趙 平 常培葉 蔣 鵬 格日勒

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

·心、腦血管及代謝性疾病·

CYP4F2基因多態(tài)性與冠心病的相關(guān)性

趙 平 常培葉1蔣 鵬 格日勒

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院心內(nèi)科，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

目的 研究CYP4F2基因多態(tài)性與冠心病(CAD)的相關(guān)性。方法 對285例漢族CAD患者(冠心病組)和264例非CAD患者(對照組)進(jìn)行問卷調(diào)查，采用高溫連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行基因擴(kuò)增和基因分型，分析CYP4F2基因的2個單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)rs1558139和rs2108622多態(tài)性與CAD的相關(guān)性。結(jié)果 CAD組吸煙史和體重指數(shù)(BMI)均顯著高于對照組(P<0.05)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL- C)CAD組顯著低于對照組(P=0.000)，CAD組男性患者比例明顯高于女性(P=0.001)；CAD組CYP4F2基因rs1558139的基因型頻率和等位基因頻率與對照組無顯著差異(P>0.05)，rs2108622的CC基因型頻率在CAD組和對照組間差異顯著(P<0.05)。結(jié)論 CAD患者的危險(xiǎn)因素是男性、有吸煙史、高BMI；CYP4F2基因rs1558139多態(tài)性與CAD無明顯相關(guān)性，CYP4F2基因rs2108622多態(tài)性與CAD相關(guān)，攜帶CC基因型的患者發(fā)生CAD的風(fēng)險(xiǎn)增加。

冠心??；CYP4F2基因；rs1558139;rs2108622

冠心病(CAD)的發(fā)病機(jī)制與一些基因的表達(dá)和調(diào)控有關(guān)。探討遺傳因素在CAD 發(fā)病機(jī)制中的作用已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素氧化酶 P450(CYP)基因多態(tài)性在CAD發(fā)病過程中起著重要作用〔1〕。CYP 是廣泛存在于生物體內(nèi)的一種血紅素- 硫鐵蛋白酶系。研究證實(shí)花生四烯酸在內(nèi)源性CPY家族基因作用下的產(chǎn)物20- 羥基二十碳四烯酸(20- HETE)在CAD的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用〔2〕。一項(xiàng)研究〔3〕在日本人群中發(fā)現(xiàn)CYP4F2基因rs1558139的多態(tài)性會影響20- HETE的生成。CYP4F2在基因水平上對冠心病遺傳易感性影響的具體調(diào)控機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。內(nèi)蒙古自治區(qū)是CAD高發(fā)地區(qū)，且有鮮明的區(qū)域聚集特征，可能具有不同的遺傳和環(huán)境背景。本研究探討內(nèi)蒙古自治區(qū)漢族人群CYP4F2基因多態(tài)性與CAD的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院2013年6月至2014年6月住院的漢族患者開展CAD流行病學(xué)調(diào)查，研究對象均無血緣關(guān)系，無異族通婚史，25～65歲，至少三代(祖父/母、父/母和子/女)從小生活在調(diào)查所在地區(qū)。所有參與者均知情同意。調(diào)查內(nèi)容包括一般情況和病史，包括性別、年齡、是否出現(xiàn)胸悶或胸痛、胸悶/胸痛發(fā)作頻率、次數(shù)、誘發(fā)因素、緩解因素、發(fā)作持續(xù)時間、心電圖特征、是否具有冠心病家族史、吸煙、飲酒史及血脂狀況。

1.2 病例組和對照組的診斷納入標(biāo)準(zhǔn) 冠狀動脈造影結(jié)果，嚴(yán)格依據(jù)以下診斷標(biāo)準(zhǔn)選取陽性病例(CAD組)：①心肌梗死患者；②冠狀動脈造影顯示冠脈狹窄≥70%，并有心肌缺血表現(xiàn)〔ST改變及(或)心絞痛〕。次選標(biāo)準(zhǔn)：冠狀動脈造影顯示：70%>冠脈狹窄≥50%，全部病例均符合1979年WHO缺血性心臟病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：在內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院就診的擬診CAD患者，經(jīng)冠脈造影檢查證實(shí)無狹窄病變；心電圖顯示沒有缺血性改變變。研究中排除了過量飲酒、腦卒中、嚴(yán)重肝腎疾病、甲狀腺疾病病史及惡性腫瘤的對象。共收集CAD組285例，對照組264例。

1.3 方法

1.3.1 血樣DNA的提取 采用試劑盒法進(jìn)行基因組DNA的提取并進(jìn)行DNA濃度、純度檢測。

1.3.2 連接酶檢測反應(yīng)(LDR)檢測rs1558139和rs2108622多態(tài)性

1.3.2.1 PCR擴(kuò)增SNP所在片段 PCR反應(yīng)體系如下：1倍緩沖液2 μl，20 ng模板1 μl，3 mmol/L Mg2+0.6 μl，2 mmol/L dNTP 2 μl，1 U Taq酶0.2 μl，1倍Q溶液4 μl，0.5p引物混合液2 μl，H2O 8.2 μl，總體積20 μl。PCR 反應(yīng)條件：起始95℃變性15 min，然后94℃ 30 s，62℃ 1 min，72℃ 1 min，反應(yīng)35個循環(huán)，最后72℃延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后用3%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物。

