，未見(jiàn)肝細(xì)胞壞死，門(mén)管區(qū)無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)。清肝降濁顆粒400 mg/kg給藥組：肝索輕微紊亂，可見(jiàn)一些肝細(xì)胞輕度腫脹和胞質(zhì)疏松，少數(shù)肝細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)脂肪沉積，肝內(nèi)出現(xiàn)很少數(shù)點(diǎn)狀壞死，門(mén)管區(qū)可見(jiàn)少數(shù)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。清肝降濁顆粒200 mg/kg給藥組：肝索輕微紊亂，可見(jiàn)一些肝細(xì)胞輕度腫脹和胞質(zhì)疏松，少數(shù)肝細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)脂肪沉積，肝內(nèi)出現(xiàn)很少數(shù)點(diǎn)狀壞死，門(mén)管區(qū)可見(jiàn)少數(shù)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。相比較而言，清肝降濁顆粒800 mg/kg給藥組治療脂肪肝的作用效果最明顯，清肝降濁顆粒400 mg/kg和200 mg/kg兩個(gè)給藥組也有較好效果。見(jiàn)圖1。

表3 清肝降濁顆粒對(duì)酒精性脂肪肝大鼠肝組織SOD、GSH- PX活性及LPO含量的影響

圖1 各組大鼠肝臟病理組織學(xué)改變

3 討 論

在動(dòng)物行為學(xué)方面，正常組大鼠皮毛光澤，行動(dòng)靈活，攝食飲水及大便排泄正常。模型組動(dòng)物在每日灌服酒精后，先出現(xiàn)興奮，在籠內(nèi)奔跑，甚則相互嘶咬，隨后醉倒酣睡，約1～2 h后恢復(fù)常態(tài)；造模7 d左右，可見(jiàn)大便稀軟，毛發(fā)漸干枯、無(wú)光澤，飲食減少，體重增長(zhǎng)較正常組減小，有的反而下降。供試品清肝降濁顆粒800 mg/kg和400 mg/kg給藥組動(dòng)物一般情況好于模型組，醉酒癥狀出現(xiàn)較晚、表現(xiàn)較輕，精神、活動(dòng)較好。

AST、AST及LDH作為反映肝臟損傷的重要指標(biāo)，其活性值升高在一定程度上反映了肝細(xì)胞損傷、壞死的病理改變程度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，清肝降濁顆?？擅黠@降低酒精性脂肪肝大鼠血清中異常升高的ALT、AST和LDH活性，表明清肝降濁顆粒對(duì)酒精所致脂肪肝有很好的保護(hù)作用。

長(zhǎng)期反復(fù)灌入大量酒精可影響大鼠肝組織脂質(zhì)代謝，使血清脂質(zhì)含量升高，進(jìn)而導(dǎo)致脂肪肝〔6～9〕。試驗(yàn)結(jié)果表明清肝降濁顆?？梢越档途凭轮靖未笫笱可?，具有抑制肝臟脂肪堆積的作用。

LPO是生物膜中的多價(jià)不飽和脂肪酸自由基作用的產(chǎn)物，在脂肪肝形成過(guò)程中，LPO的含量隨脂肪肝的加重而升高〔10〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，清肝降濁顆粒能增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，提高肝細(xì)胞膜系統(tǒng)的穩(wěn)定性，從而阻止酒精對(duì)肝細(xì)胞的過(guò)氧化損傷。

綜上所述，清肝降濁顆粒具有保肝降酶、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、降低血脂、改善肝臟病理變化，從而達(dá)到防治酒精性脂肪肝的作用。

1 周曉蓉，龔作炯，袁光金，等.茶多酚及沒(méi)食子酸表沒(méi)食子酸兒茶素對(duì)實(shí)驗(yàn)性酒精性肝病大鼠肝臟的保護(hù)作用及機(jī)制研究〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2007;16(6)：840- 3.

2 潘 瑩，江海燕，丁國(guó)強(qiáng).大果山楂總黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性酒精肝損傷保護(hù)作用的研究〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)刊，2004;22(12)：2293- 311.

3 張 頻，龔作炯.腺苷蛋氨酸抗大鼠酒精性肝損傷的作用及機(jī)制〔J〕.中國(guó)臨床康復(fù)，2006;10(8)：123- 6.

4 Tsukamoto H,Reidlberger RD,French SW,etal.Long- term cannulation model for blood sampling and intragastric infusion in the rat〔J〕.Am J Physiol,1984;247(16):595- 9.

5 何 映，邱銀生，汪 暉，等.體內(nèi)外急性酒精性脂肪肝模型的研究〔J〕.中國(guó)藥師，2007;9(2):115- 7.

6 黃順玲，謝晃君，文體端，等.抗脂肪肝沖劑對(duì)大鼠乙醇性肝損害防治的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2001;11(6)：343- 4.

7 Kaplowitz N.Biochemical and cellular mechanisms of toxic liver injury〔J〕.Semin Liver Dis,2002;22(2)：137- 44.

8 唐望先，虞滌霞.肝炎平對(duì)急性肝損害時(shí)脂質(zhì)過(guò)氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998;27(1)：56- 8.

9 彭漢光，戴春林，魏 屏，等.加味四逆散保護(hù)肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2000;7(11)：25- 6.

10 吳東方，周本宏，羅順德，等.銀杏葉總黃酮對(duì)化學(xué)性肝損傷的影響〔J〕.中草藥，1997;28(6)：348- 9.

〔2017- 04- 18修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

吉林省教育廳“十二五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(吉教科合字(2013)第102號(hào))

成光宇(1971- )，男，副主任藥師，主要從事中藥方劑、天然藥物的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

李 琳(1975- )，女，主管藥師，主要從事中藥、天然藥物的藥理活性研究。

R285.5

A

1005- 9202(2017)15- 3674- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.014