1.3.2.2 LDR進(jìn)行基因分型 反應(yīng)體系如下：1倍緩沖液1 μl，12.5 pmol/μl探針混合液1 μl，2 U連接酶0.05 μl，100 ng/μl PCR產(chǎn)物1 μl，H2O 6.95 μl，總體積10 μl。反應(yīng)條件：95℃ 2 min，94℃ 30 s，60℃ 2 min，反應(yīng)35個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，用GeneMapper 3.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和基因分型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)的組間比較進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床相關(guān)指標(biāo)比較 CAD組與對照組平均年齡、總膽固醇(TC)、 甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL- C)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。CAD組吸煙史、體重指數(shù)(BMI)均顯著高于對照組(P<0.05)。CAD組高密度脂蛋白膽固醇(HDL- C)顯著低于對照組(P=0.000)，CAD組男性患者比例明顯高于女性(P<0.01)，見表1。

2.2 兩組CYP4F2基因多態(tài)性 CAD組和對照組CYP4F2基因rs1558139和rs2108622等位基因頻率和基因型頻率的分布符合Hardy- Weinberg平衡。CAD組和對照組CYP4F2基因rs1558139的等位基因頻率和基因型頻率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，rs2108622的CC基因型頻率在CAD組明顯高于對照組(P<0.05)，rs2108622的等位基因頻率在CAD組和對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1 兩組臨床相關(guān)指標(biāo)比較

表2 兩組CYP4F2基因等位基因和基因型頻率比較〔n(%)〕

3 討 論

CAD是在遺傳和環(huán)境因素基礎(chǔ)上，多種危險(xiǎn)因素共同作用下發(fā)病的。傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素包括年齡、性別、家族史、吸煙、高血壓、糖尿病、肥胖、高膽固醇血癥等。近來研究發(fā)現(xiàn)新的危險(xiǎn)因素如感染及炎癥、促凝物質(zhì)、載脂蛋白(LP)a、高同型半胱氨酸(HCY)血癥等〔4〕。目前多個研究表明細(xì)胞色素酶P450基因與冠心病的發(fā)病有關(guān)〔5～7〕。有研究對花生四烯酸代謝途徑上的 CYP家族基因進(jìn)行多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn)CYP4F2基因的多態(tài)性和CAD等疾病的發(fā)生關(guān)聯(lián)密切〔8〕。研究發(fā)現(xiàn) CYP4F2 基因的多態(tài)位點(diǎn)會影響該基因的功能，從而影響花生四烯酸生成20- HETE〔9〕，而20- HETE在CAD發(fā)生發(fā)展中起重要作用〔2〕。

研究表明男性雄激素水平與心血管疾病相關(guān)，過高的激素水平可增加CAD的風(fēng)險(xiǎn)〔10〕。另外，男性是心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔11〕。女性CAD發(fā)病率較低，這和雌激素具有抗動脈粥樣硬化作用相關(guān)，但在絕經(jīng)期后發(fā)病率明顯增加〔12〕。吸煙是心血管疾病重要的危險(xiǎn)因素，煙草中的尼古丁作用于動脈內(nèi)膜，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)展。煙草煙霧中的一氧化碳、一氧化氮、氧自由基等物質(zhì)損害血管內(nèi)皮功能，促進(jìn)CAD的形成〔13〕。研究顯示戒煙可使心血管疾病患者死亡相對風(fēng)險(xiǎn)下降36%〔14〕。血脂代謝紊亂是CAD的重要危險(xiǎn)因素，血脂水平在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展方面起到了重要的作用。有研究發(fā)現(xiàn)低 HDL- C 可增加心血管事件的發(fā)病率〔15〕。本研究結(jié)果顯示，除HDL- C外CAD組與對照組各血脂比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能與患者前期使用他汀類等降脂藥物有關(guān)。超重與主要心腦血管的發(fā)病密切相關(guān)，BMI增加引起CAD和高血壓，并被認(rèn)為是高血壓、CAD的重要危險(xiǎn)因素〔16〕。

本研究提示CYP4F2基因的rs2108622與CAD相關(guān)，攜帶CC基因型的患者發(fā)生CAD的風(fēng)險(xiǎn)增加。欲證實(shí)CYP4F2基因在CAD中的作用需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)行相關(guān)的功能研究，以明確CAD的遺傳易感基因，進(jìn)而對易感人群進(jìn)行有效的疾病預(yù)防。

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〔2015- 12- 07修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(2013MS1154)

趙 平(1973- )，男，副主任醫(yī)師，主要從事冠心病、高血壓發(fā)病機(jī)制的研究。

R394.5

A

1005- 9202(2017)15- 3703- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.026

1 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科